高效液相色譜法測(cè)定去痛片中四種成分的含量

齊學(xué)碩

哈藥集團(tuán)三精制藥四廠 黑龍江省哈爾濱市 150000

高效液相色譜法測(cè)定去痛片中四種成分的含量

齊學(xué)碩

哈藥集團(tuán)三精制藥四廠 黑龍江省哈爾濱市 150000

目的：使用高效液相色譜測(cè)定的方法對(duì)去痛片中所含有的非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因四種藥物組成成分的含量進(jìn)行測(cè)定。方法：在具體檢測(cè)過程中利用C8柱來執(zhí)行，使柱溫與室溫保持一致，然后使用己烷磺酸鈉甲醇溶液-磷酸鹽作為實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相，將其流速定義為1.3mL/min，另外其檢測(cè)波長(zhǎng)必須為220nm。其中緩沖液的濃度必須為0.005mol/L，溶液中的磷酸二氫鉀溶液濃度需為0.05mol/L，其中需呀含有1%濃度的三乙胺，最后使用磷酸對(duì)溶液的pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)，直至其pH值叨叨3.0，具體溶液比例需保持在75:25的狀態(tài)。結(jié)果：去痛片樣本中的四種藥物成分實(shí)現(xiàn)了完全分離，并能夠始終保持良好的線性關(guān)系，其中非那西丁的加樣回收率為99.4%，苯巴比妥的加樣回收率為100.1%，氨基比例的加樣回收率為99.4%，而咖啡因的比例為99.6%，RSD分別為0.90%、0.83%、0.70%和0.78（n=9）。結(jié)論：使用本方法進(jìn)行測(cè)定所取得的結(jié)果正確率高，操作方法簡(jiǎn)單，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)去痛片產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效控制的目的。

氨基比林；非那西?。豢Х纫?；苯巴比妥；高效液相色譜法

去痛片是一種含有多類藥物成分的復(fù)方藥物制劑，其中主要含有非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因四種成分，該藥物通常用于鎮(zhèn)痛治療，具有降溫解熱的功能，可以對(duì)頭痛、牙痛、關(guān)節(jié)痛等疼痛現(xiàn)象進(jìn)行有效緩解。而其中每種藥物成分的含量擁有非常嚴(yán)格的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，這樣才能保證該類醫(yī)藥產(chǎn)品的生產(chǎn)之質(zhì)量，以往人們會(huì)使用對(duì)其中的各項(xiàng)成分分別進(jìn)行含量檢測(cè)的方法，然而這種方法不僅操作過程比較麻煩，且測(cè)定過程還會(huì)受到一些外界因素影響，測(cè)定精確程度無法保證。本文將對(duì)使用HPLC方法對(duì)去痛片中四種成分含量進(jìn)行測(cè)試的具體方法進(jìn)行分析。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10AT全自動(dòng)高效液相色譜儀、島津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp檢測(cè)器，SIL-10ADvp自動(dòng)進(jìn)樣器，島津CLASS-VP色譜工作站；Agilent 1100全自動(dòng)高效液相色譜儀，Agilent Instr μment色譜工作站；Sartoriμs BP211D十萬分之一天平。

1.2 試藥

氨基比林、非那西丁、咖啡因、苯巴比妥對(duì)照品均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。去痛片樣品來源于2004年國(guó)家重點(diǎn)抽驗(yàn)品種的抽樣，共有6個(gè)廠家的9批樣品，編號(hào)A～J。磷酸二氫鉀、三乙胺為分析純，己烷磺酸鈉由山東省禹王實(shí)業(yè)總公司化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，磷酸為優(yōu)級(jí)純，甲醇為色譜純，水為PALL高純水。

1.3 對(duì)照品溶液的配制

取氨基比林對(duì)照品75mg、非那西丁對(duì)照品75mg和咖啡因?qū)φ掌?5mg，精密稱定，置于同一50mL容量瓶中，加甲醇5mL，超聲2min，再加25%甲醇適量，超聲2min，放冷至室溫，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻。另取苯巴比妥對(duì)照品15mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加甲醇2mL使溶解，再用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述2種對(duì)照品貯備液各5mL，置50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。

2 試驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱采用：（1）Inertsil C8柱（150mm×4.6mm，5μm）；（2）Venμsil XBP-C8柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫為室溫。流動(dòng)相為 0.005moI/L己烷磺酸鈉甲醇溶液-磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，含1%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）（25：75），流速為1.3mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。

2.2 樣品溶液配制

取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氨基比林75mg）置50mL容量瓶中，加甲醇5mL，超聲2min，再加25%甲醇適量，超聲5min，放冷至室溫，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3 色譜行為

色譜柱（1）上4成分的出峰順序分別為氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁，各組分峰的分離度均大于 2.2，理論板數(shù)均大于4000；色譜柱（2）上4成分的出峰順序分別為氨基比林、咖啡因、非那西丁和苯巴比妥，各組分峰的分離度均大于 2.5，理論板數(shù)均大于5000。

