肺癌胸腔積液液基細(xì)胞學(xué)與沉渣包埋的對(duì)比研究

魏麗

【摘要】 目的 探討胸水細(xì)胞診斷和離心沉渣病理診斷的差異及免疫組化標(biāo)記在胸水離心沉渣中應(yīng)用及意義。方法 122例原發(fā)性肺癌的胸腔積液的液基細(xì)胞片及其沉渣包埋HE、免疫組化切片， 行HE染色、鏡下觀察， 液基細(xì)胞片及沉渣包埋HE切片陽(yáng)性的病例， 進(jìn)行包埋沉渣的免疫組化標(biāo)記檢測(cè)。結(jié)果 122例原發(fā)性肺癌的胸腔積液， 液基細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性率為44.3%（54/122）；沉渣包埋HE及免疫組化聯(lián)合應(yīng)用證實(shí)明確46例發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞， 明確分型41例為轉(zhuǎn)移性腺癌， 3例為轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞癌， 2例為轉(zhuǎn)移性鱗癌， 陽(yáng)性率為37.7%；液基細(xì)胞學(xué)的陽(yáng)性病例中， 有10例為增生的間皮細(xì)胞， 陰性病例中又有2例明確發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。結(jié)論 原發(fā)性肺癌胸水液基細(xì)胞學(xué)檢查較沉渣包埋假陰性高， 漏診比率高， 沉渣包埋假陰性率低， 漏診及誤診減少， 并且明確腫瘤類型， 為臨床治療提供確切依據(jù)， 尤其是肺癌類型不定， 通過胸水沉渣包埋就能明確腫瘤類型， 避免患者通過穿刺活檢來明確類型而引起的痛苦及并發(fā)癥。

【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性肺癌；胸水；胸腔積液；沉渣包埋

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.05.018

胸腔積液是多種肺部疾病的常見并發(fā)癥， 也是驗(yàn)證病因、診斷其良惡性的重要手段。細(xì)胞病理學(xué)是其重要的診斷方法， 但胸水細(xì)胞形態(tài)與原發(fā)灶不同， 易造成假陰性、假陽(yáng)性， 而導(dǎo)致延診、誤診、誤治。因此要尋求有效的提高肺癌的診斷陽(yáng)性率的有效手段， 提高肺癌患者存活率及治愈率。現(xiàn)收集本院2013～2015年肺癌的胸腔積液的液基細(xì)胞片及離心沉渣細(xì)胞片， 探討胸水細(xì)胞診斷和離心沉渣的病理診斷的差異及免疫組化標(biāo)記在胸水離心沉渣中應(yīng)用及意義。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 收集鄭州市第三人民醫(yī)院病理科2013～2015年共計(jì)122例原發(fā)性肺癌的胸腔積液的液基細(xì)胞片及其沉渣包埋HE、免疫組化切片。

1. 2 方法

1. 2. 1 胸水液基細(xì)胞制片 取胸水15 ml于試管， 3000 r/min， 離心5 min， 棄上清液， 取沉渣放于非婦科液基保存液中， 進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)的自然沉降制片， 95%乙醇固定， HE染色， 光鏡觀察。

1. 2. 2 沉渣包埋 取胸水100 ml， 再加入0.5 ml冰醋酸， 靜置5 min， 3000 r/min， 離心5 min， 棄上清液， 加入95%的酒精靜置20 min， 棄酒精， 取沉渣用濾紙包裹， 用中性福爾馬林固定， 常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片， HE染色， 光鏡觀察。

1. 2. 3 免疫組化檢測(cè) 石蠟切片厚4～5 μm， 采用SP法操作按試劑盒說明書進(jìn)行， 每組均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照片。所選一抗CK7、NapsinA、TTF-1、Syn、CR、WT-1、CD163、P63及P40（試劑及試劑盒均購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)開發(fā)公司）， 復(fù)染、脫水、透明、封片。

1. 2. 4 免疫組織化學(xué)結(jié)果的判定 TTF-1、P40、WT-1及P63以細(xì)胞核著棕黃色為陽(yáng)性， NapsinA、Syn、CR和CK7以胞質(zhì)著棕黃色為（+）。

