李　晗，李繼斌，邢正英，戴學(xué)文，房志仲（天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津　300070）

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復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊的質(zhì)量控制

李晗，李繼斌，邢正英，戴學(xué)文，房志仲
（天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）

摘要目的：建立復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊的質(zhì)量控制方法。方法：利用HPLC法測定復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊中主藥的含量與制劑的含量均勻度，色譜條件為：TIANHE誖Kromasil C(18)色譜柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.05 mol/L KH2PO4（磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈（5∶45∶50）；檢測波長為λ=236 nm；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；柱溫為25℃。結(jié)果：阿托伐他汀在1.12～16.8 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 9），依折麥布在1.14～17.1 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 9）；阿托伐他汀和依折麥布的平均加樣回收率分別為100.58%和100.64%，RSD分別為1.18%和0.92%。結(jié)論：該HPLC測定條件和含量測定方法能夠有效地測定樣品的含量，且簡便易行。

關(guān)鍵詞阿托伐他?。灰勒埯湶?；高效液相色譜法；質(zhì)量控制；含量均勻度

Quality control of compound atorvastatin and ezetimibe capsule

LI Han,LI Ji-bin,XING Zheng-ying,DAI Xue-wen,FANG Zhi-zhong
（College of Pharmacy,Tianjin Medical University,Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics(Theranostics),Tianjin 300070,China）

Abstract Objective:To establish an appropriate method to determine contents of atorvastatin and ezetimibe in compound atorvastatin and ezetimibe capsule.Methods:Content and content uniformity of compound atorvastatin and ezetimibe capsule were determined by an HPLC method,in which a TIANHE誖Kromasil C18column(200 mm×4.6 mm,5 μm)was used as stationary phase and a mix of methanol-0.05 mol/L KH2PO4(adjusted to pH 3.0 with phosphoric acid)-acetonitrile(5∶45∶50)was used as mobile phase.The detection wavelength was 236 nm and flow rate was 1.0 mL/min.Column temperature was set at 25℃.Results:The concentration detection of atorvastatin showed a fine linearity between 1.12-16.8 μg/mL(r=0.999 9),while the concentration detection of ezetimibe showed a fine linearity between 1.14-17.1 μg/mL(r=0.999 9);the average recoveries of atorvastatin and ezetimibe were 100.58% and 100.64%,respectively,and corresponding RSD values were 1.18% and 0.92%,respectively.Conclusion:The detection method in this study is simple and accuracy,so it is appropriate to be used in the quality control of the compound atorvastatin and ezetimibe capsule.

Key words atorvastatin；ezetimibe；HPLC；quality control；content uniformity

高脂血癥是指由于脂肪代謝和運(yùn)轉(zhuǎn)異常導(dǎo)致血漿中幾種類型的脂質(zhì)高于正常水平的一種疾病。這幾種脂質(zhì)通常指血中總膽固醇（TC）和三酰甘油酯（TG）以及低密度脂蛋白（LDL－C），此外高密度脂蛋白（HDL－C）水平的降低也會導(dǎo)致高脂血癥。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高和社會壓力的增大，高脂血癥等血脂異常疾病的發(fā)病率也呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢，疾病的多發(fā)人群也不再只是集中于老年人，而是逐漸年輕化。這些疾病嚴(yán)重威脅著人們的健康，因此對于高脂血癥的治療刻不容緩。阿托伐他汀是一種羥甲基戊二酰輔酶A（HMG－CoA）還原酶抑制劑，與選擇性膽固醇吸收抑制劑依折麥布聯(lián)合應(yīng)用，可分別從膽固醇的內(nèi)、外源性途徑對血脂水平進(jìn)行調(diào)節(jié)，產(chǎn)生協(xié)同作用，強(qiáng)力降低血漿LDL-C水平，以達(dá)到最佳的調(diào)脂效果[1-3]。本課題對自制的復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊劑進(jìn)行了質(zhì)量控制方面的研究，摸索高效液相色譜法條件，建立檢測自制制劑中兩種藥物的質(zhì)量控制方法，確保所建立的方法準(zhǔn)確、可靠、簡便、易行。

1　材料與方法

1.1試藥供試品：復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊（自制）；對照品：阿托伐他汀鈣（AVAIAMJ02A，印度卡迪拉公司，批號：20121103）；依折麥布(自制，批號：20140821)；甲醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，色譜純）；乙腈（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，色譜純）；其它試劑均為市售分析純；重蒸水（自制）。

