謝美紅 蘇永華 張利媚 林超萍

臨床研究

淋球菌臨床分離株藥敏分析

謝美紅 蘇永華 張利媚 林超萍

目的明確本院淋球菌的耐藥情況及產(chǎn)青霉素酶的淋球菌(PPNG)和質(zhì)粒介導(dǎo)的耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)流行現(xiàn)狀，為臨床防治方案的制定提供依據(jù)。方法 運用VITEK2 Compact全自動微生物鑒定儀對2014年1月至2015年12月本院臨床分離菌株進(jìn)行菌種鑒定，采用瓊脂微稀釋法測定青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松和大觀霉素5種抗菌藥物對淋球菌進(jìn)行藥敏實驗，用紙片酸度定量法測定淋球菌株的β-內(nèi)酰胺酶。結(jié)果 183株受試淋球菌中檢出PPNG 57株(31.1%)，質(zhì)粒介導(dǎo)的TRNG 59株(32.2%);青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星耐藥率分別為91.8%、75.4%和97.3%;未檢出頭孢曲松耐藥菌株，低敏菌株檢出率為11.5%;未檢出大觀霉素耐藥及低敏菌株;青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星50%最低抑菌濃度(MIC50)及90%最低抑菌濃度(MIC90)值均已超過耐藥標(biāo)準(zhǔn);淋球菌多重耐藥菌株檢出率為91.8%(168/183)。結(jié)論 佛山地區(qū)淋球菌臨床分離株對青霉素和環(huán)丙沙星呈現(xiàn)高耐藥率，多重耐藥現(xiàn)狀嚴(yán)峻。

淋球菌;產(chǎn)青霉素酶的淋球菌;耐四環(huán)素淋球菌;藥敏分析;多重耐藥

淋病是指由淋球菌(Neisseria gonorrhoeae)感染引起的一種性傳播疾病，是全球主要性傳播疾病之一，目前在細(xì)菌性性傳播感染性疾病中流行率排第二，可引起尿道炎、宮頸炎等［1］。淋病的防治對于降低全球性傳播疾病發(fā)生率具有極其重要的意義。近年來，在抗菌藥物選擇壓力等多種因素的綜合作用下，淋球菌耐藥狀況日趨嚴(yán)峻，已成為淋病防治面臨的重要問題之一。基于此，本研究針對本院2014年

1月至2015年12月臨床分離的183株淋球菌進(jìn)行藥敏分析，旨在明確本院淋球菌的耐藥情況及產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG)和質(zhì)粒介導(dǎo)的耐四環(huán)素淋球菌(TRNG)的流行現(xiàn)狀，為臨床防治方案的制定提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 菌株來源 收集2014年1月至2015年12月本院患者送檢標(biāo)本，標(biāo)本經(jīng)患者泌尿道分泌物中分離獲得，女性患者標(biāo)本由宮頸口內(nèi)1～2 cm處取材，男性患者標(biāo)本由尿道口內(nèi)3～4 cm處取材，共分離出183株淋球菌，置于-78℃低溫冰箱凍存;質(zhì)控菌株為世界衛(wèi)生組織(WHO)淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株A、B、C、D、E、P，均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所提供。

1.2 主要試劑及儀器 VITEK2 NH細(xì)菌鑒定卡、VITEK2 Compact全自動微生物鑒定儀均購自法國生物梅里埃公司;青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松和大觀霉素5種抗菌藥物、GC瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及10%無菌脫纖維羊血均購自美國OXOID公司。

1.3 研究方法

1.3.1 菌株鑒定 臨床分離菌株采用VITEK2 NH細(xì)菌鑒定卡，經(jīng)VITEK2 Compact全自動微生物鑒定儀進(jìn)行菌種鑒定，證實為淋球菌。

1.2.2 藥敏試驗 采用WHO西太平洋地區(qū)淋球菌耐藥監(jiān)測規(guī)劃推薦瓊脂稀釋法［4］，測定抗菌藥物青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松和大觀霉素對受試淋球菌株的最低抑菌濃度(MIC)值?？咕幬餃y定濃度范圍分別為:青霉素0.015～64 mg/L，四環(huán)素0.5～32 mg/L，環(huán)丙沙星0.015～64 mg/L，頭孢曲松0.008～0.5 mg/L，大觀霉素4～128 mg/L。細(xì)菌接種量為1×107cfu/mL，以WHO淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株A、B、C、D、E、P為質(zhì)控菌株。

