賈文平　付志茹　姜巨峰　楊　華　孟一耕　蔡　超（天津市水產(chǎn)研究所　天津　300221）

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血鸚鵡紅、白兩個(gè)品系染色體核型分析

賈文平付志茹姜巨峰楊華孟一耕蔡超
（天津市水產(chǎn)研究所天津300221）

摘要：對(duì)血鸚鵡紅色和白色兩個(gè)品系的染色體組型進(jìn)行分析。采用植物血細(xì)胞凝集素和秋水仙素活體注射法，以血鸚鵡腎細(xì)胞為材料，制備染色體。結(jié)果表明，紅色血鸚鵡的核型：2n=48 10sm+ 38st NF=58白色血鸚鵡的核型：2n=47 19sm+28st NF=66。

關(guān)鍵詞：血鸚鵡；染色體；核型

染色體是遺傳物質(zhì)的主要載體，分析染色體組型有助于了解魚(yú)類的遺傳組成和發(fā)育機(jī)制，可為物種鑒定、雜交和多倍體育種提供科學(xué)依據(jù)。隨著我國(guó)休閑漁業(yè)的興起，觀賞魚(yú)繁育蓬勃發(fā)展，為漁民帶來(lái)可觀的收入。在色彩艷麗、形狀奇特的眾多觀賞魚(yú)品種中，來(lái)自中國(guó)臺(tái)灣血鸚鵡，成為一支突起異軍，市場(chǎng)占有率高，深得消費(fèi)者喜愛(ài)。血鸚鵡是紅頭麗體魚(yú)（Vieja synsppila Hubbs 1935）和橘色雙冠麗魚(yú)(Amphilophus citrinellus)的雜交品種，屬鱸形目(Percifoimes)、慈鯛科(Cichlidae)。俗稱紅財(cái)神、財(cái)神魚(yú)。由于品系管理缺失和盲目雜交原因，造成品系混亂，性狀穩(wěn)定性差，有關(guān)血鸚鵡細(xì)胞遺傳學(xué)研究鮮見(jiàn)報(bào)道。鑒于此，天津市水產(chǎn)研究所觀賞魚(yú)技術(shù)工程中心開(kāi)展血鸚鵡細(xì)胞遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究，旨在為今后開(kāi)展血鸚鵡品種鑒定及研發(fā)工作奠定基礎(chǔ)。

1　材料和方法

1.1材料

實(shí)驗(yàn)魚(yú)20尾，采自天津市里自沽農(nóng)工商實(shí)業(yè)總公司，體重在50-80g，暫養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室水族箱。

1.2方法

1.2.1制片：采用林義浩植物血細(xì)胞凝集素（PHA）體內(nèi)注射法，按10μg/g體重在實(shí)驗(yàn)魚(yú)胸鰭基部向魚(yú)體內(nèi)注射PHA。經(jīng)24H后注射秋水仙素，劑量2μg/g魚(yú)體重。再經(jīng)過(guò)4h小時(shí)，斷尾放血后，取魚(yú)的頭腎組織于有生理鹽水的培養(yǎng)瓶中，用鑷子撕碎組織塊，使之成為勻漿的組織液，靜置5min,待未碎的組織塊沉淀，用吸管收集上層勻漿的細(xì)胞懸液，加入離心管，以1000-1500r/min離心5min。低滲：從離心管中小心吸除上清液，加入0.0375mol/L氯化鉀（KCL）溶液低滲，將低滲液與細(xì)胞沉淀吹打均勻，室溫靜置50min。再加入0.5ml卡諾氏固定液，吹打均勻，以1500r/min離心5min。固定：從離心管中吸除上清液，加入卡諾氏固定液，吹打均勻后，靜置15-20min，以1500r/min離心5min。重復(fù)固定三次。經(jīng)三次固定后，從離心管中吸除上清液，再加入適量固定液，將細(xì)胞吹打均勻，采用冷片法滴片，過(guò)火，即看到載玻片上燃起藍(lán)色火焰即可，用磷酸鹽緩沖液（pH7.2）將Giemsa原液按9:1稀釋染色。

