李江

貴州省職工醫(yī)院檢驗科 貴州貴陽 550025

肺結核患者痰標本結核桿菌檢驗方法比較

李江

貴州省職工醫(yī)院檢驗科 貴州貴陽 550025

目的：探討肺結核患者痰標本中結核桿菌檢驗的方法，提高臨床診斷準確率。方法：對2014年1月-2014年6月我院結核門診接診的185例初診肺結核病患者采用膠體金法、涂片檢查法和PCR檢查法進行痰液結核菌檢查。結果：膠體金法、涂片檢查法和PCR檢查法對于結核桿菌的診斷陽性率分別為34.9%、22.2%和48.6%，其中PCR檢查法陽性率最高。陽性率兩兩比較（P＜0.05），具有統(tǒng)計學差異。結論：PCR檢查法應用于結核桿菌檢查檢驗，準確率較高，有利于患者疾病的及時治療。

結核桿菌；檢驗；PCR檢查法

結核桿菌是目前傳染病中威脅人類健康的二號殺手，具世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計顯示，每年大概有 900 萬新發(fā)結核病病例，每年死亡病例高達 300 萬[1]。我國結核病疫情比較嚴重，是全球 22個結核病高負擔國家之一，年發(fā)病人數約130萬，占全球發(fā)病人數的14%。近年來，隨著抗生素的濫用，結核桿菌耐藥性的日益加重，人口流動性增加和交叉感染等，導致結核病發(fā)病率呈上升趨勢。目前，結核病的診斷方法較多，包括：X線、涂片法、病原菌培養(yǎng)法和聚合酶鏈反應（PCR）等，而這些方法優(yōu)缺點各異。我們對2014年1月-2014年6月我院結核門診收治的肺結核患者痰結核菌檢測方法進行探討，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料：對2014年1月-2014年6月我院結核門診收治的185例結核患病者的臨床資料進行分析，其中男127例，女58例，年齡18歲-68歲。患者臨床表現為盜汗、乏力、咳嗽和低熱等。所有患者均得以確診，診斷標準參照《肺結核診斷和治療指南》[2]。患者感染部位主要為肺、胸膜和淋巴結等。

1.2 檢測方法：

所有患者均在清晨取深呼吸后咳出的痰液。

1.2.1 膠體金法，采用結核桿菌檢測試劑盒進行檢測，操作步驟嚴格按照說明書進行。主要步驟為，取約0.5 ml的痰液加入緩沖液后震蕩40s，放入37℃恒溫水浴鍋里孵育1h，加入緩沖液分離蛋白，插入試劑盒中的試紙，進行檢測。

1.2.2 涂片檢查法，取痰標本直接涂片，抗酸染色，通過顯微鏡檢檢測涂片上的結核菌。如果100個視野中，發(fā)現3-9條，即可確診為陽性[3]。

1.2.3 PCR檢查法，取1ml痰液于EP管中，13000 rpm離心 10 min，取上清，加生理鹽水洗滌1次，13000 rpm離心 10 min，取上清。于沉淀中加入 30ul TB 提取液，震蕩混勻，依次進行 100℃，30 min；37 ℃ 10min的水浴，13000 rpm離心 10 min，取上清，PCR 反應條件為95 ℃ 1 min、55 ℃ 30s、72 ℃ 1 min，循環(huán) 40 次。

1.3 統(tǒng)計學處理：采用統(tǒng)計學軟件SPSS 19.0 進行數據處理和分析。計數資料采用均數±標準差(±s)表示，計量資料比較采用t 檢驗，P＜0.05 表示具有統(tǒng)計學差異。

2.結果

檢測結果對比分析：膠體金法、涂片檢查法和 PCR檢查法對于結核桿菌的診斷陽性率分別為34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR檢測法陽性率最高，涂片檢查法準確率最低。準確率兩兩比較（P＜0.05），具有統(tǒng)計學差異。見表1。