1.3.3 β-內(nèi)酰胺酶測定 采用紙片酸度定量法測定受試淋球菌株的β-內(nèi)酰胺酶，以WHO淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株E為陽性對照，以WHO淋球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株A為陰性對照。

1.3.4 結(jié)果分析 依據(jù)WHO西太平洋地區(qū)淋球菌耐藥監(jiān)測規(guī)劃推薦標(biāo)準(zhǔn)［2］判斷受試淋球菌株經(jīng)瓊脂稀釋法的藥敏檢測結(jié)果，結(jié)合β-內(nèi)酰胺酶測定結(jié)果，分析本院淋球菌耐藥現(xiàn)狀，以及PPNG和質(zhì)粒介導(dǎo)的TRNG流行現(xiàn)狀。

2 結(jié)果

2.1 PPNG和質(zhì)粒介導(dǎo)的TRNG檢出結(jié)果 綜合藥敏試驗結(jié)果及β-內(nèi)酰胺酶測定結(jié)果，183株受試淋球菌中檢出PPNG 57株(占31.1%)，質(zhì)粒介導(dǎo)的TRNG 59株(占32.2%)。

2.2 藥敏試驗結(jié)果 183株受試淋球菌對5種抗菌藥物的藥敏試驗結(jié)果顯示:5種抗菌藥物中，大觀霉素抗菌活性最強(qiáng)，未檢出耐藥菌株，敏感率為100%;頭孢曲松抗菌活性次之，未檢出耐藥菌株，敏感率為88.5%(162株)，低敏率為11.5%(21株);四環(huán)素抗菌活性較差，耐藥率為75.4%(138株)，其中質(zhì)粒介導(dǎo)的TRNG高達(dá)59株，占四環(huán)素耐藥菌42.8%(59/138);青霉素及環(huán)丙沙星抗菌活性極差，均未檢出敏感菌株，耐藥率分別高達(dá)91.8%(168株)和97.3%(178株)。青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星MIC50值和MIC90值均高于耐藥標(biāo)準(zhǔn)，其中青霉素和環(huán)丙沙星MIC90值已達(dá)耐藥標(biāo)準(zhǔn)［4］的32倍。見表1。

表1 183株淋球菌對5種抗菌藥物的MIC值分析

2.3 耐藥模式分析 183株受試淋球菌中，僅5株對5種抗菌藥物皆無耐藥表型，其余178株對5種抗菌藥物中的1種或1種以上呈現(xiàn)耐藥表型，耐藥菌株檢出率為97.3%(178/183);其中168株對5種抗菌藥物中的兩種或兩種以上呈現(xiàn)耐藥表型，多重耐藥菌株檢出率為91.8%(168/183)。由耐藥模式分析可知，178株受試淋球菌對5種抗菌藥物呈現(xiàn)3種耐藥模式，其中僅10株單一對環(huán)丙沙星耐藥，占耐藥菌株5.6%;其余均對兩種或兩種以上藥物耐藥，以同時對青霉素、四環(huán)素和環(huán)丙沙星耐藥模式為主，共檢出138株，占耐藥菌株77.5%;其次為同時對青霉素和環(huán)丙沙星耐藥模式，共檢出30株，占耐藥菌株16.9%。見表2。

表2 178株淋球菌對5種抗菌藥物3種耐藥模式

3 討論

淋病是我國法定的乙類傳染病，隨著臨床上廣譜抗菌藥物的大量使用，在抗菌藥物選擇壓力等多種因素綜合作用下，淋球菌耐藥狀況日趨嚴(yán)峻。通過測定5種抗菌藥物的MIC值，藥敏試驗結(jié)果顯示:青霉素耐藥率為91.8%(168/183)，四環(huán)素耐藥率為75.4%(138/183)，兩者M(jìn)IC50值和MIC90值均高于耐藥標(biāo)準(zhǔn)。雖然對青霉素和四環(huán)素的耐藥程度都處于較高水平，此兩種藥物也不再作為治療淋病的首選方案，但是PPNG和質(zhì)粒介導(dǎo)的TRNG流行率依然是淋球菌耐藥性流行病學(xué)監(jiān)測的重要指標(biāo)。本研究中，PPNG和TRNG檢出率為31.1%(57/183)和32.2%(59/183)，較近期廣州地區(qū)PPNG以及TRNG檢出率［3］稍低。

