馬冰聰

阜蒙縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)站

農(nóng)殘快速檢測(cè)技術(shù)及常見問(wèn)題解決方法

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阜蒙縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)站

一、農(nóng)殘快速檢測(cè)原理

有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是我國(guó)目前使用量最大的農(nóng)藥，而且較多的是禁止使用在果品、蔬菜上的。該類農(nóng)藥在生物體內(nèi)可以與乙酰膽堿酯酶（Ache）結(jié)合，并不易分離，即乙酰膽堿酯酶的活性被抑制，致使人體神經(jīng)傳導(dǎo)中的乙酰膽堿不能水解而積累，神經(jīng)過(guò)度興奮，出現(xiàn)中毒癥狀甚至死亡?；诖嗽恚砸阴Ｄ憠A酯酶同蔬菜的萃取液反應(yīng)，若受到抑制即表示該萃取液中含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留，由于酶的活性被破壞，使之不能正常分解乙酰膽堿，根據(jù)乙酰膽堿酯酶活性變化程度來(lái)測(cè)定果品蔬菜樣品中的殘留農(nóng)藥。

二、農(nóng)殘快速檢測(cè)操作流程（以SJ-10農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀為例）

1.前期準(zhǔn)備

啟動(dòng)SJ－10農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀讓其自檢并預(yù)熱10～15分鐘，以確保光源穩(wěn)定；打開電腦，登錄復(fù)訊農(nóng)藥殘留檢測(cè)系統(tǒng)，進(jìn)行端口設(shè)置并連接檢測(cè)儀；對(duì)前一天對(duì)照液的參照值及檢測(cè)信息進(jìn)行清零。

2.對(duì)照液的制備及測(cè)試

對(duì)照液的制備：取酶100ul，緩沖液2.5毫升，加入比色皿中，混勻，再加入顯色劑100ul，底物20ul。搖勻后立即將比色皿放入儀器中1/1進(jìn)行對(duì)照測(cè)試，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在0.3～0.8之間，若超出此范圍，疑似操作有誤或顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需重做，直至合格后保存結(jié)果。

3.待測(cè)樣品信息的錄入

按待測(cè)樣品的編號(hào)順序錄入該樣品的生產(chǎn)單位，樣品名稱、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)等信息。

4.檢測(cè)樣品液的制備

(1)取2克果蔬樣品（葉菜剪成1厘米見方的小片，瓜果取1厘米見方的橫截面）放入三角瓶中，加入10毫升緩沖液，振蕩提取2分鐘后過(guò)濾，取出清夜即為待測(cè)試液。

(2)取酶100ul，待測(cè)液2.5毫升，加入比色皿中，混勻（靜置抑制10分鐘）后，加入顯色劑100ul，底物20ul。蓋上比色皿顛倒兩次后立即把比色皿放入儀器中進(jìn)行樣品測(cè)試。

5.農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果判定

(1)若樣品的抑制率小于50%，說(shuō)明試樣中的農(nóng)藥殘毒性小，該樣品合格。

（2）若樣品的抑制率大于或等于50%，說(shuō)明試樣中的農(nóng)藥殘毒性大，該樣品不合格，通知暫停交易，并進(jìn)行追蹤改進(jìn)和報(bào)告主管部門。

（3）若樣品的抑制率在40%～50%之間為疑似農(nóng)殘超標(biāo)樣品，需復(fù)查。如果復(fù)查后抑制率還是在40%以上，則需氣相色譜等儀器分析法作進(jìn)一步的確認(rèn)或通知暫停交易，并進(jìn)行追蹤改進(jìn)和報(bào)告主管部門。

三、常見的檢測(cè)結(jié)果異?，F(xiàn)象

1.假陽(yáng)性原因分析及解決方法

(1)檢查空白對(duì)照值是否正確。抑制率是樣品檢測(cè)值與空白對(duì)照值的比率，故空白對(duì)照值是檢測(cè)結(jié)果正確與否的關(guān)鍵。當(dāng)出現(xiàn)系統(tǒng)性的假陽(yáng)性（即全部或多數(shù)樣品是陽(yáng)性）時(shí)，應(yīng)首先檢查對(duì)照值是否正常和準(zhǔn)確。

(2)檢查取樣方法是否正確。取樣方法不當(dāng)會(huì)造成假陽(yáng)性，如生姜、蔥、蒜、韭菜、香菜等蔬菜因其本身含有對(duì)酶活性有影響的次生物質(zhì)，以上樣品應(yīng)使用整株浸泡法或沖洗法取樣。如果在浸泡或沖洗時(shí)樣品中汁液流出，檢測(cè)就會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。所以針對(duì)此類樣品，應(yīng)考慮出現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)是否為操作不當(dāng)所致。

(3)檢查反應(yīng)溫度是否一致。溫度對(duì)酶的活性和穩(wěn)定性影響很大，所以實(shí)驗(yàn)應(yīng)在恒溫條件下進(jìn)行。冬季，實(shí)驗(yàn)室如不能滿足恒溫條件，應(yīng)將10分鐘的酶反應(yīng)過(guò)程放在水浴鍋中進(jìn)行；夏季，室溫較高時(shí)酶液活性會(huì)隨著時(shí)間延長(zhǎng)而明顯下降。上午配制好的試劑，用在上午時(shí)做一般要比用在下午時(shí)做的對(duì)照檢測(cè)值大，若下午進(jìn)行檢測(cè)時(shí)沒(méi)有重新做對(duì)照檢測(cè)，結(jié)果常常會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。所以當(dāng)溫度有變化時(shí)，檢測(cè)前務(wù)必先做空白對(duì)照。

(4)檢查酶抑制反應(yīng)時(shí)間。抑制時(shí)間長(zhǎng)短影響酶的抑制率，隨著抑制時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率也隨之提高。如果樣品加入底物后沒(méi)有迅速放入比色池，延長(zhǎng)了酶反應(yīng)時(shí)間，結(jié)果就會(huì)同時(shí)出現(xiàn)多個(gè)抑制率為陽(yáng)性（實(shí)為假陽(yáng)性）。所以實(shí)驗(yàn)中必須使空白和樣品的反應(yīng)時(shí)間完全一致。

2.出現(xiàn)0.01%或負(fù)值的原因

檢測(cè)中出現(xiàn)多個(gè)0.01%或負(fù)值一般是因?qū)嶋H檢測(cè)吸光值大于對(duì)照檢測(cè)吸光值而造成的系統(tǒng)錯(cuò)誤。抑制率是樣品值與對(duì)照值比較而得到的，所以當(dāng)做對(duì)照檢測(cè)時(shí)加入的試劑量不準(zhǔn)確，導(dǎo)致測(cè)出的對(duì)照值小于實(shí)際值，就會(huì)出現(xiàn)抑制率中有多個(gè)0.01%的異?，F(xiàn)象。這種情況下首先要重做對(duì)照，并注意移液槍的使用方式，避免溶液洗空或推液不盡導(dǎo)致所取溶液體積不準(zhǔn)而造成檢測(cè)數(shù)據(jù)偏差。

3.個(gè)別通道無(wú)數(shù)值的原因

(1)當(dāng)比色池中某個(gè)通道紫外燈不亮，檢測(cè)時(shí)該通道將不會(huì)出現(xiàn)抑制率。所以如有通道無(wú)數(shù)值，先檢查速測(cè)儀器的紫外光燈光源是不是出現(xiàn)了故障。

(2)如果確認(rèn)儀器通道沒(méi)有出現(xiàn)故障，檢測(cè)人員應(yīng)再回想是否某個(gè)樣品未加入某類試劑（酶、底物、顯色劑）。