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補陽還五湯對L-蛋氨酸致高脂血癥模型大鼠血脂水平作用的研究

黃月芳1樓招歡2鄧夢嬌3王 川2

目的觀察補陽還五湯對L-蛋氨酸（L-met）致高脂血癥大鼠模型血脂的調(diào)節(jié)作用。方法

大鼠；高脂血癥；補陽還五湯：蛋氨酸

動脈粥樣硬化（AS）是導(dǎo)致心腦血管疾病最嚴重的病理過程，由AS引發(fā)的多種心血管事件是導(dǎo)致死亡的主要原因之一[1]。研究[2]表明，血脂異常是形成AS導(dǎo)致系列心腦血管病的重要原因。高脂血癥可使血液處于“高黏滯血”狀態(tài)，損傷內(nèi)皮細胞及功能，誘發(fā)AS，導(dǎo)致冠心病、腦中風(fēng)等[3]。近年臨床觀察發(fā)現(xiàn)，蛋氨酸代謝產(chǎn)物-血清同型半胱氨酸（Hcy）[4]可通過促進AS形成[5]，誘導(dǎo)細胞凋亡而促進腦梗死的發(fā)生發(fā)展[6-7]。補陽還五湯（BYHWD）出自王清任的《醫(yī)林改錯》，具有益氣活血作用，是治療腦中風(fēng)后遺癥的經(jīng)典名方，具有改善側(cè)枝循環(huán)[8]、拮抗Hcy致動脈硬化[9]、調(diào)節(jié)異常血脂水平等作用[10]。本文觀察BYHWD對L-蛋氨酸（L-met）致血脂異常模型大鼠[11]血脂水平的調(diào)節(jié)作用，為進一步探討該方抗AS及腦中風(fēng)作用機制提供基礎(chǔ)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 SD大鼠，雄性，體質(zhì)量180～200g，60只，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號:0011214，許可證號:SCXK（浙）2014-0001。

1.2 實驗藥物及試劑 阿托伐他汀鈣膠囊（批號140710089，河南天方藥業(yè)股份有限公司），臨用前用蒸餾水配成1mg/mL溶液；L-蛋氨酸（批號141103，河南天興食品添加劑有限公司），臨用前用1%羥甲基纖維素鈉溶液配制成150mg/mL溶液；補陽還五湯組方藥材均購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)飲片有限公司，按組方比例（黃芪120g，當(dāng)歸尾6g，赤芍5g，川芎、紅花、桃仁、地龍各3g）取各藥材，加入藥材重量10倍體積的蒸餾水，回流提取2次，濾取藥液，減壓回收并適當(dāng)濃縮致2g（生藥）/mL，備用?？偰懝檀迹═C）試劑盒（批號20140901）、甘油三酯（TG）試劑盒（批號20140929）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒（批號20140825）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（批號20140815），均購自寧波美康生物科技股份有限公司。

1.3 實驗儀器 TBA-40FR全自動生化分析儀（東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會社）；Heraeus Biofuge Stratos冷凍離心機（德國Heraeus公司）。

2 實驗方法

2.1 分組及給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，按體質(zhì)量隨機分組分為正常組、模型組，阿托伐他?。?.01g/ kg）、補陽還五湯5、10、20g/kg劑量組6組，每組10只。各組均給予基礎(chǔ)飼料，實驗期間自由采食飲水。每天上午除正常組外，其余各組大鼠按3mL/只灌胃L-蛋氨酸溶液；下午給予相應(yīng)藥物，正常組和模型對照組按1mL/100g體質(zhì)量劑量給予蒸餾水，連續(xù)8周。2.2 血脂測定 于第0、2、4、8周眼眶采血2mL，室溫靜止2h后，3500r/min離心10min，取血清，全自動生化分析儀檢測血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平，計算動脈硬化指數(shù)（AI）=（TC-HDL）/HDL。