2.4 線性試驗(yàn)與范圍

對(duì)照品貯備液：取氨基比林、非那西丁各 150mg，咖啡因50mg，苯巴比妥15mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加甲醇10mL，超聲2min，再加25%甲醇適量，超聲2min，放冷至室溫，用25%甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取對(duì)照品貯備液1、2、3、5、10、15、20mL分別置于100mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋到刻度，搖勻。精密量取對(duì)照品貯備液2mL，3mL分別置25mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋到刻度，搖勻。分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

（1）精密稱取已知含量的樣品（D，E，F(xiàn)）各1份，照2.2項(xiàng)下制備成含氨基比林約為1.50mg/mL的溶液，每份樣品溶液分別精密量取5mL，分別置100mL容量瓶中，分別精密加入1.3項(xiàng)下的2種對(duì)照品貯備液各3mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得；（2）精密稱取已知含量的樣品（A，B，C）各1份，照2.2項(xiàng)下制備成含氨基比林約為0.15mg/mL的溶液，每份樣品溶液分別精取1份，等體積加入1.3項(xiàng)下的對(duì)照品溶液；（3）精密稱取已知含量的樣品（G，H，J）各1份，照2.2項(xiàng)下制備成含氨基比林約為1.50mg/mL的溶液，每份樣品溶液分別精密量取3mL，分別置50mL容量瓶中，精密加入1.3項(xiàng)下的2種對(duì)照品貯備液各3mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻即得。分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法計(jì)算，得平均回收率：氨基比林為99.4%，咖啡因?yàn)?9.6%，非那西丁為99.4%，苯巴比妥為100.1%；RSD分別為0.70%、0.78%、0.90%和0.83%（n=9），結(jié)果表明，本法準(zhǔn)確度好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

選擇適當(dāng)容量的樣品J，按照2.2項(xiàng)中所敘述的配置方法制備出5份實(shí)驗(yàn)樣品，使用這5分樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可以測(cè)出四種成分非那西丁、苯巴比妥、氨基比林和咖啡因在藥物產(chǎn)品中的平均含量分別為96.7%、96.7%、97.3%和104.2%、，RSD分別為0.34%、0.89%、0.36%和1.90%，該結(jié)果說明使用此方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

在對(duì)這四種藥物成分的含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)需要首先對(duì)測(cè)定溶劑進(jìn)行選擇，由于這四種被測(cè)試成分的溶解性不同，在進(jìn)行測(cè)試之前需要先分別向這四種藥物成分中添加甲醇，然后結(jié)合超聲操作將藥品成分中的脂溶性物質(zhì)進(jìn)行分解；然后再向其中添加適量的濃度為 25%的甲醇再輔以超聲操作將成分中的水溶性物質(zhì)進(jìn)行分解，從而簡(jiǎn)化藥物樣品的制備過程，節(jié)約樣品制備時(shí)間。這種測(cè)定方法在使用過程中所需要的溶解量較小，對(duì)環(huán)境保護(hù)工作有十分積極的影響，促進(jìn)實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相與樣品進(jìn)樣后實(shí)現(xiàn)完美融合。

3.2 輔料的干擾

通過對(duì)參與實(shí)驗(yàn)的藥品樣本成分含量進(jìn)行分析，我們可以得出輔料不具有干擾性，該方法具備極好的專屬性，且實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度較好。

3.3 方法的耐用性

通過更換液相色譜儀的種類和生產(chǎn)廠家進(jìn)行反復(fù)試驗(yàn)，執(zhí)行對(duì)C8的測(cè)定工作，我們可以發(fā)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)都可以得到質(zhì)量較高的色譜行為，由此說明該試驗(yàn)方法具有非常強(qiáng)的耐用性。

3.4 兩種測(cè)定方法結(jié)果的比較

使用容量法對(duì)去痛片中的四種藥物含量進(jìn)行測(cè)定所得出的結(jié)果從總體上進(jìn)行對(duì)比高于本文中分析的高效液相色譜法，然而對(duì)于除咖啡因外的其他是那種成分這兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定，其結(jié)果之間并不存在很大差異，而使用藥品樣本不同會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生較大差異，由此可以得出使用容量法進(jìn)行成分測(cè)定結(jié)果會(huì)受到一定干擾產(chǎn)生誤差，特別是在對(duì)咖啡因成分進(jìn)行測(cè)定時(shí)。所以使用高效液相色普法對(duì)咖啡因成分進(jìn)行測(cè)定可以實(shí)現(xiàn)對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制的目標(biāo)。

[1]楊直，侯思恩.HPLC-ELSD法測(cè)定去痛片中氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁的含量[J].藥物分析雜志.2006（12）

[2]王桂芳，張守堯，賀巍.膠束動(dòng)電毛細(xì)管色譜法分離測(cè)定去痛片中的4種組分[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào).2000（04）

R927.2

A

1672-5018（2016）11-243-01