抗生素微生物檢定法測(cè)定注射用磷霉素鈉含量的不確定度分析

安賢蘭 闞朋甲 王 宇

抗生素微生物檢定法測(cè)定注射用磷霉素鈉含量的不確定度分析

安賢蘭1闞朋甲2王 宇3

目的 探討注射用磷霉素鈉含量采用抗生素微生物檢定法鑒定的不確定度評(píng)定方法。方法 本次研究采用抗生素微生物檢定法對(duì)注射用磷霉素鈉含量測(cè)定過(guò)程中不確定度的來(lái)源及大小進(jìn)行評(píng)定。結(jié)果 總合成不確定度u總=100．5%×urel總=2．5%；按置信概率P=0．96，K=1．95，擴(kuò)展不確定度為U=1．95×u總=4．9%；注射用磷霉素鈉含量測(cè)定結(jié)果為（100．5±4．9）%。結(jié)論 在對(duì)不確定度進(jìn)行分析與評(píng)估時(shí)，應(yīng)該盡可能地對(duì)不確定度所有來(lái)源進(jìn)行密切考察，防止出現(xiàn)遺漏。

注射用磷霉素鈉含量；抗生素微生物檢定法；不確定度評(píng)定方法

抗生素微生物檢定法主要是指在攤布特定試驗(yàn)菌的固體培養(yǎng)基內(nèi)采用抗生素使其呈現(xiàn)出球面形的擴(kuò)散，從而使其形成一個(gè)含有一定濃度的抗生素球形區(qū)，最終能夠?qū)υ囼?yàn)菌的繁殖情況進(jìn)行抑制，呈現(xiàn)出一個(gè)透明的抑菌圈［1］。通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品與試供品產(chǎn)生出的抑菌圈情況對(duì)試供品效價(jià)進(jìn)行測(cè)定。采用抗生素微生物檢定法時(shí)，影響其結(jié)果的干擾因素較多，因而在操作中要嚴(yán)格按照相關(guān)的規(guī)則及要求進(jìn)行，盡可能地縮小試驗(yàn)中造成的誤差，確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性［2］。

1 試驗(yàn)方法

1.1 試藥與相關(guān)儀器

本次試驗(yàn)采用的試藥包括注射用磷霉素鈉、磷霉素標(biāo)準(zhǔn)品、抗生素微生物檢定培養(yǎng)基II號(hào)、藤黃微球菌、磷酸鹽緩沖液［3］。其中磷酸氫二鉀以及磷酸二氫鉀均為分析純。相關(guān)儀器包括：型號(hào)為ZY-300G的鋼管自動(dòng)放置器、型號(hào)為ZY-300IV抑菌圈自動(dòng)測(cè)量分析儀、隔水式恒溫培養(yǎng)箱以及型號(hào)為BP-211D電子分析天平。

1.2 制備供試品與標(biāo)準(zhǔn)品

1.2.1 供試品 選取5瓶供試品，精密稱定總內(nèi)容物為7.269 g，平均裝置為1.396 g。然后精密稱取供試品74.52 mg，將其放置于容量為100 ml的容量瓶中，采用滅菌水溶解并將其稀釋至刻度。最后將其制作成含磷霉素1 000單位/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，采用相同的方法，制作成含磷霉素20單位及10單位/ml的溶液，將其作為試供品溶液的高低劑量［4］。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品 精密稱取磷霉素標(biāo)準(zhǔn)品38.09 mg，將其放置于容量為25 ml的容量瓶中，加滅菌水進(jìn)行溶解后稀釋至刻度，并將其制作成含磷霉素1 000 單位/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。然后精密地量取此溶液各2 ml，將其分別放置在容量為50 ml以及100 ml的容量瓶中，采用滅菌磷酸鹽緩沖液加入其中，將其稀釋至刻度。最后將其制作成含磷霉素20單位及10單位/ml的溶液，將其作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高低劑量［5］。

1.3 制備及培養(yǎng)雙碟

按照試驗(yàn)的要求平行制備9個(gè)雙碟，并將其放置于水平臺(tái)上。每只雙碟的底層應(yīng)該添加經(jīng)過(guò)配置的記錄為20 ml的抗生素微生物鑒定培養(yǎng)基，將其凝固后加入劑量為5 ml的菌層。攤布均勻且冷卻后，在每只雙碟的等距離處放置4個(gè)鋼管，并將其穩(wěn)定5～10 min。然后滴加之前已經(jīng)制備完成的供試品以及標(biāo)準(zhǔn)品高低劑量溶液，將其蓋上陶瓦蓋后，放置于隔水式恒溫培養(yǎng)箱（37℃）進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)18 h的培養(yǎng)［6］。

