趙　云,尤會會,沈世萍,郭　晴,梅宇飛,李金泉,朱雨晴,李瀟瀟,丁書茂,楊　旭(華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,遺傳調(diào)控與整合生物學(xué)湖北省重點(diǎn)實驗室,湖北 武漢 430079)

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甲醛經(jīng)口染毒致小鼠臟器損傷和炎癥反應(yīng)的研究

趙云,尤會會,沈世萍,郭晴,梅宇飛,李金泉,朱雨晴,李瀟瀟,丁書茂,楊旭?(華中師范大學(xué)生命科學(xué)
學(xué)院,遺傳調(diào)控與整合生物學(xué)湖北省重點(diǎn)實驗室,湖北 武漢 430079)

摘要：為探討在單獨(dú)染毒和卵清蛋白(OVA)聯(lián)合致敏的條件下,甲醛灌胃染毒對小鼠造成的毒性效應(yīng),將雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為7組:對照組(蒸餾水組);OVA致敏組;2mg/(kg?d) FA(甲醛)組;20mg/(kg?d) FA組;200mg/(kg?d) FA組;200mg/(kg?d )FA+ OVA組;200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT(褪黑素)組,以蒸餾水和不同濃度甲醛溶液灌胃,連續(xù)21d. OVA致敏組,200mg/(kg?d) FA+ OVA組,200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT組在第6,13,20d進(jìn)行腹腔注射OVA致敏;此外,200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT組,每天用1.0mg/mL褪黑素灌胃小鼠(小鼠灌胃劑量10mg/(kg?d)),連續(xù)21d.檢測肝,腎和肺組織中活性氧自由基(ROS),丙二醛(MDA)和還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并采用ELISA法檢測肝組織中IL-4和IFN -γ的水平.結(jié)果表明,與對照組相比,甲醛濃度為200mg/(kg?d),小鼠肝臟ROS含量增加(P＜0.05),MDA含量增加以及小鼠腎臟GSH含量降低,均有顯著性差異(P＜0.05).OVA作為致敏劑,甲醛濃度為200mg/(kg?d)時,肝組織中IL-4(Interleukin-4)含量增加(P＜0.01),10mg/(kg?d)褪黑素能夠降低200mg/(kg?d)甲醛+OVA染毒小鼠肝臟內(nèi)ROS含量(P＜0.05).綜上,200mg/(kg?d)甲醛灌胃染毒能使小鼠產(chǎn)生氧化損傷和炎癥反應(yīng), ROS, MDA水平上升(P＜0.05),GSH水平下降(P＜0.05),肝臟中細(xì)胞因子IL-4水平上升(P＜0.01), IFN -γ水平下降(P＜0.05).

關(guān)鍵詞：甲醛；卵清蛋白；小鼠；氧化損傷；炎癥反應(yīng)