2 結(jié)果

2. 1 胸水液基細(xì)胞學(xué)結(jié)果 122例原發(fā)性肺癌的胸腔積液， 液基細(xì)胞學(xué)觀察68例未見癌細(xì)胞， 31例發(fā)現(xiàn)異型細(xì)胞不能排除癌， 23例發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞， 陽(yáng)性檢出率為44.3%。細(xì)胞形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)移性腺癌：瘤細(xì)胞單個(gè)或成群排列， 成群細(xì)胞互相重疊， 呈桑葚狀， 許多細(xì)胞胞漿空泡、偶爾為較大的空泡， 核常折疊或呈鋸齒狀 ， 核膜明顯， 染色質(zhì)呈顆粒狀、常有核仁。分化差的瘤細(xì)胞， 異型性更大， 核分裂象增多、排列較松散、較少重疊；轉(zhuǎn)移性鱗癌細(xì)胞：細(xì)胞形態(tài)大小不一， 形態(tài)學(xué)特征不典型；轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞癌：細(xì)胞形態(tài)小， 排列密集成團(tuán)、呈葡萄狀， 胞漿少， 漿內(nèi)無(wú)空泡， 多呈裸核， 核染色粗、未見核仁。

2. 2 沉渣包埋 HE染色 切片中細(xì)胞更豐富， 細(xì)胞排列在同一平面上， 染色清晰， 排列方式與細(xì)胞學(xué)相似， 但細(xì)胞立體感不如細(xì)胞制片。

2. 3 免疫組化結(jié)果 沉渣包埋HE及免疫組化聯(lián)合應(yīng)用觀察76例未見癌細(xì)胞， 46例見癌細(xì)胞， 其中41例為轉(zhuǎn)移性腺癌， 3例為轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞癌， 2例為轉(zhuǎn)移性鱗癌， 陽(yáng)性檢出率為37.7%， 其中胸水中轉(zhuǎn)移性肺腺癌TTF-1、CK7及NapsinA（+）；轉(zhuǎn)移性鱗狀細(xì)胞癌P63及P40（+）；轉(zhuǎn)移性小細(xì)胞癌Syn（+）。與液基細(xì)胞學(xué)的陽(yáng)性病例比較， 發(fā)現(xiàn)有10例細(xì)胞學(xué)陽(yáng)性病例為增生的間皮細(xì)胞， 細(xì)胞學(xué)陰性病例中又有2例明確發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞。沉渣包埋免疫組化結(jié)果與組織病理免疫組化結(jié)果一致。

3 討論

肺癌胸腔積液中癌細(xì)胞失去了原來組織及器官結(jié)構(gòu)的束縛而自由漂浮、增生繁衍， 失去了原來組織形態(tài)， 與原發(fā)灶不同， 因此單靠細(xì)胞形態(tài)來判斷良惡性診斷， 敏感性較低， 尤其早期癌細(xì)胞異型性不太明顯的時(shí)候， 需要與反應(yīng)性的間皮細(xì)胞鑒別， 單靠細(xì)胞學(xué)來明確診斷易造成假陰性， 而誤診、延診、誤治， 需免疫組織化學(xué)進(jìn)一步明確診斷。

常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片簡(jiǎn)捷方便、快速經(jīng)濟(jì)， 但是涂片厚薄不均、細(xì)胞重疊、結(jié)構(gòu)欠清晰， 再加上血性及炎細(xì)胞背景， 給診斷帶來干擾， 易造成假陰性。液基細(xì)胞學(xué)雖較傳統(tǒng)細(xì)胞涂片除去了血性背景， 細(xì)胞平鋪、薄， 但炎細(xì)胞是無(wú)法除去的， 陽(yáng)性檢出率降低。本研究也證實(shí)了細(xì)胞沉渣包埋所有細(xì)胞排列在同一平面， 細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、背景清楚， 再聯(lián)合應(yīng)用免疫組化可明確診斷、明確分型， 陽(yáng)性檢出率提高， 假陰性比率也降低， 也為鑒別診斷提供了重要依據(jù)[1， 2]。尤其是肺癌中以胸水為首發(fā)癥狀時(shí)， 肺癌類型不明確， 可以通過胸水沉渣包埋及免疫組化明確腫瘤類型， 減少了患者穿刺活檢的痛苦， 并且為患者的后期治療及臨床分期提供了確切的依據(jù)。

總之， 胸水的液基細(xì)胞學(xué)和沉渣包埋的聯(lián)合使用將有利于明確診斷， 且明確腫瘤分型， 癌細(xì)胞陽(yáng)性檢出率提高， 假陰性比率也降低， 避免誤診、延診、誤治， 為提高患者治愈率提供了有效的手段， 也為減少患者的痛苦提供了新的診斷手段。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳學(xué)敬， 周立娟 ， 曲楊， 等.沉渣包埋聯(lián)合免疫組化在胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌與胸膜惡性間皮瘤鑒別診斷中的應(yīng)用.診斷病理學(xué)， 2014， 21（5）：263-266.

[2] Lozano MD， Panizo A， Toledo GR， et al. Immunocytochemistry in the differential diagnosis of serous effusions： a comparative evaluation of eight monoclonal antibodies in Papanicolaou stained smears. Cancer， 2001， 93（1）：68-72.

[收稿日期：2015-09-29]