儲(chǔ)甲松，張 揚(yáng)，江本利，蘇香峰，於 春，朱加保，張 翼

(1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院懈棉花研究所，安徽 合肥 230031；2.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)與信息研究所，安徽 合肥 230031）

羊肚菌人工栽培技術(shù)的幾個(gè)誤區(qū)*

儲(chǔ)甲松1，張 揚(yáng)2，江本利1，蘇香峰1，於 春1，朱加保1，張 翼1

(1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院懈棉花研究所，安徽 合肥 230031；2.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)與信息研究所，安徽 合肥 230031）

以四川綿陽食用菌研究所提供的羊肚菌菌株S1、S2和從安徽省岳西縣采集的野生羊肚菌分離出的菌株A1、A2作為母種，分別制成原種和栽培種，采用不同的栽培場地和栽培模式進(jìn)行比較試驗(yàn)，確定菌種的性質(zhì)、適宜的場地和適宜的栽培模式。結(jié)果表明，原種和栽培種菌絲后期有變淺黃現(xiàn)象者為優(yōu)質(zhì)菌種，土壤以泥沙壤最佳，應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)氐臍夂虿扇∠鄳?yīng)栽培模式。

菌株；母種；原種；栽培種；栽培模式

羊肚菌（Morchella conica） 被推為世界三大名食用菌之首，營養(yǎng)豐富。屬于子囊菌亞門（Ascomy cotina） 盤菌綱（Discomycetes） 盤菌目（Pezizales）羊肚菌科（Morchellaceae） 羊肚菌屬（Morchella），因外形酷似羊肚而得名[1，2]。

羊肚菌含有多種氨基酸，總氨基酸含量16.19%～19.50%，其中7種人體必需的氨基酸占氨基酸總量的34.97%～37.99%[3]。現(xiàn)代食品工業(yè)利用羊肚菌的菌絲通過發(fā)酵技術(shù)開發(fā)調(diào)味品和食品添加劑，成為現(xiàn)代食品工業(yè)中一個(gè)創(chuàng)新亮點(diǎn)[2]。

羊肚菌性平，味甘寒，無毒。羊肚菌最早收錄于李時(shí)珍《本草綱目》，具有補(bǔ)腎、補(bǔ)腦、壯陽和提神的功能。對(duì)頭暈失眠、消化不良、腸胃炎癥等有良好的輔助治療作用[2，4]。

由于羊肚菌有極高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，野生羊肚菌又極其稀少，因此中外科學(xué)家投入大量精力進(jìn)行人工栽培研究。早在1883年，英、美、法就開始了羊肚菌的人工栽培研究，直到1958年J.Szuecs首次在發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)出羊肚菌的菌絲體。20世紀(jì)80年代，美國舊金山Ronald Ower在室內(nèi)成功地栽培出羊肚菌，但該技術(shù)對(duì)外嚴(yán)格保密，是美國DNP公司的秘密，且在美國本土以外不能重復(fù)[5]。

我國羊肚菌的人工栽培研究起步較晚，20世紀(jì)50年代華中農(nóng)大楊新美教授提出相關(guān)的理論基礎(chǔ)和半人工栽培技術(shù)[1]。國內(nèi)許多研究者從羊肚菌的分類、成分、生態(tài)以及藥理方面做了相關(guān)的研究和報(bào)道[6－9]。目前人工栽培只限于野外仿生大棚栽培，且不能大面積栽培，還有相關(guān)的問題有待解決，如羊肚菌屬的物種形成機(jī)制知之甚少；人們對(duì)羊肚菌多樣化的生態(tài)特性所具有的生物學(xué)意義并不了解[9]等。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

尖頂羊肚菌菌株S1、S2由四川綿陽食用菌研究所提供，A1、A2采自安徽省大別山岳西縣，為野生尖頂羊肚菌自制菌株。

1.1.2 試驗(yàn)材料

蔗糖為分析純，瓊脂、過磷酸鈣、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1為生化試劑，石膏、棉籽殼、櫟木屑、麥麩、胡蘿卜、黃豆粉、白糖市場購買。

1.2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基

1.2.1 母種培養(yǎng)基及配置

改良PDA培養(yǎng)基：胡蘿卜200 g、黃豆粉20 g、蔗糖20 g、MgSO·7H2O 1 g、K2H2PO41 g、維生素B10.1 g、瓊脂20 g，水1 000 mL[10]。稱取干凈的胡蘿卜200 g，切成小方塊，加入黃豆粉20 g，加水煮沸25 min，四層紗布過濾，在濾液中加入瓊脂20 g、蔗糖20 g、MgSO4·7H2O 1 g、K2H2PO41 g、維生素B10.1 g，加熱至瓊脂溶解，添水至1 000 mL，pH值自然，將培養(yǎng)基分裝到18 mm×180 mm的試管（量為試管的1/5）和廣口瓶中（量為厚0.5 cm），于121℃，0.15 MPa高壓滅菌25 min，冷卻至35℃左右時(shí)取出，將試管排成斜面待其冷卻至常溫，和廣口瓶一道保存在15℃恒溫箱內(nèi)待用。

