宋　鑫，杭學(xué)宇，王　芹，王　露，馮曉青，徐　瑞，茅　力

(1.南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇南京 211166；2.淮安市疾病預(yù)防控制中心，江蘇淮安 223001)

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氣相色譜檢測(cè)水產(chǎn)品中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留*1

宋鑫1,2，杭學(xué)宇2，王芹1,2，王露2，馮曉青2，徐瑞2，茅力1△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇南京 211166；2.淮安市疾病預(yù)防控制中心，江蘇淮安 223001)

摘要:目的建立氣相色譜定量測(cè)定水產(chǎn)品中16種有機(jī)氯類混合農(nóng)藥殘留的方法。方法樣品由乙腈提取，以氨基固相萃取柱(Carb/NH2)凈化，經(jīng)氣相色譜檢測(cè)分析。結(jié)果16種化合物在0.05～1.00 mg/L內(nèi)線性關(guān)系良好(r>0.998)，各有機(jī)氯的檢出限為0.04～0.31 μg/kg(S/N=3)。在加標(biāo)水平為50、100、200 μg/kg時(shí)，該方法的回收率為72.6%～115.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%～7.5%。結(jié)論該研究建立的方法選擇性好、靈敏度高，適用于水產(chǎn)品中有機(jī)氯類農(nóng)藥的多殘留痕跡測(cè)定。

關(guān)鍵詞:氣相色譜；水產(chǎn)品；有機(jī)氯

近年來，水體污染越來越嚴(yán)重，水產(chǎn)品也不斷受到嚴(yán)重威脅，重金屬和有機(jī)物是其主要的污染物。因此,有必要對(duì)水產(chǎn)品進(jìn)行污染物監(jiān)測(cè)。有機(jī)氯農(nóng)藥作為殺蟲劑，具有殺蟲效率高、易分解等特點(diǎn)，在提高糧食和蔬菜的產(chǎn)量與質(zhì)量等方面起著積極的作用，為目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上控制病蟲害的主要農(nóng)藥之一。但是，在使用過程中存在著許多問題，如超劑量使用，使用禁用產(chǎn)品，不按操作規(guī)程使用等。因此，很容易污染水體，從而造成水產(chǎn)品中有機(jī)氯殘留超標(biāo)的問題,且有機(jī)氯可在人體內(nèi)蓄積導(dǎo)致中毒，因此對(duì)有機(jī)氯農(nóng)藥的監(jiān)管尤為重要。目前，農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[1-8]、氣相色譜-質(zhì)譜法[9-11]、液相色譜-質(zhì)譜法[12]等。但由于氣質(zhì)聯(lián)類儀器用較為昂貴，因此氣相色譜儀還是檢測(cè)農(nóng)藥殘留的主要儀器。本文建立了采用固相萃取凈化氣相色譜同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中16種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑(1)儀器：Agilent 6890N氣相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；FSH-Ⅱ型高速電動(dòng)勻漿器(環(huán)宇儀器公司)；TGL-16 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(湖南湘儀)；Vortex-genie22T 渦旋振蕩器(上海凌初公司)；Techne 氮吹儀(美國(guó)TECHNE公司)；AR2130 電子天平(感量0.000 1 g)；WSZ-20A振蕩器(上海-恒科技有限公司)；DIKMA 氨基固相萃取柱(Carb/NH2，迪馬)；LABOROTA4000eco 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó))。(2)試劑：16種有機(jī)氯農(nóng)藥單標(biāo)(100 μg/mL，1 mL)均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；乙腈、丙酮、正己烷(色譜純，默克)；氯化鈉(分析純)；無(wú)水硫酸鈉(分析純，使用前在650 ℃灼燒4 h，貯于干燥容器中，冷卻后備用)。16種有機(jī)氯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，精確吸取0.1 mL各有機(jī)氯農(nóng)藥單標(biāo)，用丙酮溶液定容至10 mL容量瓶中，配成1.0 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。精確吸取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，用丙酮溶劑稀釋，配制成含16種有機(jī)氯農(nóng)藥的質(zhì)量濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。(3)受檢試樣：試樣采購(gòu)自江蘇淮安地區(qū)市售的鯽魚、青蝦、螃蟹、河蚌等。分別取可食部分，勻漿后于-20 ℃下貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品提取稱取勻漿樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入5.0 g氯化鈉和20 mL乙腈，渦旋混勻1 min，超聲提取30 min，加入8.0 g無(wú)水硫酸鈉，渦旋混勻1 min，5 000 r/min離心5 min，取上清液于雞心瓶中。用10 mL乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液，30 ℃水浴中減壓濃縮至近干，待凈化。

