不同劑量生理鹽水沖洗臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋的效果觀察

王運(yùn)平 ，楊凱平 ，孟德嬌 ，張偉強(qiáng) ，王曉麗 ，李世超

（中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)總醫(yī)院 武警總醫(yī)院 a.急診科；b.呼吸科，北京100039）

【學(xué)術(shù)爭(zhēng)鳴】

不同劑量生理鹽水沖洗臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋的效果觀察

王運(yùn)平a，楊凱平b，孟德嬌a，張偉強(qiáng)a，王曉麗a，李世超a

（中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)總醫(yī)院 武警總醫(yī)院 a.急診科；b.呼吸科，北京100039）

目的探討不同劑量生理鹽水沖洗臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋的應(yīng)用效果。方法將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋40個(gè)按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，并按生理鹽水沖洗劑量不同，組別命名為劑量 60 mL組、80 mL組、100 mL組、120 mL組，每組各10個(gè)。待臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞輸注完后，采用不同劑量的生理鹽水沖洗，沖洗后再注入20 mL生理鹽水，混勻后從中取0.5 mL注入乙二銨四乙酸二鉀抗凝管，從中取20 μL統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)，觀察比較4組制劑袋殘余細(xì)胞數(shù)。結(jié)果4組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=806.713，P=0.001），60 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)最高，80 mL組次之，100 mL組和120 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)最低，100 mL組和120 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論靜脈輸注臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞后，采用100 mL生理鹽水沖洗制劑袋，可減少制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)，確保臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞較充分輸入人體內(nèi)。

生理鹽水；沖洗；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；制劑袋

由于間充質(zhì)干細(xì)胞 （mesenchymal stem cell，MSC）具有自我復(fù)制、多向分化和免疫調(diào)控能力，可應(yīng)用于修復(fù)/替代受傷或病變的多種組織器官，從而為目前一些無法有效治愈的重大疾病如脊髓損傷、多發(fā)性硬化、老年性癡呆、帕金森氏癥等提出了嶄新的治療方案[1]。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord-derived mesenchymalstem cells，hUCMSC） 與其他組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，取材方便，免疫原性低，增殖分化能力旺盛，可塑性極強(qiáng)，因此，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸做為誘導(dǎo)分化的首選種子細(xì)胞，成為臨床和科研工作中間充質(zhì)干細(xì)胞的一個(gè)更佳來源[2]。間充質(zhì)干細(xì)胞移植途徑主要有腰椎穿刺、顱腦定位、球后注射、靜脈輸注等，其中靜脈輸注途徑操作簡(jiǎn)單、創(chuàng)傷最小，可反復(fù)操作，患者易接受，越來越多的被應(yīng)用于臨床及科研[3]。由于間充質(zhì)干細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)，具有較強(qiáng)的黏附性[4]，所以，當(dāng)輸注完畢會(huì)有相當(dāng)一部分細(xì)胞附著在制劑袋內(nèi)壁，有可能影響移植療效，為了盡可能的將細(xì)胞輸入人體，臨床常采用生理鹽水沖洗細(xì)胞制劑袋，但是需要多少劑量的生理鹽水能夠充分將細(xì)胞沖洗干凈，目前國(guó)內(nèi)外沒有相關(guān)報(bào)道。故本研究旨是探討不同劑量生理鹽水沖洗臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋的應(yīng)用效果，尋找較合適生理鹽水沖洗劑量。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 已輸注完畢的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋40袋，奧林巴斯公司生產(chǎn)的CX41型光學(xué)顯微鏡1臺(tái)，浙江求精醫(yī)用儀器廠生產(chǎn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法 將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋按照輸注完畢先后順序采用計(jì)算機(jī)生成的隨機(jī)數(shù)字隨機(jī)分為4組，并按生理鹽水沖洗劑量不同組別命名為劑量 60 mL組、80 mL組、100 mL組、120 mL組，每組各10個(gè)。由1名高年資護(hù)士按靜脈輸液常規(guī)操作給患者輸注臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，為確保干細(xì)胞的活性，靜脈輸入開始速度宜慢，5 min后患者無不適，可加快靜脈輸入速度[5]，靜脈輸入過程中輕彈細(xì)胞懸液袋及輸血器過濾網(wǎng)，120次/min，20 min內(nèi)靜脈輸入完畢[6]。每個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋靜脈輸入完畢，分別采用不同劑量生理鹽水沖洗，盡量將懸液袋內(nèi)壁殘留細(xì)胞沖洗干凈，然后每個(gè)制劑袋再注入20 mL生理鹽水，混勻后從中取0.5 mL注入乙二銨四乙酸二鉀抗凝管，從中取20 μL注入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，利用光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)干細(xì)胞數(shù)目[7]。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間計(jì)量資料的比較采用方差分析，兩兩比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

用光學(xué)顯微鏡觀察每個(gè)制劑袋殘留細(xì)胞情況，使用 60 mL、80 mL、100 mL、120 mL 4 種不同劑量的生理鹽水沖洗臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋后，制劑袋內(nèi)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的密集度隨著生理鹽水沖洗劑量的增加而逐漸減少。經(jīng)方差分析4組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=806.713，P=0.001），60 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)最高，80 mL組次之，100 mL組和120 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)最低，100 mL組和120 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 4組臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋的殘余細(xì)胞數(shù)比較（±S，個(gè)）

表1 4組臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋的殘余細(xì)胞數(shù)比較（±S，個(gè)）

注：*表示P<0.05，與60 mL組比較；#表示P<0.05，與80 mL組比較

組別 n 殘余細(xì)胞數(shù)60 mL 組 10 74 400.00±3 806.43 80 mL 組 10 26 060.00±5 436.34*100 mL 組 10 9 780.00±1 265.61*#120 mL 組 10 9 500.00±947.51*#F 806.713 P 0.001