表1 檢測結果對比分析

3.討論

結核桿菌是一種抗酸陽性棒狀桿菌，屬于結核分枝桿菌復合群，是一類慢生的分枝桿菌群體。肺結核時一種呼吸系統(tǒng)疾病，目前，其已成為傳染病中威脅人類健康的二號殺手，當病情不及時治療時，疾病可向腸道、腎臟和肝臟轉移等。中國結核疫情嚴重，具有感染人數多、發(fā)病人數多、新發(fā)患者多、死亡人數多、農村患者多和耐藥者多等特點。卡介苗是預防結核病的常用藥物，其對預防兒童腦膜炎結核、栗粒性結核等嚴重的結核病有預防作用，但對成人肺結核保護效率據文獻報道18%到80%不等，對潛伏感染結核幾乎無保護作用[4]。盡管卡介苗得到廣泛應用，但面對全球結核病疫情的蔓延卻無能為力。因此，臨床及時的診斷和治療對于生命健康至關重要。

結核病診斷應根據患者感染部位的不同而提取不同的標本，一般包括：痰液、尿、胸水、腦脊液、糞、心包液和組織勻漿等[5]。標本的收集、保存及檢驗的及時性，都是影響診斷結果的重要因素。大量臨床研究表明，對于肺結核患者而言，清晨所獲取的痰液污染率較低，能夠有效說明患者疾病狀況。因此，我們選取清晨深呼吸后咳出的痰液作為檢測標本。

目前，結核病診斷方法較多，包括X線、涂片法、病原菌培養(yǎng)法和聚合酶鏈反應（PCR）等。膠體金法是通過定性檢測結核菌的分泌性蛋白質而對疾病進行診斷。其原理為，將抗結核菌的分泌性蛋白純化后包被在膠體金上，當樣品中含有結核菌分泌性蛋白時，先和包被的膠體金標記物結合，產生反應，通過與試紙上的質控線進行對比，即可判斷。涂片檢查法是最普遍的方法，通過在痰液中檢測結核桿菌對疾病進行判定，具有操作簡便、費用低廉和易掌握等特點而得到臨床的廣泛應用，是檢驗結核病的“金標準”[6]。但是，大量臨床報道顯示，其靈敏度較差，敏感性低，準確率低，影響因素多，易受到檢驗人員人為差異、患者病情和痰液狀況的影響。PCR檢查法是一種以核酸生物化學為基礎的分子生物學診斷技術，具有靈敏度高、特異性好和快速高效等特點，而得到了臨床的廣泛運用[7]。其通過加入一條與靶基因序列互補的核苷酸探針，當標本出現擴增時，通過檢測熒光的變化，即可對診斷結果做出判斷。但相對于基層醫(yī)院，PCR檢查法投入儀器成本較高。

為探討結核患者痰結核桿菌檢驗的方法，提高臨床診斷準確率。我們對2014年10月-2016年10月我院結核門診收治的185例結核桿菌患者采用膠體金法、涂片檢查法和 PCR檢查法對患者痰液進行檢查。結果顯示，膠體金法、涂片檢查法和 PCR檢測法對于結核桿菌的檢測陽性率分別為34.1%、22.2%和43.8%，其中PCR檢查法陽性率最高。準確率兩兩比較（P＜0.05），具有統(tǒng)計學差異。

綜上所述，PCR檢查法應用于結核桿菌檢查，陽性率較高，可為疾病診斷提供可靠的依據，有利于肺結核患者疾病的及時診斷和治療，對于改善肺結核患者的預后具有重要的作用。

[1]World Health Organization (WHO).WHO Report 2008-Global tuberculosis control- surveillance, planning,financing [J].World Health Organization; 2008.

[2]中華醫(yī)學會結核病學分會.肺結核診斷和治療指南[J].中華結核和呼吸雜志，2001，24（2）：70-74.

[3]楊光武.不同檢驗方法在肺結核早期診斷中的應用[J].航空航天醫(yī)學雜志，2012，23（3）：309-310.

[4]吳雪瓊.新型結核病疫苗的研究現狀與發(fā)展趨勢[J].2012，34（3）：133-135.

[5]朱杰.肺結核患者痰結核桿菌的實驗室檢查分析[J].世界最新醫(yī)學信息文摘，2016，16（23）：129-130.

[6]楊巍巍.結核患者痰結核桿菌檢驗的方法探討[J].中國醫(yī)藥指南，2013,11（4）：258-259.

[7]辛茶香，胡銀英，熊麗.三種檢測方法對結核患者標本中結核分枝桿菌檢出率的比較[J].江西醫(yī)學院學報，2008，48（1）：92-93.

R521

A

1672-5018（2016）11-246-01

李江，男，貴州省職工醫(yī)院檢驗科，郵編：550025，主要從事醫(yī)學檢驗，副主任技師。