1.2.2固相萃取凈化用5 mL丙酮-正己烷(1∶9，v/v)，5 mL正己烷依次活化氨基固相萃取柱(Carb/NH2)，提取氣相色譜液用正己烷復(fù)融至5 mL后上樣并收集，用20 mL丙酮-正己烷(1∶9，v/v)洗脫，收集合并洗脫液，30 ℃水浴中減壓濃縮至近干，用正己烷定容至1 mL過膜，待氣相色譜分析測(cè)定。

1.2.3氣相色譜分析條件色譜柱為HP-5(30 m×0.32 mm,25 μm) (美國(guó)Agilent公司)；電子捕獲檢測(cè)器(ECD)，300 ℃。載氣為氮?dú)?純度大于99.999%)；載氣流速為1.0 mL/min，尾吹50 mL/min。不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量為1 μL；柱溫程序采用程序升溫法，初始溫度為60 ℃，保持1 min；以40 ℃/min升至170 ℃；以2 ℃/min升至235 ℃；以40 ℃/min升至280 ℃。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2結(jié)果

2.1提取溶劑的選擇本試驗(yàn)對(duì)乙腈、丙酮-二氯甲烷(1∶1，v/v)、丙酮-正己烷(1∶1，v/v)等提取溶劑對(duì)有機(jī)氯農(nóng)藥的提取效率進(jìn)行了考察。以河蚌肉進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)(加標(biāo)水平為50 μg/kg，平行測(cè)定3次)進(jìn)行對(duì)比，見圖1(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。從中可以看出不同的提取溶劑對(duì)大多數(shù)的有機(jī)氯農(nóng)藥組分的提取效果相差不大。在對(duì)艾氏劑、b-六六六、狄氏劑等6種組分比較中，乙腈提取回收率為79.9%～95.3%，優(yōu)于丙酮-正己烷(65.3%～85.3%)和丙酮-二氯甲烷(48.6%～72.3%)，選用乙腈作為提取試劑。

2.2固相萃取柱選擇本試驗(yàn)通過了對(duì)Carb/NH2、Florisil凈化柱及C18固相萃取柱進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)比較，以鯽魚肉進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)(加標(biāo)水平為100 μg/kg，平行測(cè)定3次)進(jìn)行對(duì)比。從中得出各組分回收率在使用Carb/NH2時(shí)為92.6%～100.5%，F(xiàn)lorisil凈化柱為76.9%～89.3%，C18固相萃取柱為69.9%～81.3%，使用Carb/NH2凈化最優(yōu)。

2.3氣相色譜測(cè)定16種有機(jī)氯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 mg/L)和蟹肉基質(zhì)加標(biāo)(0.1 mg/L)的色譜圖見圖2、3。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用丙酮稀釋，將16種有機(jī)氯農(nóng)藥配制成質(zhì)量濃度分別為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行氣相色譜測(cè)定。每個(gè)濃度點(diǎn)平行測(cè)定3次，以峰面積平均值對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得到的回歸方程見表1。各有機(jī)氯農(nóng)藥的線性范圍在0.05～1.00 mg/L，相關(guān)系數(shù)均大于0.998。

1：α-六六六；2：β-六六六；3：γ-六六六；4：δ-六六六；5：七氯；6：艾氏劑；7：環(huán)氧七氯；8：g-氯丹；9：硫丹Ⅰ；10：a-氯丹；11：p,p′-滴滴伊；12：狄氏劑；13：異狄劑；14：硫丹Ⅱ；15：p,p′-滴滴滴；16：p,p′-滴滴涕。