* 責(zé)任作者, 教授, yangxu@mail.ccnu.edu.cn

環(huán)境中甲醛的主要污染來源是有機(jī)合成,化工,合成纖維,染料,木材加工及制漆等行業(yè)排放的廢水,廢氣等.某些有機(jī)化合物在環(huán)境中降解也產(chǎn)生甲醛,如氯乙烯的降解產(chǎn)物也包含甲醛.流行病學(xué)和動物研究表明,甲醛暴露均可使機(jī)體產(chǎn)生多種毒理效應(yīng),包括免疫毒性,神經(jīng)毒性,生殖毒性,遺傳毒性[1-4].甲醛還可導(dǎo)致呼吸道和眼部刺激作用,致敏作用,免疫毒性和各組織器官氧化損傷[5].氧化損傷是機(jī)體在暴露于毒性物質(zhì)后,產(chǎn)生過量的活性氧自由基,過量的自由基直接攻擊生物大分子產(chǎn)生的損傷[6].甲醛的氧化損傷作用主要體現(xiàn)在其對抗氧化系統(tǒng)的抑制作用,使機(jī)體內(nèi)的自由基不能及時清除而堆積,最終對機(jī)體產(chǎn)生廣泛的損害作用[7].活性氧ROS在炎癥部位誘導(dǎo)組織產(chǎn)生損傷,與氣道炎癥的發(fā)病密切相關(guān). Reidel等[8]研究表明,豚鼠連續(xù)超過5d的0.4mg/kg甲醛暴露,顯著促進(jìn)了吸入卵清蛋白(OVA)過敏原的致敏作用.Tarkowski等[9]發(fā)現(xiàn)經(jīng)OVA滴鼻致敏的小鼠持續(xù)10d暴露于1.6mg/kg甲醛能夠增加OVA特異性抗體IgE的產(chǎn)生.經(jīng)口暴露途徑往往因為其在人體的多種暴露途徑中并非十分重要而常被忽視,但是由于食品中含有的甲醛可能使很多人經(jīng)口腔攝入甲醛,因而甲醛的經(jīng)口暴露途徑對人體健康的危害絕不能被低估.雖然上述實驗對吸入甲醛致機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷及炎癥反應(yīng)進(jìn)行研究,但通過甲醛經(jīng)口染毒致小鼠臟器損傷及產(chǎn)生過敏性體質(zhì)的相關(guān)研究尚未見報道.干擾素γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素4(IL-4)分別是Th2型和Th1型過敏性炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子,測定肝臟中的IL-4和IFN-γ的含量,可反映甲醛對小鼠造成的過敏性炎癥反應(yīng).本實驗以雄性Balb/c小鼠為實驗動物,采用灌胃和腹腔注射的方法進(jìn)行甲醛和OVA聯(lián)合染毒,測定肝,腎和肺組織中活性氧自由基(ROS),丙二醛(MDA)和還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并采用ELISA法檢檢測肝組織中IL-4和IFN-γ的含量,以期為進(jìn)一步探討通過消化道途徑進(jìn)入機(jī)體的甲醛所造成的危害及其毒作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù).

1　材料與方法

1.1實驗動物

選用湖北省疾病控制中心供給的SPF級雄性Balb/c小鼠[5～6周齡,(22±1.5) g].購買后飼養(yǎng)于華中師范大學(xué)實驗動物管理中心的屏障環(huán)境中,給予充足的飲水和飼料,料購于湖北省實驗動物中心.5d適應(yīng)性飼養(yǎng)之后進(jìn)行實驗.

1.2試劑與儀器

試劑包括甲醛(FA)原液(Sigma, 4%),卵清蛋白(OVA, Sigma),氫氧化鋁膠體(Sigma,分析純),褪黑素(Melatonin, MT,國奧聯(lián)信),硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid, TBA,分析純,國藥集團(tuán)),2’, 7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA 熒光染料, 99.9%,Sigma),微量還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒(南京建成),福林酚試劑盒(南京建成),小鼠IL-4酶聯(lián)免疫試劑盒(eBioscience, USA),IFN-γ試劑盒(eBioscience, USA).儀器包括全波長酶標(biāo)儀(Bio-Tek, USA),-70℃冰箱,低溫冷凍離心機(jī)(Eppendorf-5415R),FL×800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek, USA),三用電熱恒溫水箱,超聲處理器.

1.3實驗方法

1.3.1溶液配制甲醛溶液:每天給小鼠灌胃的甲醛溶液體積(mL)與其體重(g)比值為0.01,灌胃濃度為2mg/(kg?d),20mg/(kg?d),200mg/(kg?d).經(jīng)計算,用蒸餾水將4%甲醛原液分別稀釋200,20,2倍可得以上濃度的甲醛染毒液;OVA致敏液: 1.67mg OVA+58.4mg Al(OH)3+10mL生理鹽水,超聲溶解;生理鹽水:0.9% NaCl溶液;褪黑素(MT):小鼠灌胃劑量10mg/(kg?d).稱取一定量的褪黑素粉末,用2%的無水乙醇助溶,再用生理鹽水定容至一定體積,褪黑素溶液濃度為1mg/mL,現(xiàn)用現(xiàn)配.