3 實驗結(jié)果

3.1 各組大鼠血清TC比較 給藥前，各組大鼠血清TC水平無明顯差異（孕＜0.05）；L-蛋氨酸造模第2周開始，模型組大鼠血清TC水平較正常組顯著升高（孕＜0.05，孕＜0.01）；給藥第2、4、8周，與模型組相比，阿托伐他汀組、補陽還五湯10、20g/kg劑量組大鼠血清TC水平顯著降低（孕＜0.05，孕＜0.01）；5g/kg補陽還五湯對TC有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（孕＞0.05），見表1。

3.2 各組大鼠血清TG比較 給藥前，各組大鼠血清TG水平均無明顯差異（孕＞0.05）；L-蛋氨酸造模第2周開始，與正常組相比，模型組大鼠血清TG水平顯著升高（孕＜0.05，孕＜0.01）；與模型組相比，給藥第2、4、8周，補陽還五湯10g/kg劑量組大鼠血清TG水平顯著降低（孕＜0.01），5g/kg劑量組在第4周血清TG水平顯著降低（孕＜0.05），見表2。

表1 各組大鼠血清TC水平比較（mmol/L，±s）

表1 各組大鼠血清TC水平比較（mmol/L，±s）

注:與正常組比較，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；與模型組比較，*孕＜0.05，**孕＜0.01；TC:總膽固醇

組別正常組模型組阿托伐他汀組補陽還五湯組劑量（g/kg）--0.01 5 10 20只數(shù)10 10 10 10 10 10給藥前1.58±0.14 1.61±0.10 1.59±0.22 1.63±0.17 1.55±0.14 1.55±0.18 2周1.59±0.21 1.78±0.27△1.57±0.18* 1.61±0.15 1.48±0.22** 1.53±0.18* 4周1.32±0.19 1.47±0.13△1.32±0.16* 1.44±0.18 1.21±0.14** 1.28±0.09** 8周1.41±0.07 1.59±0.12△△1.45±0.14* 1.51±0.17 1.35±0.08** 1.43±0.13**

表2 各組大鼠血清TG比較（mmol/L，±s）

表2 各組大鼠血清TG比較（mmol/L，±s）

注:與正常組比較，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；與模型組比較，*孕＜0.05，**孕＜0.01；與阿托伐他汀組比較，#孕＜0.05；TG:甘油三酯

組別正常組模型組阿托伐他汀組補陽還五湯組劑量（g/kg）--0.01 5 10 20只數(shù)10 10 10 10 10 10給藥前0.67±0.06 0.70±0.06 0.76±0.16 0.71±0.11 0.69±0.09 0.72±0.17 2周0.66±0.05 0.76±0.10△0.75±0.14 0.73±0.17 0.63±0.07*#0.74±0.12 4周0.56±0.12 0.78±0.15△△0.64±0.16* 0.68±0.09* 0.60±0.09** 0.63±0.15* 8周0.66±0.12 0.75±0.05△0.73±0.15 0.70±0.08 0.69±0.08*#0.74±0.10

表3 各組大鼠血清LDL-C比較（mmol/L，±s）

表3 各組大鼠血清LDL-C比較（mmol/L，±s）

注:與正常組比較，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；與模型組比較，*孕＜0.05，**孕＜0.01；與阿托伐他汀組比較，#孕＜0.05；LDL-C:低密度脂蛋白膽固醇

組別正常組模型組阿托伐他汀組補陽還五湯組劑量（g/kg）--0.01 5 10 20只數(shù)10 10 10 10 10 10給藥前0.26±0.08 0.26±0.06 0.26±0.08 0.28±0.09 0.31±0.10 0.28±0.09 2周0.20±0.04 0.29±0.06△△0.24±0.07* 0.28±0.06 0.18±0.05*#0.23±0.09 4周0.21±0.04 0.25±0.03△△0.22±0.03* 0.25±0.03 0.20±0.03** 0.19±0.04** 8周0.18±0.02 0.22±0.04△0.19±0.03* 0.21±0.05 0.16±0.03**#0.17±0.03**

表4 各組大鼠血清HDL-C比較（mmol/L±s）

表4 各組大鼠血清HDL-C比較（mmol/L±s）

注:與正常組比較，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；與模型組比較，*孕＜0.05；HDL-C:高密度脂蛋白膽固醇