1.2.2組型分析：使用OLYMPUS BX53顯微鏡高倍鏡下觀察60個(gè)以上染色體分散良好且完整中期分裂相，確定染色體的數(shù)目。用cellsen系統(tǒng)采集圖像，挑選10個(gè)染色體分散好，無(wú)重疊、形態(tài)清晰，測(cè)量及配對(duì)排列。按照Levan等的分組標(biāo)準(zhǔn)列出染色體組型，計(jì)算染色體臂數(shù)NF。

2　結(jié)果

2.1染色體數(shù)目

對(duì)血鸚鵡兩個(gè)品系133中期細(xì)胞分裂相染色體進(jìn)行計(jì)數(shù)，其中白色的血鸚鵡染色體數(shù)目2n=47，紅色血鸚鵡染色體數(shù)目2n=48。紅色血鸚鵡的染色體數(shù)與何麗等實(shí)驗(yàn)報(bào)道數(shù)目一致。見(jiàn)表1。

表1　血鸚鵡的染色體數(shù)分布

2.2染色體組型

按照Levan等分組標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)紅、白兩個(gè)品系的染色體組型分析，核型分別是：紅色血鸚鵡2n=48，10sm+38st，總臂數(shù)NF=58；白色血鸚鵡2n=47，19sm+28st，總臂數(shù)NF=66。見(jiàn)表2

表2　血鸚鵡紅白兩種品系染色體組型

圖1　血鸚鵡紅色品系中期分裂相

圖2　血鸚鵡紅色品系染色體組型

圖3　血鸚鵡白色品系染色體中期分裂相?

圖4　血鸚鵡白色品系染色體組型

3　.討論

3.1實(shí)驗(yàn)中的血鸚鵡紅、白兩個(gè)品系染色體分別為48和47。血鸚鵡的70個(gè)細(xì)胞分裂相中，染色體數(shù)低于48的35個(gè)分裂相，可能是由于細(xì)胞低滲導(dǎo)致染色體丟失或是染色體分散不好造成重疊引起計(jì)數(shù)誤差。當(dāng)然白色的血鸚鵡的63個(gè)細(xì)胞分裂相中，有21個(gè)分裂相染色體數(shù)低于47，也是這個(gè)原因。

3.2魚(yú)類染色體數(shù)與其分類學(xué)類群及進(jìn)化程度有關(guān)。小島吉雄把真骨魚(yú)類劃分為低等類群、中等類群和高等類群三大類群。進(jìn)化處于低位的類群，染色體數(shù)目一般偏高，進(jìn)化上屬于高位類染色體數(shù)目比較集中，血鸚鵡屬高位類鱸形目魚(yú)類。董元?jiǎng)P指出鱸形目魚(yú)類是以端部著絲點(diǎn)染色體的占多數(shù)，這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的。染色體是遺傳物質(zhì)的載體，其核型具有一定程度的物種特異性，血鸚鵡紅、白兩個(gè)品系是通過(guò)同一次雜交獲得雜交后代不同的質(zhì)量性狀的表現(xiàn)型,染色體數(shù)分別是48和47。牛文濤等指出細(xì)胞水平的核型還是不能充分反映不同物種的差異，還需要通過(guò)帶型分析或者是分子標(biāo)記方法來(lái)進(jìn)行區(qū)分的。

3.3實(shí)驗(yàn)中采用頭腎組織進(jìn)行制片。本次試驗(yàn)獲得的分裂相，較以往相同實(shí)驗(yàn)的其他魚(yú)類要少。要采集足夠分裂相且染色體清晰圖像，需增加實(shí)驗(yàn)的工作量和工作難度，本實(shí)驗(yàn)的分裂相少可能是緣于這種魚(yú)類的腎組織不發(fā)達(dá)的緣故。人們普遍以為魚(yú)類細(xì)胞分裂指數(shù)低，需要輔助植物凝集素PHA來(lái)促進(jìn)細(xì)胞分裂。然而不同魚(yú)類的不同組織細(xì)胞分裂指數(shù)不盡相同。有的魚(yú)類腎組織不發(fā)達(dá)，獲得分裂相就少，可改用脾臟，也能獲得清晰的分裂相。建議屬于高等類群的魚(yú)類，如果脾臟發(fā)達(dá)，最好采用脾臟，能取得較好的效果。