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      PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的價值探討

      2016-01-25 22:21:00張璐靚
      關(guān)鍵詞:臨床價值

      張璐靚

      鄭州市第九人民醫(yī)院 鄭州 450053

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      PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的價值探討

      張璐靚

      鄭州市第九人民醫(yī)院鄭州450053

      【摘要】目的探討PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的臨床價值。方法選取我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒44例為研究對象(觀察組),采用PCR定量檢測方法對腦脊液標(biāo)本的微量白血病細(xì)胞進(jìn)行檢測,同時選擇40例健康兒童為對照組,行相同的檢測。觀察比較2組檢查結(jié)果,并對急性淋巴細(xì)胞白血病患者中PCR陽性情況與腦脊液檢查結(jié)果、臨床癥狀出現(xiàn)時間等進(jìn)行對照。結(jié)果對照組均為PCR陰性,觀察組中16例(共26份腦脊液標(biāo)本)檢測為PCR陽性,其中TCRr陽性4例,IgH CDR-Ⅲ陽性16例。先于常規(guī)腦脊液檢查,同時與腦脊液檢測獲得陽性結(jié)果的分別有5例和9例。臨床癥狀出現(xiàn)前檢出、出現(xiàn)臨床癥狀后檢出陽性結(jié)果的患者分別有11例和3例。其余2例PCR陽性患者無臨床癥狀,且經(jīng)腦脊液檢查無異常。所有PCR陽性患者經(jīng)治療后均轉(zhuǎn)陰。結(jié)論P(yáng)CR方法能對早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞進(jìn)行較準(zhǔn)確的檢測,且檢查的敏感性較高,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的治療有一定的指導(dǎo)意義。

      【關(guān)鍵詞】PCR檢測;中樞神系統(tǒng)白血病;臨床價值

      研究證實(shí),中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病是造成急性淋巴細(xì)胞白血病患者復(fù)發(fā)的主要原因之一,嚴(yán)重影響患者的長期存活率[1]。本文就我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒為研究對象,探討PCR方法檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞的臨床價值。報告如下。

      1資料和方法

      1.1一般資料選取我院收治的急性淋巴細(xì)胞白血病患者44例為研究對象,本次參與調(diào)查研究的患者均為12歲以下,且所有患者均符合《小兒急性白血病診療建議》中制定的診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)[2]。男26例,女11例;年齡4~12歲,平均(7.3±1.4)歲。其中,36例處于疾病的緩解期,8例為治療期。選擇40例健康兒童作對照,男30例,女14例,年齡4~12歲,平均(7.1±1.5)歲。2組被檢測者在性別、年齡等方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

      1.2方法分別采集被檢測者的腦脊液標(biāo)本,每份4~6 mL,其中處于緩解期的急性淋巴細(xì)胞白血病患者每人采集3份腦脊液標(biāo)本,治療期患者和健康兒童每人采集1份腦脊液標(biāo)本,急性淋巴細(xì)胞白血病的患者和健康兒童分別采集116份和40份腦脊液標(biāo)本。將腦脊液進(jìn)行離心分離,獲得細(xì)胞沉淀物后加入蒸餾水(0.5 mL)混合至均勻,轉(zhuǎn)移到EPP endorf管中,水浴加熱15 min,冷卻后再次離心,去除細(xì)胞碎片,在上清液中加醋酸鈉與無水乙醇,二者的劑量分別為上清液的1/10和2倍,置于-20 ℃的冰箱中冷凍>2 h,再次離心,室溫下進(jìn)行干燥,并在TE10中溶解。

      以TD-Veq和TD-Jr作為PCR引物擴(kuò)增TCRr基因,以TD-V和TD-J擴(kuò)增IgH CDR-Ⅲ基因。將模板DNA加入反應(yīng)體系中,經(jīng)高溫(95 ℃)變性,加Taq dNA聚合酶以及石蠟封口,不同溫度下循環(huán)反應(yīng)(依次選擇93 ℃、55 ℃和72 ℃)后。將PCR反應(yīng)液與溴酚藍(lán)載樣液混合、點(diǎn)樣,在紫外檢測儀上觀察。

