余春艷，梅娟

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快速準確術(shù)中新鮮標本冰凍切片方法探討

余春艷，梅娟

[摘要]目的：探討如何快速準確的做好術(shù)中冰凍切片。方法：采用Leica-CM1950型恒冷切片機和Leica-819一次性刀片對2005-2015年手術(shù)切下來的30 000多例新鮮標本進行常規(guī)冰凍切片取材、冷凍、切片、染色后封片。所用試劑的組成為：AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)、蘇木素染液、伊紅染液、梯度乙醇和二甲苯。結(jié)果：在臨床手術(shù)醫(yī)生和病理科的相互配合下，冰凍切片做的質(zhì)量又好又快。結(jié)論：要想快速準確的做好術(shù)中冰凍切片，臨床手術(shù)醫(yī)生和病理科的相互配合是必不可少的，另外病理技術(shù)人員在日常的工作中要不斷的總結(jié)經(jīng)驗，把冰凍切片質(zhì)量做到最好，才能為病理診斷的準確性提供保障。

[關(guān)鍵詞]冰凍切片； 制片； 病理診斷

術(shù)中快速冰凍是病理科非常重要的一項工作，它是病理科技術(shù)與水平的體現(xiàn)，也是一個醫(yī)院綜合醫(yī)療能力的體現(xiàn)，在臨床診療中起了極其重要的作用。術(shù)中快速冰凍是通過對手術(shù)切下來的新鮮標本進行快速冷凍切片來確定病變性質(zhì)的一個過程。如何能快速準確的做好術(shù)中冰凍切片，我們在長期的臨床工作中總結(jié)了一些經(jīng)驗，現(xiàn)報告如下。

1臨床手術(shù)醫(yī)生應(yīng)注意事項

1.1要在術(shù)前與患者及其家屬做充分的溝通告之他們什么是術(shù)中快速冰凍，以及做的目的是什么。由于冰凍診斷受時間和條件的限制，并不是所有冰凍的診斷率都能達到100%，會出現(xiàn)當時無法診斷需要等待第二天的石蠟結(jié)果，甚至有些石蠟結(jié)果也不能做出診斷，還需要結(jié)合免疫組化標記結(jié)果的，這些情況都應(yīng)向患者家屬告之。冰凍發(fā)報告時間為30 min左右，絕大部分報告都可以在這個時間內(nèi)發(fā)出，但如果遇到診斷具有一定難度需要重新多次取材的標本，時間肯定會延長，一旦出現(xiàn)這種情況，請患者家屬不要焦慮，相互理解并且耐心等待。

1.2不要把同一個患者的標本分為兩份送到不同的病理科這種情況看似不會發(fā)生，實際上在工作中就曾遇到過，不僅加重患者經(jīng)濟負擔，也給診斷帶來難度。此外送檢標本不應(yīng)過小，過小組織切片困難。組織塊一定要新鮮，忌浸入乙醇、4%中性甲醛固定液，避免過多的水分，防止組織脫水、冰晶形成和組織變形[1]。對于應(yīng)高度注意的病變部位，臨床醫(yī)生最好用扎線的方法標記出來以節(jié)省取材時間。

1.3術(shù)中冰凍切片申請單一定要規(guī)范書寫一定要用黑或藍黑筆認真工整填寫，姓名、性別、年齡、科室、床位、住院號、病變部位、臨床診斷尤其要準確填寫。送檢部位要標記明確，如果是單側(cè)，左與右一定要書寫清楚。如果是雙側(cè)的話，一定要用系線的方法來加以區(qū)分。但是線頭不能扎太多，以免影響取材。例如系線一側(cè)如果為左側(cè)，那么申請單上一定要寫上“系線者為左側(cè)”。并且“左”與“右”一定要書寫清楚。此外臨床病史一定要填寫清楚，對于患有“乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、結(jié)核”等傳染病的患者，一定要在冰凍申請單上填寫清楚，并用特別醒目的字體標示出來，以便于病理工作者做好防護。對于送檢部位比較多的標本，比如腫瘤組織的切緣，每一個切緣都應(yīng)單獨區(qū)分裝袋，并且袋上標簽都應(yīng)詳細填寫病人信息，不可填寫類似于“上、下、左、右”等字樣，以免和其他標本混淆。袋口一定要扎緊向上放，以防組織脫落。