1.2.2 原種培養(yǎng)基配方及其配置

原種培養(yǎng)基配方：櫟木屑50%、棉籽殼30%、麥麩15%、石膏1%、白糖1%、過磷酸鈣1%、腐殖土2%[11]。將培養(yǎng)基加水拌勻至含水率65%，手抓緊培養(yǎng)基有水漬為準(zhǔn)。將培養(yǎng)基裝入17.5 cm×31 cm耐高壓菌種袋，于121℃，0.15 MPa滅菌2 h，冷卻至常溫待用。

1.2.3 栽培種培養(yǎng)基配方及其配置

栽培種培養(yǎng)基配方：棉籽殼75%、麥麩20%、石膏1%、過磷酸鈣1%、腐殖土3%[12]。將培養(yǎng)基拌勻加水至含水率65%，裝袋置于121℃，0.15 MPa滅菌2 h，冷卻至常溫備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 母種分離、培養(yǎng)

每年4月份將從岳西縣采集成熟的野生尖頂羊肚菌，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將羊肚菌用75%的酒精消毒30 s，無菌水沖洗3次~5次，再用無菌紙將水吸干，將菌帽和菌柄用無菌刀分開，將菌帽用無菌鐵絲倒掛于有培養(yǎng)基的廣口瓶內(nèi)，在18℃~20℃，光照4 500 lx環(huán)境中置放24 h，收集孢子，取出菌帽，待孢子萌發(fā)成絮狀菌絲后，用無菌接種針挑取菌絲轉(zhuǎn)到斜面試管純化，置于18℃~20℃環(huán)境中，1周左右長滿試管，選取試管內(nèi)菌絲粗壯、萌發(fā)旺盛的作為母種，將制好的母種置于3℃的恒溫箱中保存待用[10-12]。

1.3.2 原種制作

8月中旬，將上述制作好的原種培養(yǎng)基，在超凈工作臺(tái)或無菌接種箱內(nèi)分別接種A1、A2和S1、S2，母種在接種前要先活化，將恒溫箱溫度升至5℃放24 h，后放到10℃環(huán)境中48 h，再置于超凈工作臺(tái)24 h～48 h。每支母種可接5袋原種，接種后置于18℃~20℃的環(huán)境中，40 d左右菌絲長滿袋。后期觀察到接種A1的袋上部菌絲漸變?yōu)闇\黃色，A2菌絲白色，無變化，接種S1的袋上部菌絲變?yōu)闇\黃色，S2菌絲白色，無變化[10-12]。

1.3.3 栽培種制作

9月20日左右按上述栽培種配方制作好栽培種培養(yǎng)基，在接種箱中接入原種A1、A2、S1、S2，每袋原種可接50袋栽培種，接種后置于18℃~20℃的環(huán)境中，40 d左右菌絲長滿袋。同樣后期發(fā)現(xiàn)接種A1的袋上部菌絲漸變?yōu)闇\黃色，A2菌絲為白色，接種S1的袋上部菌絲為淺黃色，S2菌絲白色[10-12]。

1.3.4 羊肚菌栽培

11月份在岳西縣溫泉鎮(zhèn)斯橋村選水稻干田，翻耕耙細(xì)，將地整成寬1.2 m，溝寬30 cm，溝深15 cm地塊，在試驗(yàn)地四周挖深溝瀝水，深30 cm左右，搭棚蓋上遮陽網(wǎng)和大棚膜，在11月10日之前，地溫降到18℃以下時(shí)播種，播種時(shí)將地表土剝?nèi)ズ? cm于溝內(nèi)，撒上1%的石灰水，撒一層厚1 cm的經(jīng)121℃、0.15 MPa高壓滅菌2 h的栽培種培養(yǎng)基。再將栽培種去除塑料袋，用手將菌種掰成鵪鶉蛋大小的菌塊均勻撒在棉籽殼上，然后將溝內(nèi)的土覆蓋菌種厚3 cm，栽培完畢。栽培后若久晴不雨，地表發(fā)白，需在早晚灑水至土壤濕潤。當(dāng)冬季氣溫降到0℃以下結(jié)冰時(shí)，覆蓋稻草，第2年春天氣溫回升，地溫穩(wěn)定在0℃以上時(shí)揭去稻草。單個(gè)菌種栽培面積36 m2。每個(gè)菌種做3個(gè)重復(fù)，分2個(gè)大棚，都蓋遮陽網(wǎng)，其中1個(gè)不蓋塑料膜。

1.3.5 栽培試驗(yàn)

試驗(yàn)栽培種為S1、A1。試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，分別在沙地 （pH6.5）、山地 （pH6.4） 和水稻田（pH6.3），每個(gè)重復(fù)12 m2，大棚均蓋遮陽網(wǎng)和大棚膜，栽培技術(shù)同上。