劑量（g/kg）組別正常組模型組阿托伐他汀組補陽還五湯組--0.01 5 10 20只數(shù)10 10 10 10 10 10給藥前0.74±0.06 0.73±0.07 0.74±0.08 0.77±0.11 0.68±0.07 0.74±0.06 2周0.84±0.17 0.74±0.05 0.73±0.10 0.80±0.16 0.76±0.18 0.76±0.17 4周0.72±0.07 0.67±0.11 0.65±0.09 0.70±0.10 0.63±0.10 0.68±0.07 8周0.81±0.09 0.67±0.05△△0.74±0.08* 0.70±0.09 0.73±0.10* 0.72±0.10

3.3 各組大鼠血清LDL-C比較 給藥前，各組血清LDL-C水平均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（孕＞0.05）；造模第2、4、8周，與正常組相比，模型組血清LDL-C水平顯著升高（孕＜0.05，孕＜0.01）；與模型組相比，給藥第2、4、8周阿托伐他汀組、補陽還五湯10g/kg劑量組大鼠血清LDL-C水平均顯著降低（孕＜0.05，孕＜0.01），補陽還五湯20g/kg劑量組在4、8周能顯著降低血清LDL-C水平（孕＜0.01），見表3。

3.4 各組大鼠血清HDL-C比較 給藥前，各組血清HDL-C水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（孕＞0.05）；L-蛋氨酸灌胃2周后，與正常組相比，模型組HDL-C有降低趨勢，至第8周HDL-C水平顯著降低（孕＜0.05）；與模型組相比，給藥第8周，10g/kg補陽還五湯能顯著升高血清HDL-C水平（孕＜0.05），見表4。

3.5 各組大鼠動脈硬化指數(shù)（AI）比較 給藥前，各組大鼠AI無明顯差異（孕＞0.05）；與正常組相比，造模第2、4、8周，模型組大鼠AI顯著增大（孕＜0.01）；與模型組相比，阿托伐他汀組AI有所降低，第2、8周差異有統(tǒng)計學(xué)意義（孕＜0.05，孕＜0.01）；補陽還五湯各劑量組在各給藥周期均能有效降低AI（孕＜0.05，孕＜0.01），見表5。

表5 各組大鼠AI比較（±s）

表5 各組大鼠AI比較（±s）

注:與正常組比較，△孕＜0.05，△△孕＜0.01；與模型組比較，*孕＜0.05，**孕＜0.01；與阿托伐他汀組比，#孕＜0.05；AI:動脈硬化指數(shù)

組別正常組模型組阿托伐他汀組補陽還五湯組劑量（g/kg）--0.01 5 10 20只數(shù)10 10 10 10 10 10給藥前1.13±0.18 1.21±0.26 1.14±0.34 1.21±0.35 1.28±0.32 1.11±0.20 2周0.93±0.16** 1.42±0.32△△1.16±0.18* 1.05±0.28** 0.97±0.19**#1.06±0.27** 4周0.84±0.18 1.23±0.37△△1.04±0.14 1.06±0.18 0.94±0.12* 0.89±0.13**#8周0.77±0.24 1.37±0.12△△0.97±0.25** 1.16±0.26* 0.88±0.29** 1.00±0.25**

4 討論

高脂飼料及高脂乳劑誘導(dǎo)的高脂血癥大、小鼠模型是目前常見的用于研究高脂血癥及AS的動物模型[12]，此外，L-met也能導(dǎo)致高脂血癥[10]。本研究結(jié)果表明，灌胃L-met 2周后，大鼠血清TC、TG、LDLC含量明顯升高（孕＜0.05，孕＜0.01），動脈粥樣硬化指數(shù)（AI）顯著增大（孕＜0.01），該作用可持續(xù)到第8周，提示灌胃L-met可成功復(fù)制高脂血癥大鼠模型，且可能誘發(fā)AS。