1.3.2染毒方案將49只Balb/c小鼠隨機(jī)分為7組,每組7只,分別為:A.蒸餾水(DI water)組; B. OVA致敏組;C. 2mg/(kg?d) FA組;D. 20mg/(kg?d) FA組;E. 200mg/(kg?d) FA組;F. 200mg/(kg?d) FA+ OVA組;G. 200mg/(kg?d) FA+ OVA + MT組(圖1).采用灌胃法,分別用蒸餾水和不同濃度甲醛溶液對小鼠進(jìn)行灌胃,連續(xù)染毒21d. OVA致敏組, 200mg/(kg?d)FA+OVA組,200mg/kg/d FA+ OVA +MT組小鼠分別在第6,13,20d通過腹腔注射OVA致敏;200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT組小鼠用濃度為1mg/mL褪黑素灌胃,即小鼠每日攝入褪黑素劑量為10mg/(kg?d),連續(xù)21d.灌胃容量為0.01mL/g.

圖1　實驗分組及染毒流程Fig.1　Experiment groups and exposure process

1.3.3組織勻漿制備第22d采用脫頸法處死小鼠,立即摘取肝、腎、肺3個臟器,在冰冷的PBS (PH7.5)中漂洗,以去除表面血跡.在定型濾紙上拭干,稱重,加入一定量PBS(pH 7.5),用玻璃勻漿器在冰上制成10%的組織勻漿,將勻漿液離心(10000r/min, 10min,4℃),取上清,將上清液分裝后凍存于-70℃冰箱,用于指標(biāo)的測定.

1.3.4各項生物學(xué)指標(biāo)的測定ROS含量的測定:取一定量10%勻漿液,加入適量PBS稀釋,肝,腎組織勻漿稀釋2倍,肺組織勻漿不稀釋; DCFH-DA熒光染料用PBS稀釋1000倍.取100μL稀釋液于酶標(biāo)板中排列,并加入100μL DCFH-DA熒光染料染色,避光反應(yīng)10min. DCFH-DA能轉(zhuǎn)化生成DCFH,在活性氧的存在條件下,DCFH 被氧化成熒光物質(zhì)DCF,用FL× 800熒光酶標(biāo)儀在激發(fā)波長488nm和發(fā)射波長525nm下檢測DCF的吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出ROS的含量.MDA含量的測定:MDA含量的測定采用硫代巴比妥酸(TBA)法,MDA 可與TBA 縮合,形成紅色產(chǎn)物,且在532nm處有最大吸收峰.取100μL 10%的勻漿液,加入400μL 0.6%TBA溶液,沸水浴15min.取上清液,離心(10000r/min,10min,4℃),取上清液200μL于酶標(biāo)板,用全波長酶標(biāo)儀檢測,分別在450、532和600nm波長下測定吸光度,按照公式C=[6.45 (OD532nm-OD600nm)-0.56OD450nm]/prot計算出MDA含量(μmol/mg prot).GSH含量的測定:用還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒來檢測各組織中的濃度,具體做法按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作.IL-4和IFN-γ含量的測定:通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測肝臟組織中的IL-4和IFN-γ含量,靈敏度分別為4pg/mL和15pg/mL.具體做法按照ELISA試劑盒的說明書進(jìn)行操作.

1.3.5統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示.Origin 6.1,Graphpad Prism5統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,應(yīng)用單因素方差分析(one-way ANOVA)檢驗組間均值的差異,之后采用LSD檢驗進(jìn)行兩兩比較,顯著水平α定為P＜0.05.

2　結(jié)果

2.1體重變化及臟體比

圖2　各組小鼠體重變化Fig.2　Weight changes of mice in different groups

2.1.1體重變化如圖2所示,與對照組相比,OVA組,2FA組和20FA組的小化,無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);200FA組和200FA+OVA組小鼠體重隨著染毒時間增長降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05).

2.1.2臟體比如圖3所示,與對照組相比,OVA 組,2FA組和20FA組的小鼠肺、肝、腎三個臟器的臟體比沒有明顯差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05); 而200FA組和200FA+OVA組小鼠肺的臟體比增加,有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01),肝的臟體比增加,有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05);腎臟體比無明顯變化,無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05).