1.2儀器高效液相色譜儀（美國Spectra -Physics）；柱溫箱（Model 100，天津科貝爾公司）；色譜柱（Kromasil C18，200 mm×4.6 mm，5 μm）；Anastar色譜工作站（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；ALC-210.4電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；電熱真空干燥箱DZG-403（天津市天宇實(shí)驗(yàn)儀器有限公司制造）；KQ-100B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；酸度計(jì)PHS-25（數(shù)顯）pH計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.3方法[4-7]

1.3.1色譜條件[8-10]色譜柱：TIANHE誖Kromasil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05 mol/L KH2PO4（調(diào)節(jié)pH至3.0）-甲醇（50∶45∶5）；檢測波長λ為236 nm；柱溫為25℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。

1.3.2溶液制備（1）對照品溶液的制備：精密稱取依折麥布對照品5.7 mg與阿托伐他汀對照品5.6 mg，分別置于50 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容，搖勻得貯備液；然后分別精密量取1 mL上述貯備液，共同置于10 mL量瓶中，加入流動相溶解并定容，搖勻得對照品溶液；再分別精密量取1 mL上述貯備液，分別置于10 mL量瓶中，用流動相溶解并定容，搖勻則分別得到阿托伐他汀與依折麥布的單一對照品溶液。（2）供試品溶液的制備：取適量自制樣品研磨均勻，精密稱定51.3 mg置于25 mL量瓶中，加入適量甲醇超聲，使完全溶解后，定容至刻度。取一定量的溶液離心，2 000 r/min，5 min。取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液2.0 mL置于10 mL量瓶中，用流動相定容至刻度，即得供試品溶液。（3）陰性對照溶液的制備：按照自制處方制得不含阿托伐他汀與依折麥布的空白制劑，根據(jù)上述供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

1.3.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別吸取對照品溶液和阿托伐他汀與依折麥布的單一對照品溶液以及陰性對照溶液各20 μL并進(jìn)樣，根據(jù)“1.3.1項(xiàng)下”的色譜條件進(jìn)行測定并記錄色譜圖。

1.3.4線性關(guān)系考察[11-12]用移液管分別精密移取依折麥布/阿托伐他汀貯備液0.1/0.1、0.2/0.2、0.5/ 0.5、0.8/0.8、1.0/1.0、1.2/1.2和1.5/1.5 mL置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，可以得到依折麥布/阿托伐他汀濃度系列為1.14/1.12、2.28/2.24、5.7/5.6、9.12/8.96、11.4/11.2、13.68/13.44和17.1/ 16.8 μg/mL的樣品溶液，分別進(jìn)樣，根據(jù)“1.3.1項(xiàng)下”的色譜條件進(jìn)行測定并記錄峰面積。

1.3.5精密度試驗(yàn)（1）日內(nèi)精密度：取“1.3.2項(xiàng)下”所制對照品溶液，同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算峰面積的RSD。（2）日間精密度：取“1.3.2項(xiàng)下”所制對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 d，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算峰面積的RSD。

1.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取“1.3.2項(xiàng)下”所制對照品溶液，分別于第0、3、6、9、12和24 h進(jìn)樣，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算峰面積的RSD。

1.3.7重復(fù)性試驗(yàn)根據(jù)“1.3.2項(xiàng)下”供試品溶液的制備方法對同一批樣品進(jìn)行處理得到樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算峰面積的RSD。

1.3.8回收率試驗(yàn)精密稱取9份自制樣品的粉末51.3 mg置于25 mL量瓶中，分成3組，分別按照80%、100%和120%的比例加入阿托伐他汀和依折麥布對照品，按照“1.3.2項(xiàng)下”供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，進(jìn)樣，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行含量的測定，計(jì)算回收率。

1.3.9含量測定根據(jù)“1.3.2項(xiàng)下”供試品溶液的制備方法對3批樣品進(jìn)行處理得到樣品溶液，進(jìn)樣，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行測定，使用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算阿托伐他汀與依折麥布的含量。

1.3.10含量均勻度的測定取1粒待測自制樣品稱重后研磨均勻，全部轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，加入適量甲醇，超聲至粉末全部溶解后，繼續(xù)用甲醇稀釋定容至刻度。取一定量的溶液離心，2 000 r/min，5 min。取上清液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液1 mL置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋定容，即制得樣品溶液，進(jìn)樣，按照“1.3.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)行含量的測定。繼續(xù)按照該方法，重復(fù)測定10粒，計(jì)算每一粒的主藥含量，同時(shí)統(tǒng)計(jì)其均值和標(biāo)準(zhǔn)差，按照《中國藥典》2010版(二部)附錄XE規(guī)定[13]進(jìn)行測定。