圖216種有機(jī)氯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 mg/L)色譜圖

1～16：同圖1。

圖3　　蟹肉基質(zhì)加標(biāo)(0.1 mg/L)的色譜圖

2.5精密度檢測(cè)和回收試驗(yàn)分別取不含有上述16種農(nóng)藥的空白水產(chǎn)品樣品作為基質(zhì)，進(jìn)行低、中、高3種不同水平(50、100、200 μg/kg)的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)水平平行檢測(cè)6次，3個(gè)加標(biāo)水平的平均回收率為72.6%～115.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于7.5%，見表2(見《國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁(yè)“論文附件”)。說明方法的準(zhǔn)確度和精密度良好。

2.6樣品檢測(cè)應(yīng)用本方法對(duì)40份不同采樣地點(diǎn)的水產(chǎn)品，如鯽魚、青蝦、螃蟹、河蚌等樣品進(jìn)行有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，均未檢出有機(jī)氯。

3討論

目前，農(nóng)藥多殘留分析方法采用的提取溶劑有丙酮、作為二氯甲烷、乙腈、正己烷等。通過試驗(yàn)比較，本實(shí)驗(yàn)采用乙腈作為溶劑，而乙腈也具有通用性強(qiáng)，對(duì)農(nóng)藥的溶解度較大，可溶入油脂類雜質(zhì)少，且分子小，組織穿透能力強(qiáng)等特點(diǎn)。

使用固相萃取柱可以有效凈化基質(zhì)中脂肪等雜質(zhì)，而不同的固相萃取柱對(duì)樣品基質(zhì)凈化的效率也不相同。本文通過加標(biāo)回收試驗(yàn)比較了3種不同固相萃取柱的回收率，選擇Carb/NH2。

本文建立了采用乙腈提取，Carb/NH2固相萃取柱凈化，氣相色譜檢測(cè)水產(chǎn)品中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法。本方法檢測(cè)靈敏度高，精密度好，線性好，能滿足有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留分析的要求，為水產(chǎn)品類食物中有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留分析提供了可靠的檢測(cè)手段，也為有機(jī)氯類及其他農(nóng)藥品種的檢測(cè)提供了參考依據(jù)。

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Determination of organochlorine pesticide in aquatic products by gas chromatography*1

SongXin1,2，HangXueyu2，WangQin1,2，WangLu2，F(xiàn)engXiaoqing2，XuRui2，MaoLi1△

(1.CollegeofPublicHealth，NanjingMedicalUniversity，Nanjing,Jiangsu211166，China；2.HuaianCenterforDiseaseControlandPrevention，Huaian,Jiangsu223001,China)

Abstract:ObjectiveA method for quantitative determination of 16 kinds of organochlorine pesticide (OCPs) in aquatic products by gas chromatography (GC)was established.MethodsThe sample was extracted by acetonitrile,purified by Carb/NH2,and then determined by GC.ResultsThe linear relations of 16 kinds of OCPs were good at 0.05-1.00 mg/L(r>0.998).The limit of detection of OCPs was in the range of 0.04-0.31 μg/kg(S/N=3).When the standard levels were 50,100,200 μg/kg,the recovery rates were 72.6%-115.2%,the relative standard deviations were 0.6%-7.5%.ConclusionThe method established in this study is applied to the determination of 16 kinds of OCPs in real samples with satisfactory results.

Key words:gas chromatography；aquatic products；organochlorine pesticide

(收稿日期：2015-12-20)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.006

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)06-0733-03

基金項(xiàng)目：淮安市科技局科技發(fā)展計(jì)劃基金項(xiàng)目(HAS2015030)；2015年度淮安市疾控系統(tǒng)預(yù)防醫(yī)學(xué)科研課題項(xiàng)目 (hayf201520)。

作者簡(jiǎn)介：宋鑫，男，主管藥師，主要從事理化檢驗(yàn)研究。(△)通訊作者，E-mail：maoli@njmu.edu.cn。