高脂血癥屬中醫(yī)“痰濁”、“眩暈”、“胸痹”等范疇，其發(fā)病與臟腑功能失調(diào)而產(chǎn)生的痰濁、瘀血等病理產(chǎn)物痹阻脈絡(luò)有關(guān)[13]。五臟調(diào)和則氣血生化有源，津液敷布順暢，百病不生；若臟腑功能失調(diào)，氣血運行不暢，津液敷布失常，則由濁生脂及痰，阻塞脈道以致瘀阻脈絡(luò)形成高脂血癥[14]。補陽還五湯中重用黃芪以大補脾胃之元氣，從而令氣旺則血行，瘀去則絡(luò)通，補氣而不傷正；當(dāng)歸長于活血，且有化瘀而不傷血之妙用，益血和營，使陰生陽長，氣旺血生；桃仁、川芎、赤芍、紅花用于助當(dāng)歸活血祛瘀，地龍以通經(jīng)活絡(luò)[15]，因虛致瘀之血得以行，共奏補氣活血、化痰調(diào)脂之功效。本實驗研究表明，實驗周期內(nèi)，10g/kg補陽還五湯能顯著降低模型大鼠血清TC、TG、LDL-C水平及AI（孕＜0.05，孕＜0.01），對HDL-C有升高作用（第8周差異有統(tǒng)計學(xué)意義，孕＜0.05），提示補陽還五湯對L-蛋氨酸誘導(dǎo)的大鼠高脂血癥具有良好的調(diào)節(jié)作用，對AS具有一定的防治作用。

阿托伐他汀是目前臨床常用的降血脂藥，主要適用于高膽固醇血癥。本實驗結(jié)果表明，在給藥第2周阿托伐他汀即可顯著降低模型大鼠血清TC、LDL-C水平（孕＜0.05，孕＜0.01），但對血清TG水平影響不大，僅在給藥第4周顯示出顯著的降TG作用。相比阿托伐他汀組，補陽還五湯10g/kg在實驗周期內(nèi)，對模型大鼠血清TC、TG及LDL-C水平均有一定的降低作用。給藥第2、8周補陽還五湯組大鼠血清TG、LDL-C水平與阿托伐他汀組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（孕＜0.05）。提示，在L-met誘導(dǎo)的實驗性高脂血癥中，補陽還五湯降血清TG的作用可能優(yōu)于阿托伐他汀。

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（收稿:2016-03-03 修回:2016-05-27）

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Effects of Buyang Huangwu Decoction on Lipid Levels in Rats with Hyperlipidaemia Induced by L-me-

HUANG Yuefang1,LOU Zhaohuan2,DENG Mengjiao3,WANG Chuan2. 1 Department of Neurology,the First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310006),China;2 Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China;3 Wenzhou Medical University,Wenzhou(325035),China

ObjectiveTo investigate the effect of Buyang huangwu decoction（BYHWD）on blood lipids levels in rats with hyperlipidaemia induced by L-methionine.MethodsHyperlipidaemia model rats were made by ig.L-methionine for 8 weeks on end,atorvastatin（0.01 g/kg）and BYHWD（5,10,20 g/kg）was administrated at the same time.At 2,4,and 8 weeks,blood samples were collected from venous sinus of eye-orbit in rats,and total cholesterol（TC）,triglycerides（TG）,low-density lipoprotein-cholesterol（LDL-C）,high-density lipoprotein-cholesterol（HDL-C）levels in sera were measured by fully automatic biochemical analyzer according to the kits instruction and atherosclerosis index（AI）was calculated.ResultsCompared with control group,the serum levels of TC, TG and LDL-C and AI in model rats at 2,4,and 8 weeks were significantly increased（TC：1.78 0.27 mmol/L,1.47 0.13 mmol/L,1.59 0.12 mmol/L;TG：0.76 0.10 mmol/L,0.78 0.15 mmol/L,0.75 0.05 mmol/L;LDL-C：0.29±0.06 mmol/L,0.25±0.03 mmol/L,0.22±0.04 mmol/L;孕＜0.05 or孕＜0.01;AI：1.42±0.32,1.23±0.37,1.37±0.12,孕＜0.01）. Compared with model group,BYHWT with dosage of 10,20 g/kg significantly lowered blood lipid levels and AI at2,4,and 8 weeks（TC with dosage of 10 g/kg：1.48±0.22 mmol/L,1.21±0.14 mmol/L,1.35±0.08 mmol/L；TC with dosage of 20 g/kg：1.53±0.18 mmol/L,1.28±0.09 mmol/L,1.43±0.13 mmol/L;TG with dosage of 10 g/kg：0.63±0.07 mmol/L,0.60±0.09 mmol/L,0.69±0.08 mmol/L;TG with dosage of 20 g/kg：0.63±0.15 mmol/L;LDL-C with dosage of 10 g/kg：0.18±0.05 mmol/L,0.20±0.03 mmol/L,0.16±0.03 mmol/L;LDL-C with dosage of 20 g/kg：0.23±0.09 mmol/L,0.19±0.04 mmol/L,0.17±0.03 mmol/L;AI with dosage of 10 g/kg：0.97±0.19,0.94±0.12,0.88±0.29;AI with dosage of 20 g/kg：1.06±0.27,0.89±0.13,1.00±0.25;孕＜0.05 or孕＜0.01）.ConclusionBYHWD has good effect on regulating blood lipids in rats with hyperlipidaemia induced by L-methionine and has certain preventive and therapeutic effect on atherosclerosis.