圖3　各組小鼠臟體比Fig.3　Organ-body ratios of mice in different groups

2.2臟器氧化損傷

圖4　各組小鼠臟器ROS含量Fig.4　The ROS content in different organs in different groups

2.2.1ROS含量變化如圖4所示,不同實驗組小鼠各臟器ROS含量變化趨勢相同,均隨染毒劑量增加而上升.與對照組相比,小鼠肺部各不同處理組間ROS含量均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05).在小鼠肝臟中,甲醛單獨(dú)染毒組20FA組,ROS含量無顯著變化(P＞0.05);OVA組,200FA+OVA和200FA+OVA+MT組與對照組相比,ROS含量增加(P＜0.01),200FA組ROS含量增加(P＜0.05),在小鼠腎臟中, 200FA,200FA+OVA組ROS含量增加(P＜0.01), OVA組,200FA+OVA+MT組ROS含量增加(P＜0.05).與OVA組相比,200FA+OVA組小鼠腎臟中ROS含量增加(P＜0.01).與200FA+ OVA組相比,200FA+OVA+MT組的小鼠肝臟內(nèi)ROS含量下降(P＜0.05),腎臟內(nèi)ROS含量下降(P＜0.01).

圖5　各組小鼠臟器MDA含量Fig.5　The MDA content in different organs in different groups

2.2.2MDA含量變化如圖5所示,不同處理組小鼠各臟器MDA含量的變化趨勢基本一致.與對照組相比,OVA致敏組小鼠肺部MDA含量上升(P＜0.05),肝臟MDA含量增加(P＜0.01); 200FA組小鼠肺部和肝臟MDA含量高于對照組(P＜0.05);200FA+OVA組中,小鼠各臟器MDA含量均高于對照組(P＜0.05),肝臟MDA含量極顯著增加 (P＜0.01);200FA+OVA+MT組中,小鼠各臟器MDA含量均高于對照組,但只有肝臟含量增加具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05).相比于200FA+OVA 組,給予MT的小鼠臟器內(nèi)MDA含量有所下降,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);與OVA致敏組相比,200FA+OVA組MDA含量無明顯增加(P＞0.05).

圖6　各組小鼠臟器GSH 含量Fig.6　The GSH content in different organs in different groups

2.2.3GSH含量變化結(jié)果如圖6所示,與ROS 和MDA含量相比,不同處理組小鼠各臟器內(nèi)GSH含量變化呈相反趨勢.其中對照組含量最高,OVA致敏組小鼠肝,腎GSH含量低于對照組(P＜0.05);與對照組相比,2FA組肺和肝臟內(nèi)GSH含量無明顯變化(P＞0.05);200FA組小鼠肺部GSH含量降低(P＜0.05),肝臟GSH含量降低(P＜0.05);200FA+OVA組小鼠肺和肝臟GSH含量均低于對照組(P＜0.05),腎臟GSH含量低于對照組(P＜0.01);與OVA致敏組相比,200FA+OVA組小鼠肺部GSH含量降低(P＜0.05).與200FA+OVA組相比,200FA+OVA+MT組小鼠臟器內(nèi)GSH含量沒有顯著變化(P＞0.05).

圖7　各組小鼠肝臟IL-4、IFN-γ 含量Fig.7　The IL-4and IFN-γ content in the liver of mice in different groups

2.3肝臟中細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ的含量變化IL-4結(jié)果見圖7a,與對照組相比,OVA致敏組, 200FA 組,200FA+OVA組,200FA+OVA+MT組小鼠肝臟IL-4含量顯著增高(P＜0.01);200FA+ OVA組小鼠肝臟IL-4含量高于OVA致敏組(P＜0.05);與200FA+OVA組相比,200FA+ OVA+ MT組的小鼠臟器內(nèi)IL-4含量有所下降,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05). IFN-γ結(jié)果見圖7b,與對照組相比,各不同處理組小鼠肝臟內(nèi)IFN-γ含量無顯著變化(P＞0.05);與OVA致敏組相比, 200FA+ OVA組小鼠肝臟IFN-γ含量變化無顯著變化(P＞0.05);相比于200FA+OVA組,200FA+ OVA+ MT組小鼠肝臟IFN-γ含量變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05).