喹諾酮類抗菌藥物曾作為治療淋病無并發(fā)癥的臨床推薦一線藥物，它通過抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶從而抑制菌體DNA及蛋白質(zhì)的合成，但隨著全球許多臨床治療失敗病例的報道，該類抗菌藥物不再是治療淋病的有效藥物［4］。本研究中，環(huán)丙沙星耐藥率為97.3%(178/183)，MIC90值已達(dá)耐藥標(biāo)準(zhǔn)［1］的32倍。近5年來廣州地區(qū)淋球菌對環(huán)丙沙星耐藥率皆高于97%［5］，呈現(xiàn)持續(xù)高耐藥率，可見淋球菌對曾經(jīng)的臨床推薦一線藥物環(huán)丙沙星已呈現(xiàn)嚴(yán)峻的耐藥現(xiàn)狀，應(yīng)引起臨床足夠重視。

本研究中未檢出頭孢曲松耐藥菌株，但低敏菌株檢出率為11.5%(21/183)。雖然中國尚未有頭孢曲松臨床治療淋病失效的案例報道，但研究表明，近年來頭孢曲松MIC50、MIC90及低敏菌株正逐年增高［5-7］，建議加大頭孢曲松的肌注劑量，以減緩淋球菌頭孢菌素耐藥菌株的擴(kuò)散［8］。

WHO認(rèn)為，當(dāng)一種藥物的耐藥率超過5%時，該藥就不應(yīng)作為治療這類疾病的一線藥物。雖然近年來我國及其他國家偶有檢出大觀霉素耐藥菌株的報道，但耐藥率均＜ 5%［9-11］，大觀霉素依然是治療淋病的有效藥物。本研究中未檢出大觀霉素耐藥菌株，其活性較強(qiáng)，仍然是本地區(qū)初次治療淋病的首選藥物，也是頭孢菌素過敏患者的選擇藥物［12］。

本研究中耐藥模式分析表明，本地區(qū)淋球菌臨床分離株多重耐藥形式嚴(yán)峻，多重耐藥菌檢出率為91.8%(168/183)，占耐藥菌株的94.4%(168/178)。淋球菌出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象可能與mtr基因系統(tǒng)中某基因的突變、缺失或其編碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)不完整，從而使淋球菌對多種抗菌因子抵抗力增強(qiáng)有關(guān)［13-14］，在臨床治療中應(yīng)重視多重耐藥現(xiàn)象，并基于此現(xiàn)狀制定防治策略。

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(本文編輯:李銀平)

Analysis of susceptibility test in Neisseria gonorrhoeae clinical isolates

XIE Mei-hong1, SU Yong-hua1, ZHANG Li-mei1, LIN Chao-ping2.1Department of Clinical Laboratory, the First People's Hospital of Foshan Brain Rehabilitation Hospital, Foshan 528000, Guangdong, China2Department of Clinical Laboratory, the First people's Hospital of Foshan, Foshan 528000, Guangdong, China

ObjectiveTo investigate drug resistance of Neisseria gonorrhoeae and the prevalence of penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae (PPNG) and tetracycline-resistant Neisseria gonorrhoeae (TRNG) in Hospital so as to provide evidence for clinical prevention and treatment programs .MethodsSpecies identification of clinical isolates from January 2014 to December 2015 was performed using VITEK2 instrument . The drug susceptibility for Neisseria gonorrhoeae to 5 antibiotics (penicillin , tetracycline, ciprofloxacin, ceftriaxone and spectinomycin) were determined by agar dilution method and β-lactamase was measured by paper acidometric method .Results57 strains were PPNG (31.1%) and 59 strains were TRNG (32.2%) among 183 strains . The rates of resistance to penicillin , tetracycline and ciprofloxacin were 91.8%, 75.4% and 97.3%, respectively . Ceftriaxone resistant strain was no detected , the rate of low susceptibility to ceftriaxone was 11.5% . Spectinomycin resistant strain and its low susceptibility were no detected . MIC50and MIC90of penicillin, tetracycline and ciprofloxacin have exceeded the drug resistance standards . The rate for MDR was 91.8% (168/183).ConclusionsNeisseria gonorrhoeae showed high level of durg resistance to penicilin and ciprofloxacin and significantly high detection rate of MDR phenotype in Foshan .

Neisseria gonorrhoeae . penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae . tetracyclineresistant Neisseria gonorrhoeae . susceptibility testing . MDR

佛山市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研項目(2014182)

528000 廣東佛山，佛山市第一人民醫(yī)院腦科康復(fù)醫(yī)院檢驗科(謝美紅 蘇永華 張利媚) 528000 廣東佛山，佛山市第一人民醫(yī)院檢驗科(林超萍)

謝美紅，Email:694810749@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2016.04.002

2016-11-15)