1.4 測(cè)量抑菌圈直徑與計(jì)算效價(jià)

對(duì)抑菌圈直徑采用抑菌圈自動(dòng)測(cè)量分析儀進(jìn)行測(cè)定，按照生物檢定統(tǒng)計(jì)法對(duì)效價(jià)進(jìn)行計(jì)算。在計(jì)算的過(guò)程中需要同時(shí)滿足三點(diǎn)：偏離平行不顯著（P＞0.01）；效價(jià)平均可信限率為4.88%，在5%以內(nèi)；回歸項(xiàng)顯著（P＜0.01）。

2 評(píng)估測(cè)量不確定度

供試品含量測(cè)定結(jié)果由以下數(shù)學(xué)模型給出：

其中PT表示為供試品效價(jià)，AT表示為供試品估價(jià)試價(jià)，Ws及WT分別表示為標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稱樣量。Ps表示為標(biāo)準(zhǔn)品的純度，Vs及VT分別表示為標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稀釋倍數(shù)，I為高低劑量之比。S1與S2分別表示為標(biāo)準(zhǔn)品低濃度溶液所致抑菌圈直徑總和以及高濃度所致抑菌圈直徑總和，T1與T2分別表示為樣品低、高濃度所致抑菌圈直徑總和。

試驗(yàn)結(jié)果表明，總合成不確定度u總=100.5%×urel總= 2.5%；按置信概率P=0.96，K=1.95，不確定度為U=1.95×u總= 4.9%；注射用磷霉素鈉含量測(cè)定結(jié)果為（100.5±4.9）%。

3 討論

本次研究表明，試供品總合成不確定度u總=2.5%；按置信概率P=0.96，K=1.95，不確定度為U=4.9%。這說(shuō)明，在現(xiàn)有的條件下使測(cè)定結(jié)果受控，并且可以通過(guò)分析各分量不確定度的大小對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，從而能夠確保測(cè)定結(jié)果的真實(shí)可靠性。并且，合成不確定度數(shù)值主要取決因素在于數(shù)值較大的不確定度分量［7］。因此，在對(duì)不確定度進(jìn)行分析與評(píng)估時(shí)，應(yīng)該盡可能地對(duì)不確定度所有來(lái)源進(jìn)行密切考察，防止出現(xiàn)遺漏。為了確保測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要采用有針對(duì)性的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，縮小生物變異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成的影響。并且要盡可能地減少稀釋過(guò)程對(duì)測(cè)定結(jié)果造成的影響，將稀釋次數(shù)控制在3次內(nèi)，并盡可能地避免采用小體積量器進(jìn)行量取及定容［8］。除此之外，還需要嚴(yán)密地控制實(shí)驗(yàn)過(guò)程中溫度的變化情況，避免因溫度導(dǎo)致溶劑體積的變化。

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AN Xianlan1KAN Pengjia2WANG Yu31 Chemical Room，Yanbian Institute of Food and Drug Inspection，Yanji Jilin 133000，China，2 Chemical Room，Baicheng Food and Drug Inspection Institute，Baicheng Jilin 137000，China，3 Traditional Chinese Medicine Room，Yanbian Institute of Food and Drug Inspection，Yanji Jilin 133000，China

Objective To explore the evaluation method of uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection by using the microbial assay of antibiotics． Methods The source and size of the uncertainty in the determination of the content of Fosfomycin Sodium for Injection were evaluated by the method of antibiotic microbiological assay． Results Total synthesis uncertainty u total =100．5% ×urel total =2．5%，according to the confidence probability P=0．96，K=1．95，extended uncertainty U=1．95×utotal=4．9%． Fosfomycin Sodium for Injection content determination result was（100．5±4．9）%． Conclusion In the analysis and evaluation of uncertainty，it should be possible to make a close investigation of all sources of uncertainty，so as to prevent the occurrence of omissions．

Fosfomycin sodium for injection content，Antibiotic microbiological assay method，Uncertainty evaluation method

R927

A

1674-9316（2016）22-0117-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．22．070 Determination of the Uncertainty of the Content of Fosfomycin Sodium for Injection by the Method of Microbial Assay of Antibiotics

1 延邊州食品藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室，吉林 延吉 133000 2白城市食品藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室，吉林 白城 137000 3延邊州食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，吉林 延吉 133000