3　討論

3.1致敏劑的選擇

OVA作為一種常見的過敏原,被廣泛應(yīng)用于多種動物模型中[10].很多研究中,OVA用來構(gòu)建動物哮喘模型.Qiao等[13]利用OVA免疫大鼠成功構(gòu)建了Wistar大鼠哮喘模型,進(jìn)而探究氣態(tài)甲醛的佐劑作用; Liu等[14]在Qiao的工作基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討了甲醛對OVA構(gòu)建的哮喘小鼠超敏反應(yīng)的佐劑效應(yīng).楊劍婷等[13]用OVA構(gòu)建的小鼠致敏模型作為陽性對照,對白果蛋白過敏動物模型進(jìn)行試驗研究.本研究也選取了OVA這種常見致敏劑用以構(gòu)建Balb/c小鼠致敏模型.

3.2甲醛的氧化損傷作用

甲醛本身及代謝過程中均可產(chǎn)生活性氧自由基ROS,ROS可直接與DNA分子發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致DNA鏈斷裂,堿基修飾和DNA蛋白交聯(lián)等氧化損傷[5].同時甲醛能夠抑制超氧化物歧化酶(SOD)活性,使過量自由基不能及時清除,間接損傷生物大分子和組織[14].正常情況下,機(jī)體存在完善的自由基清除系統(tǒng),使體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與消除處于動態(tài)平衡中,若機(jī)體受到外在刺激,例如甲醛導(dǎo)致發(fā)生氧化應(yīng)激,從而自由基不能被及時清除,過量的自由基攻擊靶分子,可造成組織,器官及機(jī)體不同程度的損傷[14-15].本實驗中,高濃度甲醛造成小鼠體重下降,說明甲醛對小鼠的機(jī)體造成一定程度的損傷.過量的ROS可攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用并形成脂質(zhì)過氧化物,而MDA則是脂質(zhì)過氧化最終的分解產(chǎn)物[16].ROS還可以與還原性谷胱甘肽(GSH)結(jié)合形成硫代半縮醛,導(dǎo)致GSH損竭,使機(jī)體抗氧化能力顯著降低[15].本研究表明高濃度甲醛(200mg/(kg?d))可以使小鼠肝臟中ROS含量大大增多,而在200FA+OVA組中含量達(dá)到最大,并顯著高于OVA組,可見高濃度甲醛不僅造成小鼠肝臟氧化損傷,還能加重已有的損傷,MDA的含量變化也呈現(xiàn)類似結(jié)果,GSH測定結(jié)果恰好相反,其含量隨染毒濃度增高而下降,反映出機(jī)體抗氧化能力顯著降低.

3.3甲醛的致敏作用

實驗數(shù)據(jù)表明,OVA致敏組的IL-4含量顯著增加,而對該組小鼠給予高濃度甲醛[200mg/(kg?d)]的小鼠,IL-4含量增加極顯著,而同樣條件下,IFN-γ的含量沒有明顯的變化.這樣的結(jié)果表明,甲醛的暴露更多導(dǎo)致的是Th2型反應(yīng),并且能夠促進(jìn)和增強(qiáng)OVA已致敏小鼠產(chǎn)生Th2型反應(yīng).ROS被視為一種能造成組織損傷的炎癥介質(zhì),可能參與干擾炎癥細(xì)胞,諸如嗜酸性粒細(xì)胞Th1/Th2型過敏反應(yīng)的平衡[17].實驗結(jié)果顯示,200FA+OVA組小鼠肝臟中ROS含量最高,同時IL-4的含量也最高.該結(jié)果表明,ROS含量的增加可能會導(dǎo)致Th2型細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào).