rats;hyperlipidaemia;buying huangwu decoction;methionine

浙江省自然科學(xué)基金項目（No.LY14H270008；No.LY15H280007）

1浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（杭州 310006）；2浙江中醫(yī)藥大學(xué)（杭州 310053）；3溫州醫(yī)科大學(xué)（溫州 325035）

樓招歡，E-mail:lou_jasmine@163.com

采用SD大鼠灌胃L-蛋氨酸溶液復(fù)制高脂血癥大鼠模型，造模同時給予阿托伐他汀（0.01g/kg）和補陽還五湯（5、10、20g/kg）干預(yù)，連續(xù)8周；在給藥前及給藥后2、4、8周采血，檢測各組大鼠血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平并計算動脈粥樣硬化指數(shù)（AI）。結(jié)果與正常組比較，L-蛋氨酸灌胃后，模型組大鼠血清TC[2周：（1.78± 0.27）mmol/L，4周：（1.47±0.13）mmol/L，8周：（1.59±0.12）mmol/L]、TG[2周：（0.76±0.10）mmol/L，4周：（0.78±0.15）mmol/L，8周：（0.75±0.05）mmol/L]、LDL-C[（2周：（0.29±0.06）mmol/L，4周：（0.25±0.03）mmol/L，8周：（0.22±0.04）mmol/L]水平明顯增高（孕＜0.05，孕＜0.01），動脈粥樣硬化指數(shù)（AI）（2周：1.42±0.32，4周：1.23±0.37，8周：1.37±0.12）顯著增大（孕＜0.01）；與模型組比較，補陽還五湯10、20g劑量能顯著降低模型組大鼠血清TC[10g：2周：（1.48±0.22）mmol/L，4周：（1.21±0.14）mmol/L，8周：（1.35±0.08）mmol/L；20g：2周：（1.53±0.18）mmol/L，4周：（1.28±0.09）mmol/L，8周：（1.43±0.13）mmol/ L]、TG[（10g：2周：（0.63±0.07）mmol/L，4周：（0.60±0.09）mmol/L，8周：（0.69±0.08）mmol/L；20g：4周：（0.63±0.15）mmol/L]、LDL-C[10g：2周：（0.18±0.05）mmol/L，4周：（0.20±0.03）mmol/L，8周：（0.16± 0.03）mmol/L；20g：2周：（0.23±0.09）mmol/L，4周：（0.19±0.04mmol/L，8周：（0.17±0.03）mmol/L]水平及AI（10g：2周：0.97±0.19，4周：0.94±0.12，8周：0.88±0.29；20g：2周：1.06±0.27，4周：0.89±0.13，8周：1.00±0.25；孕＜0.05，孕＜0.01）。結(jié)論補陽還五湯對L-met致異常的大鼠血脂水平具有良好的調(diào)節(jié)作用，對大鼠動脈粥樣硬化具有一定的防治作用。