3 討論

近年來，干細(xì)胞移植被廣泛應(yīng)用于心血管、肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)等疾病的基礎(chǔ)研究及臨床探索，干細(xì)胞移植的途徑有很多,如冠狀動(dòng)脈、心肌內(nèi)注射[8]、肝動(dòng)脈門靜脈、腹腔[9]、腰椎穿刺、顱腦定位、球后注射[10]、靜脈輸注等途徑。采用靜脈輸注的方式，可以反復(fù)、多次、無創(chuàng)進(jìn)行，是最便于應(yīng)用的移植方法[11]。Chu等[12]研究表明，靜脈注射移植人類神經(jīng)干細(xì)胞可以遷移和分化到老鼠大腦缺血灶，促進(jìn)功能恢復(fù)。步星耀等[13]取自體髂骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，采用直接移植、經(jīng)側(cè)腦室注入移植、經(jīng)腦脊液和靜脈注入移植對(duì)25例缺血性腦血管病患者進(jìn)行治療，治療后腦功能缺損均有改善，且未見不良反應(yīng)。另有研究顯示靜脈移植可避免損傷正常腦組織，且可以通過反復(fù)多次移植來彌補(bǔ)干細(xì)胞的缺乏[14]。

由于生理鹽水的滲透壓值和正常人的血漿、組織液相同，可以防止細(xì)胞破裂、脫水，故臨床上常用來沖洗輸液管路防止藥物間的相互作用。因?yàn)槟殠чg充質(zhì)干細(xì)胞具有較強(qiáng)的黏附性，靜脈輸注后容易殘留在制劑袋內(nèi)壁，所以在輸注干細(xì)胞后給予生理鹽水沖洗。采用合適劑量的生理鹽水沖洗，既能充分減少細(xì)胞殘留，提高干細(xì)胞移植療效，又可減少患者入體內(nèi)的液體負(fù)擔(dān)，降低醫(yī)療資源的浪費(fèi)。本研究使用 60 mL、80 mL、100 mL、120 mL 4 種不同劑量的生理鹽水沖洗臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制劑袋后，光學(xué)顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)制劑袋內(nèi)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的密集度隨著生理鹽水沖洗劑量的增加而逐漸減少。觀察每組制劑袋內(nèi)殘余細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示60 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)最高，80 mL組次之，100 mL組和120 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)最低，100 mL組和120 mL組制劑袋殘留細(xì)胞數(shù)的比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。理論上講，沖洗生理鹽水劑量越大，制劑袋內(nèi)殘留的細(xì)胞越少，但是會(huì)延長(zhǎng)靜脈輸注時(shí)間，增加患者液體負(fù)擔(dān)，浪費(fèi)醫(yī)療資源，因此靜脈輸注臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞后可用100 mL生理鹽水進(jìn)行沖洗。

[1]徐若男,施 明,王福生.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的特征及其臨床應(yīng)用前景[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2010,26(1):82-84.

[2]何萬里,李永海,楊軍政,等.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化心肌樣細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].解剖科學(xué)進(jìn)展,2015,21(1):80-86.

[3]陳玉梅,張麗賢,楊 彬,等.臍帶血干細(xì)胞移植治療肝硬化的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(2):227-230.

[4]王友臣,史恩祥.間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2011,27(20)：3806-3808.

[5]常玉蘭,楊巧芳.護(hù)士對(duì)醫(yī)療過程體驗(yàn)的調(diào)查研究[J].護(hù)理學(xué)報(bào),2014,21(24)：43-45.

[6]林 寧,楊曉鳳,呂 欣.異基因臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合移植治療假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥一例的護(hù)理[J].解放軍護(hù)理雜志,2010,27(5A):687-689.

[7]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第三版）[M].南京：東南大學(xué)出版社,2006:132-133.

[8]向 群,陸士娟.干細(xì)胞移植在心血管疾病應(yīng)用中急待解決的問題[J].中國(guó)組織工程研究,2012,16(32)：6800-6804.

[9]盧昆云,楊晉輝.干細(xì)胞移植治療肝硬化的移植途徑及優(yōu)缺點(diǎn)比較[J].臨床肝膽病雜志,2011,27(11)：1226-1232.

[10]趙 強(qiáng),金 華,李艷華.神經(jīng)干細(xì)胞治療脊髓損傷的現(xiàn)狀及移植途徑[J].生命科學(xué),2013,25(3):320-323.

[11]張學(xué)峰,張美榮,胡建霞.異種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈應(yīng)用的安全性[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2010,14(32):5971-5975.

[12]Chu K,Kim M,Park K I,et al.Human Neural Stem Cellsimprove Sensorimotor Deficits in the Adult Rat Brain with Experimental Focal Ischemia[J].Brain Res,2004,1016(2):145-153.

[13]步星耀,黃志起,張永福.骨髓基質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)特性及應(yīng)用研究[J].實(shí)用診斷與治療雜志,2004,18(1):35-38.

[14]Kokaia Z,Lindvall O.Stem Cell Repair of Striatal Ischemia[J].Prog Brain Res,2012(201):35-53.

R472.9

B

10.16460/j.issn1008-9969.2015.11.068

2014-06-16

武警總醫(yī)院院級(jí)課題（WZ20130306）

王運(yùn)平（1973-），女，河南許昌人，本科學(xué)歷，主管護(hù)師。

楊凱平（1964-），女，河北滄州人，本科學(xué)歷，副主任護(hù)師。

方玉桂 謝文鴻]