3.4 褪黑素的抗氧化作用

褪黑素是生物體內(nèi)一種常見的分子,具有多種功能,最重要的特點(diǎn)之一即是一種良好的抗氧化劑[18].實驗結(jié)果顯示,甲醛和OVA聯(lián)合染毒的小鼠灌胃褪黑素能夠使小鼠各臟器內(nèi)ROS和MDA含量下降,而使GSH含量上升,變化不顯著可能是因為本次實驗當(dāng)中使用的褪黑素濃度不高所致.其發(fā)揮抗氧化作用可能是因為MT吲哚環(huán)上的5-甲氧基極大增強(qiáng)了MT捕獲自由基的能力,而N-乙?；鶆t保護(hù)了MT不被單胺氧化酶降解,上述兩個基團(tuán)是MT清除包括氧自由基在在內(nèi)的活性氧的必需基團(tuán)[15].同時,可能由于褪黑素減少了自由基的產(chǎn)生,相對增加了組織中GSH濃度,自由基的減少使SOD和GSH- PX的消耗減少,相應(yīng)提高了SOD和GSH- PX的活性,而SOD和GSH- PX活性的提高又可以進(jìn)一步清除自由基,降低自由基對機(jī)體的損傷,這樣形成一個良性循環(huán)[13].

4　結(jié)論

本實驗結(jié)果表明,高濃度甲醛[200mg/ (kg?d)]暴露可對小鼠臟器造成明顯的氧化損傷,并提高小鼠肝臟IL-4表達(dá)水平(P＜0.01),能夠引發(fā)Th2型過敏性炎癥反應(yīng);對于OVA致敏小鼠,高濃度甲醛[200mg/(kg?d)]可以顯著性地加重其臟器的氧化損傷程度以及Th2型炎癥反應(yīng);小鼠不同臟器對甲醛暴露產(chǎn)生的損傷和過敏反應(yīng)程度不同,其中肝臟,腎臟較為嚴(yán)重;褪黑素在一定程度上可以保護(hù)機(jī)體,減弱機(jī)體因甲醛暴露所致的損傷.

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李克強(qiáng):加大環(huán)境治理力度 重拳治理大氣霧霾

2016年3月5日上午9時,十二屆全國人大四次會議在人民大會堂開幕,國務(wù)院總理李克強(qiáng)作政府工作報告.

李克強(qiáng)在報告2016年重點(diǎn)工作時指出,加大環(huán)境治理力度,推動綠色發(fā)展取得新突破.治理污染、保護(hù)環(huán)境,事關(guān)人民群眾健康和可持續(xù)發(fā)展,必須強(qiáng)力推進(jìn),下決心走出一條經(jīng)濟(jì)發(fā)展與環(huán)境改善雙贏之路.

重拳治理大氣霧霾和水污染.今年化學(xué)需氧量、氨氮排放量要分別下降2%,二氧化硫、氮氧化物排放量分別下降3%,重點(diǎn)地區(qū)細(xì)顆粒物(PM2.5)濃度繼續(xù)下降.著力抓好減少燃煤排放和機(jī)動車排放.加強(qiáng)煤炭清潔高效利用,推進(jìn)以電代煤、以氣代煤.全面實施燃煤電廠超低排放和節(jié)能改造.加快淘汰不符合強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的燃煤鍋爐.增加天然氣供應(yīng),完善風(fēng)能、太陽能、生物質(zhì)能等發(fā)展扶持政策,提高清潔能源比重.鼓勵秸稈資源化利用,減少直接焚燒.全面推廣車用燃油國五標(biāo)準(zhǔn),淘汰黃標(biāo)車和老舊車380萬輛.在重點(diǎn)區(qū)域?qū)嵭写髿馕廴韭?lián)防聯(lián)控.全面推進(jìn)城鎮(zhèn)污水處理設(shè)施建設(shè)與改造,加強(qiáng)農(nóng)業(yè)面源污染和流域水環(huán)境綜合治理.加大工業(yè)污染源治理力度,對排污企業(yè)全面實行在線監(jiān)測.強(qiáng)化環(huán)境保護(hù)督察.新修訂的環(huán)境保護(hù)法必須嚴(yán)格執(zhí)行,對超排偷排者必須嚴(yán)厲打擊,對姑息縱容者必須嚴(yán)肅追究.