2　結(jié)果

2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖見圖1。在“1.3.1項(xiàng)下”的色譜條件下，兩主藥之間、主藥與輔料之間可明顯分離，互不干擾。

2.2線性關(guān)系考察結(jié)果以阿托伐他汀的峰面積（A）對濃度（C）做線性回歸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程為A=49 864C+2 333.3，r=0.999 9，表明阿托伐他汀在1.12～16.8 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；以依折麥布的峰面積（A）對濃度（C）做線性回歸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程為A=46 607C+3 202.6，r=0.999 9，表明依折麥布在1.14～17.1 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3精密度試驗(yàn)結(jié)果阿托伐他汀和依折麥布的日內(nèi)精密度試驗(yàn)的RSD分別為0.78%和0.84%（n=6）；日間精密度試驗(yàn)的RSD分別為0.83%和0.53%（n=6），表明精密度良好。

2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果阿托伐他汀和依折麥布的RSD分別為0.88%和0.72%（n＝6），表明阿托伐他汀和依折麥布在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖1　系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Fig 1 System adaptability test

2.5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果阿托伐他汀和依折麥布的RSD分別為0.29%和0.63%（n=6），表明阿托伐他汀和依折麥布重復(fù)性良好。

2.6回收率試驗(yàn)結(jié)果自制復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊中阿托伐他汀與依折麥布的平均加樣回收率分別是100.58%和100.64%，RSD分別是1.18%和0.92%，符合要求，詳細(xì)測定結(jié)果見表1、2。

2.7含量測定結(jié)果3批樣品中阿托伐他汀和依折麥布的含量測定結(jié)果見表3。

表1　阿托伐他汀的回收率試驗(yàn)Tab 1 The recovery tests of atorvastatin

表2　依折麥布的回收率試驗(yàn)Tab 2 The recovery tests of ezetimibe

表3　阿托伐他汀和依折麥布的含量測定結(jié)果Tab 3 Content determination of atorvastatin and ezetimibe

2.8含量均勻度的測定結(jié)果根據(jù)測得含量計(jì)算A+1.80S，結(jié)果如下：樣品中阿托伐他汀的平均標(biāo)示量為105.62%，A+1.80S=7.63＜15.0；樣品中依折麥布的平均標(biāo)示量為105.09%，A+1.80S=8.54＜15.0。表明自制復(fù)方阿托伐他汀依折麥布膠囊中，阿托伐他汀和依折麥布的含量均勻度良好。

3　討論

3.1色譜條件的確定經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]得到同時(shí)測定阿托伐他汀和依折麥布含量的色譜條件為：流動相0.05 mol/L KH2PO4（調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈（45∶55），流速1.0 mL/min，檢測波長為236 nm。將混合對照品在上述色譜條件下進(jìn)行進(jìn)樣分析，兩種主藥分離度較低。調(diào)慢流速為0.8 mL/min，分離度仍沒有明顯改善，調(diào)回流速為1.0 mL/min，調(diào)節(jié)流動相的組成和比例，增加極性相對較小的甲醇，多次改變甲醇、乙腈和磷酸鹽的比例后得到最終流動相為0.05 mol/L KH2PO4（調(diào)節(jié)pH至3.0）-甲醇-乙腈（45∶5∶50），流速為1.0 mL/min。

3.2測定波長的選擇經(jīng)查閱文獻(xiàn)[6]得到同時(shí)測定阿托伐他汀和依折麥布含量時(shí)的檢測波長為236 nm，而試驗(yàn)中對混合對照品進(jìn)行紫外掃描時(shí)，得到的檢測波長為246 nm。故分別在246 nm和236 nm兩個(gè)波長處進(jìn)行含量測定，結(jié)果顯示，在236 nm時(shí)檢測阿托伐他汀和依折麥布兩個(gè)組份更加靈敏。因此我們選擇236 nm為此HPLC法的檢測波長。

3.3供試品溶液的制備方法阿托伐他汀和依折麥布水溶性均較差，而易溶于甲醇[14-16]。故本試驗(yàn)中用甲醇作為稀釋溶液溶解藥品顆粒，此時(shí)，藥品穩(wěn)定性好，且進(jìn)樣分析時(shí)色譜峰的峰形好。

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（2015-05-22收稿）

作者簡介李晗（1990-），男，碩士在讀，研究方向：藥物制劑與質(zhì)量控制研究；通信作者：房志仲，E- mail:fangzhizhong@tijmu.edu.cn。

文章編號1006－8147（2016）01-0076-04

中圖分類號R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A