2 結(jié)果分析

2.1 不是所有尖頂羊肚菌母種都能栽培出羊肚菌

不同菌種在遮蓋、不遮蓋塑料膜時(shí)出菇情況見表1。

表1 不同菌種在遮蓋、不遮蓋塑料膜時(shí)出菇情況（鮮重）

試驗(yàn)表明，菌種A2和S2的產(chǎn)量幾乎為零，也就是說在制作栽培種時(shí)，一定要選擇菌絲轉(zhuǎn)黃的原種制栽培種（表1）。因?yàn)槟阜N菌絲均為白色，無法分辨。將S1、S2、A1、A2的栽培種菌絲制成載玻片，通過體視顯微鏡觀察，S1、A1有大量菌核，而S2、A2只有很少量的菌核[13]，這表明菌核是羊肚菌出菇的關(guān)鍵條件之一[14]。

2.2 不是所有的場地都適合栽培羊肚菌

不同土壤對(duì)羊肚菌出菇的影響見表2。

表2 不同土壤對(duì)羊肚菌出菇的影響

不同場地栽培試驗(yàn)表明，水稻田更適合羊肚菌栽培，3個(gè)場地的pH值接近，但沙地不易涵水，菌絲易因干燥死亡，且沙地腐殖質(zhì)含量低；山地屬于沙土性質(zhì)，易干燥，腐殖質(zhì)含量不高；水稻田屬壤土性質(zhì)，保水保溫性能好，易于菌絲萌發(fā)生長，且水稻田土壤中有大量水稻根腐殖質(zhì)，是出菇量高的根本原因[15]。

2.3 栽培措施不同導(dǎo)致出菇量有較大差別

從表1可以得知，蓋大棚膜出菇量是不蓋膜的5倍左右，這是因?yàn)樵牢骺h屬北亞熱帶濕潤性季風(fēng)氣候區(qū)，年均降雨量1 445.8 mm，冬、春季降雨量較高，達(dá)到481.9 mm，菌絲容易澇死，而在四川綿陽不蓋膜產(chǎn)量影響不大，因?yàn)榫d陽冬季降雨量小。因此人工栽培羊肚菌要根據(jù)當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件決定栽培模式[11]。

3 小結(jié)

人工栽培羊肚菌要做到三關(guān)：一是制種關(guān)，要挑選原種菌絲后期變黃的菌種；二是場地選擇關(guān)，選擇壤土栽培；三是栽培模式關(guān)，根據(jù)當(dāng)?shù)貧夂蜻x擇是否覆蓋大棚膜，冬季氣溫低的地區(qū)要覆蓋稻草以防菌絲凍傷。只有把握好菌種關(guān)、場地關(guān)和栽培模式關(guān)，才能保證出菇品質(zhì)和產(chǎn)量。

[1]楊新美.中國食用菌栽培學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1988：537-540.

[2]劉景輝.羊肚菌的藥用價(jià)值研究[J].農(nóng)業(yè)開發(fā)與裝備，2013（12）：96.

[3]吳素蕊，候波，郭相，等.黑脈羊肚菌營養(yǎng)成分分析比較[J].食品科技，2011，36（7）：65-72.

[4]陳杭，鄭林用，趙艷妮.我國羊肚菌資源現(xiàn)狀及開發(fā)利用[J].中國食用菌，2014，33（2）：7-9.

[5]朱斗錫.羊肚菌人工栽培研究進(jìn)展[J].中國食用菌，2008，27（4）：3-5.

[6]張利平，陳彥，王子堯，等.羊肚菌胞外多糖免疫活性研究[J].中國食用菌，2009，28（3）：47-49.

[7]陳吉岳.羊肚菌科系統(tǒng)學(xué)、生態(tài)及生物地理學(xué)研究[D].昆明：中國科學(xué)院昆明植物研究所，2006.

[8]武秋立，安家彥.羊肚菌菌絲分型特征[J].大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，22（2）：132-134.

[9]杜習(xí)慧，趙琪，楊祝良.羊肚菌的多樣性、演化歷史及栽培研究進(jìn)展[J].菌物學(xué)報(bào)，2014，33（2）：183-197.

[10]黃冕，張松.尖頂羊肚菌母種培養(yǎng)基篩選[J].食用菌，2007（6）：32.

[11]朱斗錫.羊肚菌菌種制作技術(shù)[J].食藥用菌，2010（7）：12-14.

[12]趙琪，徐中志，程遠(yuǎn)輝，等.尖頂羊肚菌仿生栽培技術(shù)[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（6）：1690-1693.

[13]陳立佼，柴紅梅，等.尖頂羊肚菌單孢菌株群體營養(yǎng)特性研究[J].生物技術(shù)，2011，21（6）：63-69，70.

[14]劉士旺，梁宗琦，劉愛英，等.羊肚菌生活史中重要的組成部分—菌核[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997，25（2）：55-59.

[15]李書蘭，何曉娜，等.不同配方培養(yǎng)基對(duì)羊肚菌菌絲生長及菌核和子實(shí)體形成的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：2587-2588，2593.

S646.9

A

1003-8310（2016）05-0086-03

10.13629/j.cnki.53－1054.2016.05.022

安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（15A0729）。

儲(chǔ)甲松（1965－），男，本科，助理研究員，主要從事大型真菌人工栽培研究。E－mail:764414462＠qq.com

2016－06－22