大力發(fā)展節(jié)能環(huán)保產(chǎn)業(yè).擴(kuò)大綠色環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)覆蓋面.支持推廣節(jié)能環(huán)保先進(jìn)技術(shù)裝備,廣泛開展合同能源管理和環(huán)境污染第三方治理.加大建筑節(jié)能改造力度,加快傳統(tǒng)制造業(yè)綠色改造.開展全民節(jié)能、節(jié)水行動,推進(jìn)垃圾分類處理,健全再生資源回收利用網(wǎng)絡(luò),把節(jié)能環(huán)保產(chǎn)業(yè)培育成我國發(fā)展的一大支柱產(chǎn)業(yè).

加強(qiáng)生態(tài)安全屏障建設(shè).健全生態(tài)保護(hù)補(bǔ)償機(jī)制.停止天然林商業(yè)性采伐,實行新一輪草原生態(tài)保護(hù)補(bǔ)助獎勵政策.推進(jìn)地下水超采區(qū)綜合治理試點(diǎn),實施濕地保護(hù)與恢復(fù)工程,繼續(xù)治理荒漠化、石漠化和水土流失.保護(hù)環(huán)境,人人有責(zé).每一個社會成員都要自覺行動起來,為建設(shè)美麗中國貢獻(xiàn)力量.

摘自中國環(huán)境網(wǎng)

2016-03-05

Organ injure and inflammatory response of mice induced by oral exposure of formaldehyde.

ZHAO Yun, YOU Hui-hui, SHEN Shi-Ping, GUO Qing, MEI Yu-fei, LI Jin-quan, ZHU Yu-qing, LI Xiao-xiao, DING Shu-mao, YANG Xu*. (Hubei Key Laboratory of Genetic Regulation and Integrative Biology, College of Life Science, Central China Normal University, Wuhan 430079, China). China Environmental Science, 2016,36(3)：935～942

Abstract：To explore the effects on mice through administration of formaldehyde (FA) by gavage with or without ovalbumin (OVA), which lead to the inflammation in body, the male Balb/c mice were randomly divided into 7groups: the control group (distilled water group), OVA group, 2mg/(kg?d) FA (formaldehyde) group, 20mg/(kg?d) FA group, 200mg/(kg?d) FA group, 200mg/(kg?d) FA+OVA group and 200mg/(kg?d)FA+OVA+ MT (melatonin) group. Mice were gavaged with distilled water and different concentrations of FA solution respectively for 21 days. The mice in OVA group, 200mg/(kg?d) FA+OVA group and 200mg/(kg?d) FA+OVA+MT group were sensitized with OVA in day 6, 13, 20 by intraperitoneal injection, and the mice in 200mg/(kg?d) FA+OVA+MT group were also challenged with 1mg/mL MT by gavage for 21 days. The contents of ROS, MDA and GSH in liver, kidney and lung tissue homogenate were determined. IL-4and IFN-g concentrations in liver were measured by ELISA kits. The results showed that compared with control group, the livers ROS of mice in 200mg/(kg?d) FA group reached a significant level (P＜0.05), and MDA increased significantly (P＜0.05); GSH content in kidneys decreased significantly (P＜0.05). IL-4 content in livers of mice in 200mg/(kg?d) FA+OVA group significantly increased (P＜0.01). In 200mg/(kg?d) FA+OVA group, the administration of 10mg/(kg?d) MT can reduce ROS in the livers significantly (P＜0.05). In a word, the gavage of 200mg/(kg?d) FA would induce oxidative damage and inflammation in mice. ROS, MDA in 200mg/(kg?d) FA group reached a significant level (P＜0.05), on the contrary, GSH content decreased significantly (P＜0.05). In 200mg/(kg?d) FA+OVA group, IL-4 content in livers of mice significantly increased (P＜0.01), while IFN-g content had no significant change (P＞0.05).

Key words：formaldehyde；ovalbumin；mice；oxidative stress；inflammation

作者簡介：趙云(1992-),女,山西長治人,華中師范大學(xué)碩士研究生,研究方向為生物化學(xué)與分子毒理學(xué).

基金項目：國家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項目(51136002)

收稿日期：2015-06-19

中圖分類號：X503.22

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1000-6923(2016)03-0935-08