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      HPLC法測(cè)定食品中的葉黃素含量

      2016-03-27 17:26:50張景艷廊坊市食品檢驗(yàn)所
      食品安全導(dǎo)刊 2016年24期
      關(guān)鍵詞:同分異構(gòu)葉黃素液相色譜儀

      □張景艷 廊坊市食品檢驗(yàn)所

      HPLC法測(cè)定食品中的葉黃素含量

      □張景艷 廊坊市食品檢驗(yàn)所

      葉黃素是存在食物中的色素,對(duì)人體健康有很大作用,通過研究食物中葉黃素的含量,近一步了解各種食物功能。高效液相色譜法是測(cè)定葉黃素的有效方法,不同種色素的波長(zhǎng)和極性存在差異,高效液相色譜正是根據(jù)這種差異來測(cè)定葉黃素的含量。葉黃素中存在著幾種同分異構(gòu)體,在高效液相色譜法測(cè)定葉黃素中會(huì)將這幾種同分異構(gòu)體分別檢測(cè)出來,但是本文只需要檢測(cè)食物中葉黃素整體的含量,所以不用顧慮同分異構(gòu)體的影響。

      葉黃素又稱胡蘿卜素,廣泛存在于蔬菜、水果和其他的食物中,人們通過進(jìn)食這些食物來補(bǔ)充體內(nèi)的葉黃素,進(jìn)而維持身體健康。據(jù)研究葉黃素的主要功能是抗氧化保持身體的年輕狀態(tài),還可以抵抗血管的硬化以及抗癌等功能,其中最主要的功能是保護(hù)眼睛,預(yù)防失明和視力下降。為了解各個(gè)食物中所含葉黃素的含量,筆者對(duì)高效液相色譜法測(cè)定食物中葉黃素含量進(jìn)行研究。

      關(guān)于高效液相色譜法

      高效液相色譜法(HPLC)是在經(jīng)典的色譜基礎(chǔ)上添加了氣相色譜的理論,技術(shù)方面在普通的流動(dòng)兩側(cè)加入高壓,使同種物質(zhì)在高強(qiáng)度的壓力作用下進(jìn)入相同的色譜柱,這個(gè)色譜柱中添加的是特殊類型的粒子,可以有效識(shí)別相應(yīng)成分。高效液相色譜法的主要優(yōu)勢(shì)為高壓、高速、高敏感性和高靈敏度,正是高效液相色譜法的這些優(yōu)勢(shì)才能用于測(cè)定食物中葉黃素的含量。需要注意的是,葉黃素在高溫的條件下容易發(fā)生構(gòu)象改變,因此,在處理葉黃素時(shí)需要在低溫環(huán)境下進(jìn)行。

      測(cè)定方法

      選取的設(shè)備和試劑

      必備的設(shè)備為高效液相色譜儀器、美國(guó)公司的分光光度計(jì)和二極管檢測(cè)設(shè)備,使用的試劑為甲醇、乙醚、石油醚、乙醇和幾種烷類物質(zhì)等,實(shí)驗(yàn)過程中的使用率要求為超高純度的水。以上設(shè)備和試劑準(zhǔn)備好后,需要配制葉黃素的標(biāo)準(zhǔn)溶液。首先將所要測(cè)量的食物融化成液體,放置在一定條件下,防止變質(zhì)。然后將標(biāo)準(zhǔn)的葉黃素5 mg放入100 mL容量瓶中,采用乙醇溶解,保持一定濃度后密封。1 d后,抽取葉黃素的乙醇儲(chǔ)備液,制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,采用二極管和高效液相色譜儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),以保證該溶液的準(zhǔn)確性。

      調(diào)節(jié)色譜和處理樣品

      不同顏色所對(duì)應(yīng)不同的元素,本文主要測(cè)定的是葉黃素,因此在液相色譜中需要調(diào)節(jié)一下色素的波長(zhǎng),設(shè)置為葉黃素波長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn),采用甲醇和醚類的流動(dòng)相,通過不同梯度來洗脫其他雜志留取葉黃素。測(cè)定葉黃素的標(biāo)準(zhǔn)為1 mL/min的流速、450 nm的波長(zhǎng)。樣品的前期處理需要在一定條件下進(jìn)行,要求高度閉關(guān)或需要紫外線的過濾燈光來處理,其主要目的是防止葉黃素發(fā)生結(jié)構(gòu)改變。將要測(cè)定的食物研磨成粉,稱取2 g加入10 mL的高純水中溶化,如果所要研究的食物為液態(tài)吸取10 g即可,將樣本放置于離心管中,在向管內(nèi)放置5 mL的四氫呋喃溶液,混勻,將乙醇溶液放置混合液中進(jìn)行震蕩1 min,待充分反應(yīng)后放入醚類的提取液10 mL,封好置于儀器中離心處理。待到一定時(shí)間后,將溶液取出再進(jìn)行上述步驟重復(fù)提取,將最終的提取液在氮?dú)猸h(huán)境下吹干,再次采用溶液溶解置于容器中,將溶液放置在高效液相色譜容器中進(jìn)行葉黃素的分析。

      結(jié)果分析

      溶液中的葉黃素在高效液相色譜儀的作用下與其他成分分離進(jìn)入到相應(yīng)的色譜柱中,測(cè)量相應(yīng)色譜柱中葉黃素的含量,就可以知道含有葉黃素的量。高效液相色譜儀是近些年來應(yīng)用十分廣泛的儀器,主要用于科學(xué)研究中,對(duì)我國(guó)的科學(xué)事業(yè)起著重要的推動(dòng)作用。葉黃素是廣泛存在于食物中的一種對(duì)人體有益的色素,對(duì)各種食物中葉黃素含量的測(cè)定有利于人們提取葉黃素,還可以通過食療的方法治療某些疾病。高效液相色譜儀是測(cè)量食物中葉黃素含量的有效方法,測(cè)量的步驟比較復(fù)雜,需要在一定條件下由專業(yè)人士進(jìn)行,為了保障結(jié)果的準(zhǔn)確性,工作人員要嚴(yán)格按照要求進(jìn)行。葉黃素存在同分異構(gòu)體,現(xiàn)階段在測(cè)定葉黃素中主要測(cè)定的是全反式結(jié)構(gòu)。因此,在結(jié)果上可能存在一定的誤差,但是這種誤差非常小,在允許的范圍之內(nèi)。

      結(jié)束語

      高效液相色譜法是測(cè)定食物中各種營(yíng)養(yǎng)成分的有效方法,本文主要研究其測(cè)定葉黃素的方法,主要從準(zhǔn)備物品、測(cè)定的步驟、和處理方法等幾個(gè)方面進(jìn)行了簡(jiǎn)單研究。希望通過本文的研究能夠幫助相關(guān)的工作人員提高其檢測(cè)的準(zhǔn)確性,同時(shí)是工作人員在使用高效液相色譜法測(cè)定相關(guān)物質(zhì)時(shí)能更加熟練。

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