胃癌及癌前組織中端粒酶活性檢測(cè)的臨床探討

林志明?楊旭初

【摘要】 目的 探究胃癌及癌前組織中端粒酶活性檢測(cè)的臨床意義。方法 采用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法（TRAP法）對(duì)就診的胃癌者、行潰瘍性手術(shù)者和行胃鏡檢查者共計(jì)178例進(jìn)行端粒酶活性檢測(cè)， 疾病包含腸上皮化生、萎縮性胃炎、早期胃癌、中晚期胃癌。結(jié)果 根據(jù)患者病情分為胃炎組、腸上皮化生組、胃癌組， 另取正常胃黏膜為空白對(duì)照組。端粒酶陽(yáng)性檢出率胃炎組和空白對(duì)照組相比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其余兩組與空白對(duì)照組相比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。胃癌組與胃炎組、腸上皮化生組相比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；颊叩男詣e、腫瘤位置、大小、浸潤(rùn)深度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期和胃癌端粒酶表達(dá)水平關(guān)聯(lián)性不大。結(jié)論 端粒酶不但能在胃癌組織中可以檢測(cè)到， 在癌前病變也有表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 基因表達(dá)調(diào)控；酶學(xué)；胃癌

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.08.024

和正常細(xì)胞相比， 腫瘤細(xì)胞有著永生性的特點(diǎn)， 該生物學(xué)特征在癌細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展中非常重要。如果端粒酶被激活， 則腫瘤細(xì)胞就會(huì)獲得永生性生物學(xué)特征， 進(jìn)而令患者病情惡化[1]。相關(guān)研究證明， 絕大部分癌細(xì)胞的端粒酶活性為高表達(dá)， 對(duì)端粒酶進(jìn)行檢測(cè)， 有著十分重要的臨床意義。結(jié)合實(shí)際情況， 本文使用TRAP法對(duì)胃癌和癌前組織內(nèi)端粒酶活性進(jìn)行全面觀察， 目的在于探究端粒酶在胃癌發(fā)生與發(fā)展中的相關(guān)變化和意義， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2013年5月～2014年5月來(lái)河南省腫瘤醫(yī)院就診的胃癌， 潰瘍性手術(shù)和行胃鏡檢查者共計(jì)178例為研究對(duì)象， 其中男92例， 女86例。從疾病類型上來(lái)看， 腸上皮化生23例， 萎縮性胃炎62例， 早期胃癌16例， 中晚期胃癌77例。年齡31.5～72.3歲， 平均年齡（62.3±3.7）歲。

1. 2 方法 在獲取患者組織之后， 在第一時(shí)間收集， 放在經(jīng)過(guò)二乙基焦炭酸酯處理過(guò)的試管中， 并保存在-80℃環(huán)境下。

1. 2. 1 組織制備 取樣本75 mg放置在試管中， 同時(shí)使用200 μl的冰緩沖液洗滌， 之后將組織剪碎處理， 于其中添加冷裂解液200 μl， 5 mmol/L的β-巰基乙醇， 濃度為10%的甘油和0.1 mmol/L的蛋白酶抑制劑（AEBSF）， 將上述物質(zhì)均勻混合后， 放在冰上孵育30 min， 收集上清物質(zhì)， 后使用紫外分光光度計(jì)對(duì)核酸與蛋白質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定， 置于-80℃環(huán)境下保存。

