□ 唐新忠 廣西桂林市全州縣食品藥品檢驗(yàn)檢測中心

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用

□ 唐新忠 廣西桂林市全州縣食品藥品檢驗(yàn)檢測中心

農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存在生物體、食品以及環(huán)境中農(nóng)藥原體、有毒代謝物與降解物、雜質(zhì)等的總稱。作為農(nóng)業(yè)大國，我國農(nóng)藥殘留問題比較突出，嚴(yán)重危害到人們的健康，也影響著國家的聲譽(yù)。長期以來用于農(nóng)藥殘留檢測的方法較多，有氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HP LC）、薄層色譜法（TLC）等［1］。上述方法仍存在一些局限性，有的需對(duì)樣品進(jìn)行前處理，且操作復(fù)雜，耗時(shí)長，難以滿足現(xiàn)場快速檢測樣品的要求。ELISA技術(shù)具有檢測快速、靈敏性好、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，成為快速檢測食品中農(nóng)藥殘留的有效手段。

ELISA基本原理與常見類型

該檢測法的基本原理是將相關(guān)抗原或抗體提前結(jié)合到某種固相載體表面，在檢測過程中，受檢樣品與酶標(biāo)抗原或抗體會(huì)按照相應(yīng)的程序與結(jié)合在固相載體上的相關(guān)抗原或抗體產(chǎn)生反應(yīng)，生成新的抗原或抗體復(fù)合物。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束后固相載體上酶標(biāo)抗原或抗體被結(jié)合量（即免疫復(fù)合物）和標(biāo)本中待檢抗體或抗原的量成一定比例。隨后將反應(yīng)液中的其它物質(zhì)清除后，加入相關(guān)酶反應(yīng)底物，固相載體上的酶會(huì)直接將底物催化為有色產(chǎn)物。最后，通過對(duì)有色產(chǎn)物進(jìn)行定性或定量分析即可確定待檢樣品中相關(guān)物質(zhì)的含量。ELISA技術(shù)常見類型：（1）雙抗體夾心法：該檢測法適合檢測擁有多個(gè)抗原決定簇的抗原，但由于農(nóng)藥分子通常為半抗原，即只有一個(gè)抗原決定簇，因此，不適合農(nóng)藥檢測。（2）簡接ELISA法：對(duì)抗體無嚴(yán)格要求，只需改變包被抗原便能檢測相應(yīng)的抗體。（3）競爭ELISA法：可檢測抗原，也可檢測抗體。待測抗原（抗體）與酶標(biāo)抗原（抗體）通過與固定化抗體（抗原）間的競爭，獲得與檢測目的抗原（抗體）結(jié)合的機(jī)會(huì)。

ELISA法在食品農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用

目前，有機(jī)磷農(nóng)藥是我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中最常用的農(nóng)藥，常見類型包括甲胺磷、敵敵畏、氧樂果、對(duì)硫磷、敵百蟲等。大部分為高毒類農(nóng)藥，通過降低生物體內(nèi)膽堿酯酶活性，引起遲發(fā)性神經(jīng)毒性，從而達(dá)到消滅害蟲的目的。農(nóng)藥殘留在人體內(nèi)蓄積后可造成慢性中毒，具體表現(xiàn)為神經(jīng)功能紊亂、精神錯(cuò)亂等。王華等研制出競爭酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，可用于檢測果蔬中含有的甲胺磷含量，最低檢測限為0.01g/ml，線性檢測范圍在0.01～100g/ml［2］。該試劑盒具有非常高的特異性，且回收率至少在93%以上，在4℃條件下可保存半年以上。

這是一種仿生殺蟲劑，模擬天然除蟲菊素結(jié)構(gòu)達(dá)到殺蟲的目的。這類農(nóng)藥的用量僅次于有機(jī)磷農(nóng)藥。若長期食用含有擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的食物容易引起慢性中毒。通過碳二亞胺法把相關(guān)半抗原與牛血清偶聯(lián)制成免疫原，形成聯(lián)苯菊酯的競爭間接酶聯(lián)免疫檢測法。在合適的條件下，此法的檢出限值可降到（0.016±0.002）mg/L，并和其它菊酯類農(nóng)藥不會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)。此類農(nóng)藥對(duì)人體的危害與有機(jī)磷農(nóng)藥比較相似。吳慧明等開發(fā)了一種直接ELISA試劑盒，可用于檢測土壤中殘留的克百威含量，其最低檢測限位0.01mg/L，線性檢測分為在0.01～10mg/L之間［3］。另外，現(xiàn)已研制出定量定性檢測速滅威的間接競爭ELISA法，對(duì)此種農(nóng)藥的檢出限在0.08～0.10g/ml之間，檢測線性范圍在1～10000g/L。

蘇丹紅是一種工業(yè)染色劑，成本低，被非法用作食品添加劑，常見于辣椒粉與咸鴨蛋中。這給公眾造成了極大的恐慌。目前，已研制出基于單克隆抗體的間接競爭性酶聯(lián)免疫吸附法，對(duì)蘇丹紅有非常高的靈敏度，操作簡單，適合大批量檢測，成本低。鹽酸克倫特羅（即“瘦肉精”）曾被廣泛用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)，以提高瘦肉率。目前，通過競爭酶聯(lián)免疫法能快速檢測出豬尿、豬肝內(nèi)的“瘦肉精”殘余量，可重復(fù)使用，成本低廉。

關(guān)于ELISA的研究盡管只有短短的幾十年，但在農(nóng)藥殘留分析方面的成果已非常顯著。不僅形成了對(duì)多種農(nóng)藥的ELISA檢測技術(shù)，并且還研制出用于不同農(nóng)藥檢測的ELISA試劑盒。這些試劑盒具有操作方便、快捷、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)，常用于現(xiàn)場食品檢測。與其它檢測法相比，ELISA技術(shù)擁有很多優(yōu)勢，但仍存在一些不足，比如，對(duì)試劑選擇性較高，無法同時(shí)分析多種成分，對(duì)結(jié)構(gòu)相似的化合物可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)。