2病理科應(yīng)注意事項

2.1取材仔細核對標本袋上信息與冰凍申請單信息是否吻合，如果遇到信息不吻合的標本要立刻與手術(shù)室醫(yī)生聯(lián)系。取材時應(yīng)用鋒利的刀，避免用鈍刀前后拉動或用力擠壓組織，引起組織結(jié)構(gòu)的變形和損傷。對于未做扎線標記的腫塊一定要多剖幾個面，例如甲狀腺微小癌腫塊，如不仔細極易漏取。對于醫(yī)生扎線的部位要重點取扎線處，但一定要剔除線頭，因為線頭會使組織塊切不完整，影響制片、診斷。組織塊要平整規(guī)則，避開壞死出血區(qū)，盡量剔除脂肪、毛發(fā)、硬骨、鈣化物[2]，最后組織塊大小以1.5 cm×1.5 cm×(0.3～0.4)cm為宜，過厚或過大都會延長組織冷凍時間，而過薄或過小會不利于切片。

2.2冷凍將冰凍機內(nèi)溫度調(diào)到適合于該組織切片的度數(shù)范圍內(nèi)，一般在-18℃～-25℃內(nèi)變動[3]。不同組織標本適宜切片溫度如下：甲狀腺-20℃～-18℃，含脂肪的乳腺-30℃～-22℃，脂肪組織-30℃以下，卵巢、膽囊、胃壁-22℃～-20℃[4]。首先在冷凍托上滴適量普通膠水或OCT(組織包埋劑)，再把組織放于其中央置于冰凍機內(nèi)。調(diào)整好厚度即開始切片，含淋巴組織結(jié)構(gòu)的組織一般切3 μm,甲狀腺、乳腺、肝臟等切4 μm，胃、腸、子宮、卵巢等可切4～5 μm,脂肪組織切5 μm以上[5]。最后由于冷凍機內(nèi)溫度過低，長時間的切片有可能會凍傷手，所以在做好工作的同時，也應(yīng)做好自我安全防護。

2.3切片當組織塊經(jīng)冷凍后顏色發(fā)白時，或者用鑷子觸碰發(fā)硬時即可以切片。切片時要緩慢勻速、用力均勻。含皮膚和鈣化區(qū)應(yīng)向上放置，軟組織向下放。對于囊壁含乳頭或息肉的組織，一定要把乳頭或息肉大部分暴露時才可以切片，比如甲狀腺乳頭狀癌、膽囊內(nèi)壁息肉、卵巢乳頭狀囊腺瘤/癌，如果只切出囊壁而未切出乳頭或切不全就容易誤診。另外對于切片需要特別注意的地方，醫(yī)生最好能特別交待一下技術(shù)員，比如微小癌的腫塊，經(jīng)過冷凍后顏色會發(fā)白，癌與周圍正常組織就很難區(qū)分，在看不清楚的情況下就有可能會將癌組織切掉。此外刀片一定要鋒利，鋒利的刀片切出的組織塊完整、厚薄均勻，鈍的刀片切出的組織易卷曲、破碎、布滿刀痕，顯微鏡下根本無法觀察。

2.4固定切下的組織迅速放入AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)中充分固定。

2.5染色首先入新配制的Harri’s(哈瑞士)蘇木精染色液染色2～4 min[6]，但在染之前一定要把表面的結(jié)晶給撈掉，否則大量的結(jié)晶會附著在組織上影響診斷。然后用體積分數(shù)1%鹽酸乙醇分化，水洗后放入40℃～60℃熱水中藍化。然后置入5～10 g/L伊紅染液10 s，水洗，體積分數(shù)80%～100%梯度乙醇脫水至二甲苯[4]。

2.6封片封片時中性樹膠不要滴的太多，過多會溢出玻片之外，影響美觀，過少組織就不能完全覆蓋，沒有折光率，無法診斷。最后貼上標簽即可診斷。

[參考文獻]

[1]侯巧艷，何雯，張美艷，等.不同組織的快速冰凍切片技術(shù)探討[J].廣西醫(yī)學(xué)，2008,30(10):1560.

[2]趙曼曼，張新新.快速冷凍切片技術(shù)的經(jīng)驗總結(jié)[J].臨床合理用藥，2010,3(7):32.

[3]王伯沄，李玉松，黃高昇，等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:88.

[4]許平，陳奎生，李晟磊，等.快速冰凍切片制備方法的改進[J].鄭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2010，45(2):241-243.

[5]繆勇建.如何做好術(shù)中冰凍切片[J]．廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，9(24)：343．

[6]許良中．實用腫瘤病理方法[M]．上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997：73．

(收稿日期：2015-12-23)

[中圖分類號]R 361.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-7044(2016)03-0321-02

DOI：10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.03.032

[作者簡介]余春艷(1983-)，女，技師，大學(xué)。

[作者單位] 蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 病理科，安徽 蚌埠 233000