      2結(jié)果

      觀察2組PCR檢測結(jié)果可見,40例健康兒童檢測均為PCR陰性,44例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒中,16例(共26份腦脊液標(biāo)本)檢測為PCR陽性,其中TCRr陽性4例,IgH CDR-Ⅲ陽性16例。

      將急性淋巴細(xì)胞白血病患者中PCR陽性情況與患兒的腦脊液檢查結(jié)果、臨床癥狀出現(xiàn)時間等進(jìn)行對照,可見先于常規(guī)腦脊液檢查、同時與腦脊液檢測獲得陽性結(jié)果的分別有5例和8例,無陽性表現(xiàn)2例。先于臨床癥狀出現(xiàn)之前檢出、出現(xiàn)臨床癥狀后檢出陽性結(jié)果的患者分別有11例和3例。其余2例PCR陽性患者無臨床癥狀,且經(jīng)腦脊液檢查無異常。

      3討論

      白血病是臨床較常見的一種造血系統(tǒng)惡性腫瘤,對患者健康造成巨大威脅。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步和發(fā)展,急性淋巴細(xì)胞白血病的治療取得很大進(jìn)步,患者的完全緩解率、治療后生存時間等均顯著提高,但復(fù)發(fā)率仍高達(dá)30%~40%[3]。而研究證實(shí)微小殘留病是引起白血病復(fù)發(fā)的重要因素。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理構(gòu)造的特殊性常成為白血病復(fù)發(fā)的根源,研究認(rèn)為急性淋巴細(xì)胞白血病患者一半左右的B細(xì)胞,幾乎所有的T細(xì)胞內(nèi)均存在TCRr基因重排現(xiàn)象,而4/5的B細(xì)胞和1/10 T細(xì)胞均存在IgH CDR-Ⅲ基因(免疫球蛋白重鏈基因重排產(chǎn)生的第3互補(bǔ)決定區(qū))重排現(xiàn)象[4],通過PCR引物對其進(jìn)行體外擴(kuò)增則可對患者腦脊液中的微量白細(xì)胞進(jìn)行有效檢測。

      本文健康兒童的PCR檢測結(jié)果均呈陰性,而16例患者的檢測結(jié)果呈陽性,與常規(guī)腦脊液檢查結(jié)果及臨床表現(xiàn)對照后,只有2例不符合,且28.6%的患者檢測陽性先于腦脊液,78.6%的患者先于臨床癥狀出現(xiàn)。同時,考慮復(fù)發(fā)早期腦脊液中的白血病數(shù)量少,易漏診。故PCR檢測的敏感性更強(qiáng)。

      總之,PCR方法能對早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)微量白血病細(xì)胞進(jìn)行較準(zhǔn)確的檢測,對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的治療有一定的指導(dǎo)意義。

      4參考文獻(xiàn)

      [1]呂曉東,辛亞萍,丁晶,等.急性白血病骨髓中微小殘留病與中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的關(guān)系[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報,2014,17(17):59-60.

      [2]宋斌,陳雁.腦脊液Cystatin C對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的早期診斷價值[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,23(21):2 360-2 361.

      [3]徐翀,何妙俠,鄭建民.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病微小殘留病檢測及其進(jìn)展[J].海峽醫(yī)學(xué),2013,28(4):342.

      [4]羅建蓉,賈永前.實(shí)時熒光定量PCR在監(jiān)測微量殘留性白血病中的應(yīng)用[J].華西醫(yī)學(xué),2006,21(2):417-418.

      (收稿2015-03-15)

      【中圖分類號】R733.7

      【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

      【文章編號】1673-5110(2016)02-0102-02

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