1. 2. 2 端粒酶檢測(cè) 本實(shí)驗(yàn)使用TRAP法為基礎(chǔ)， 進(jìn)行改良， 實(shí)施端粒酶檢測(cè)工作， 具體如下：依照標(biāo)準(zhǔn)核酸定量， 選取1 μg的物質(zhì)， 添加去離子水和反應(yīng)液直到8.5 μl， 放在常溫下反應(yīng)30 min， 目的在于完成端粒酶介導(dǎo)作用下TS延伸反應(yīng)， 后加入CX因物1.5 μl， 攪拌均勻后在90℃環(huán)境下作用1.5 min， 目的是為了消滅端粒酶活性， 后使用PCR循環(huán)設(shè)備， 進(jìn)行增擴(kuò)處理， 參數(shù)設(shè)置為：93℃40 s， 48℃40 s， 72℃1 min， 后利用72℃繼續(xù)反應(yīng)， 時(shí)間控制在10 min之內(nèi)， 每次均使用端粒酶陽(yáng)性為陽(yáng)性對(duì)照， 使用經(jīng)過(guò)RNA酶消化過(guò)的組織為陰性對(duì)照。選擇1 μg 的提取物， 利用裂解液， 依照1：10和1：100的比例稀釋， 重復(fù)上述步驟， 選擇10 μl的PCR產(chǎn)物放在濃度為10%的非變性聚丙烯凝膠中實(shí)施電泳， 在干燥后使用X線平片放射到顯影24～48 h。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 不同胃黏膜病變組織端粒酶陽(yáng)性檢出率 本實(shí)驗(yàn)依照患者患病情況， 分成三組， 每個(gè)組的端粒酶陽(yáng)性檢出率如下：萎縮性胃炎24.19%（15/62）（胃炎組）， 腸上皮化生39.13%（9/23）（腸上皮化生組）， 胃癌92.47%（86/93）（胃癌組）， 另取正常胃黏膜為空白對(duì)照組， 檢出率為0。胃炎組和空白對(duì)照組相比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其余兩組與空白對(duì)照組相比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。胃癌組與胃炎組、腸上皮化生組相比， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 2 端粒酶表達(dá)和臨床病理參數(shù)之間的關(guān)聯(lián)性 結(jié)合患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤(rùn)深度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度和臨床分期情況， 對(duì)胃癌患者進(jìn)行全面研究， 結(jié)果證明， 患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤(rùn)深度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期和胃癌端粒酶表達(dá)水平關(guān)聯(lián)性不大。

3 討論

端粒酶的活化程度與癌細(xì)胞的一些生物學(xué)行為有著密切的關(guān)聯(lián)性， 有實(shí)驗(yàn)證明[2]， 早期胃癌患者的端粒酶檢出率明顯比晚期胃癌者高， 且存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者檢出該物質(zhì)的幾率比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高。對(duì)患者進(jìn)行隨訪發(fā)現(xiàn)[3]， 端粒酶呈現(xiàn)為陽(yáng)性的胃癌患者術(shù)后存活率明顯比陰性患者低， 這在一定程度上證明， 對(duì)端粒酶實(shí)施活性檢測(cè)， 不但對(duì)臨床診斷有很大的幫助， 且對(duì)于患者疾病預(yù)后同樣存在重要的現(xiàn)實(shí)意義。

對(duì)臨床病理參數(shù)和端粒酶表達(dá)之間的關(guān)系進(jìn)行研究同樣能夠獲知患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤(rùn)深度、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度、臨床分期和胃癌端粒酶表達(dá)水平關(guān)聯(lián)性不大。

本實(shí)驗(yàn)在萎縮性胃炎和腸上皮化生組織內(nèi)也檢測(cè)出端粒酶活性， 這在一定程度上證明， 端粒酶在癌前病變或相關(guān)疾病中存在表達(dá)現(xiàn)象， 上述端粒酶活化過(guò)的細(xì)胞可能就是癌前細(xì)胞的一種， 因此對(duì)端粒酶陽(yáng)性患者來(lái)講， 實(shí)施相關(guān)檢測(cè)， 能夠盡早判斷出其是否存在胃癌， 其臨床意義需要進(jìn)一步通過(guò)隨訪來(lái)證明。

綜上所述， 端粒酶不但在腫瘤組織內(nèi)可以表達(dá)， 且在早期病變時(shí)就有了表達(dá)跡象， 證明端粒酶對(duì)于腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著必然性作用， 對(duì)于胃癌的早期診治有著極其重要的現(xiàn)實(shí)意義。因?yàn)榘┌Y分期和不同癌基因激活/抑制有著密切聯(lián)系， 而端粒酶活化在一定程度上代表了癌細(xì)胞永生化發(fā)展， 所以說(shuō)對(duì)于已經(jīng)活化的端粒酶基因?qū)嵤┯嗅槍?duì)性的治療， 有著良好的臨床前景。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳海偉， 楊靜茹. 端粒和端粒酶與癌癥發(fā)生和治療的關(guān)系研究進(jìn)展. 赤峰學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2014， 30（19）：51-54.

[2] 王大虎.端粒酶和PinX1基因在食管癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義. 河北醫(yī)科大學(xué)， 2011.

[3] 張丹. miR-1182下調(diào)hTERT的分子機(jī)制及其對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響.第三軍醫(yī)大學(xué)， 2014.

[收稿日期：2015-11-11]