王保衛(wèi)

【摘要】 目的 探討抗凋亡因子Survivin與促凋亡蛋白Smac聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及臨床診斷意義。方法 80例甲狀腺腫瘤患者（患者組）及80例健康志愿者（對(duì)照組）為研究對(duì)象， 采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)技術(shù)， 對(duì)兩組甲狀腺細(xì)胞中Survivin與Smac的mRNA的表達(dá)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析研究。結(jié)果 患者組的Survivin及Smac陽(yáng)性率分別為65.00%及78.75%， 高于對(duì)照組的8.75%及25.00%， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。結(jié)論 Survivin在惡性腫瘤患者腫瘤細(xì)胞中表達(dá)劇烈， 而Smac表達(dá)率則隨之下降， Survivin及Smac表達(dá)率與甲狀腺腫瘤患者腫瘤惡化、好轉(zhuǎn)、良性、惡性腫瘤區(qū)分等密切相關(guān)， 聯(lián)合檢測(cè)在診斷甲狀腺腫瘤方面具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 甲狀腺腫瘤；Survivin；Smac；聯(lián)合檢測(cè)；診斷意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.10.025

甲狀腺腫瘤是臨床最為常見的內(nèi)分泌腫瘤之一， 隨著現(xiàn)代環(huán)境的惡化、人們生活節(jié)奏的加快加之不健康的生活作息、飲食習(xí)慣， 該疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢(shì)[1]， 尤其對(duì)女性的生命健康更是嚴(yán)重的威脅[2]。Survivin和Smac是一組重要的且功能相互拮抗的凋亡調(diào)控蛋白， 通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)技術(shù)能夠精確的測(cè)量其在甲狀腺腫瘤患者腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)效率與正常人體內(nèi)表達(dá)效率之間的差異， 從而確定Survivin與Smac聯(lián)合檢測(cè)在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及臨床診斷意義。本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)患者與健康志愿者的對(duì)照試驗(yàn)展開探討， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2011年3月～2014年9月接收治療的80例甲狀腺腫瘤患者（患者組）及80例健康志愿者（對(duì)照組）為研究對(duì)象?；颊呓M中男12例， 女68例；年齡16～71歲；病程1～4年。對(duì)照組中男11例， 女69例， 年齡15～73歲。兩組研究對(duì)象性別、年齡等一般資料比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 首先取患者甲狀腺腫瘤細(xì)胞以及志愿者甲狀腺細(xì)胞備用， 配置PCR反應(yīng)體系應(yīng)用SYBR Green Ⅰ熒光染料技術(shù)擴(kuò)增待測(cè)基因及內(nèi)參基因， 然后按說(shuō)明書應(yīng)用Survivin， Smac以及內(nèi)參引物逆轉(zhuǎn)錄成的cDNA。反應(yīng)體系總體積20 μl， 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變10 s， 分別以95及60℃進(jìn)行5及34 s循環(huán)， 共計(jì)循環(huán)40次， 最后進(jìn)行溶解曲線分析。設(shè)計(jì)陰性對(duì)照參考， 計(jì)算機(jī)分析Ct值， 即每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)熒光強(qiáng)度達(dá)到系統(tǒng)認(rèn)為的有效DNA合成時(shí)的循環(huán)數(shù)， 用以評(píng)定各因子mRNA的實(shí)時(shí)定量相對(duì)表達(dá)水平。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

患者組的Survivin及Smac陽(yáng)性率分別為65.00%（52例）及78.75%（63例）， 顯著高于對(duì)照組的8.75%及25.00%， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。見表1。

3 討論

細(xì)胞凋亡是機(jī)體新陳代謝或自我調(diào)節(jié)的一種重要方式， 一旦人體原癌基因激活， 細(xì)胞正常生命周期就會(huì)紊亂， 通過(guò)非正?；虻谋磉_(dá)， 抑制細(xì)胞凋亡蛋白正常功能， 導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[3]。現(xiàn)代臨床研究表明， 甲狀腺腫瘤的發(fā)生與性別、遺傳、體質(zhì)、生活環(huán)境、輻射等因素密切相關(guān)， 女性發(fā)病率顯著高于男性。甲狀腺腫瘤的好轉(zhuǎn)、惡化、轉(zhuǎn)移等可以根據(jù)體內(nèi)Survivin以及Smac的mRNA表達(dá)率來(lái)顯示， 其中Survivin陽(yáng)性率與甲狀腺腫瘤惡化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移幾率呈正相關(guān)， 惡性腫瘤患者癌細(xì)胞中Survivin陽(yáng)性率高達(dá)80%以上；Smac陽(yáng)性率與甲狀腺腫瘤的好轉(zhuǎn)、抑制效果呈正相關(guān)， 良性腫瘤患者體內(nèi)Smac陽(yáng)性率顯著優(yōu)于惡性腫瘤患者， 即Survivin以及Smac在癌癥患者體內(nèi)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)[4]。

Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的IAPs家族中的成員， 其病理機(jī)制在于對(duì)凋亡信號(hào)下游半光天冬酶-3（Caspase-3）和半光天冬酶-7（Caspase-7）產(chǎn)生抑制作用， 進(jìn)而抑制細(xì)胞的凋亡， 從而使癌細(xì)胞無(wú)限增值分裂。該基因在正常細(xì)胞中的表達(dá)率很低， 幾乎不表達(dá)， 癌細(xì)胞中陽(yáng)性率很高[5]， 這與本次研究結(jié)果一致。Smac是一種存在于線粒體并且調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的蛋白質(zhì)。一方面 Smac通過(guò)抑制IAPs（包括Survivin）激活Caspase-9和Caspase-3而促進(jìn)細(xì)胞凋亡；另一方面， Survivin能與Smac結(jié)合， 解除Smac對(duì)其他IAP成員的抑制作用[6]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示， Survivin以及Smac在甲狀腺細(xì)胞中的表達(dá)與甲狀腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)， 兩者之間通過(guò)互相調(diào)節(jié)， 共同參與甲狀腺癌變過(guò)程。

綜上所述， Survivin和Smac的檢測(cè)對(duì)甲狀腺腫瘤的生物學(xué)行為評(píng)估和判斷預(yù)后具有重要意義， 根據(jù)Survivin和Smac的mRNA在甲狀腺細(xì)胞中的表達(dá)率可以準(zhǔn)確的診斷甲狀腺腫瘤， 達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早治療以及及時(shí)檢測(cè)病情變化的目的， 對(duì)于提高甲狀腺腫瘤臨床治療效率具有很好的臨床推廣前景。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃堃， 龔衛(wèi)東， 王南鵬， 等. galectin-3、HBME-1、CK19及RET在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)情況及其臨床價(jià)值. 中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志， 2013， 20 （2）：156-160.

[2] 鄭榮壽， 張思維， 吳良有， 等.中國(guó)腫瘤登記地區(qū)2008年惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析.中國(guó)腫瘤， 2012， 21（1）：1-12.

[3] 陳輝， 王云云， 劉艷.復(fù)合熒光RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TBX2和p53在甲狀腺癌表達(dá)及臨床診斷意義.中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué)， 2013， 22 （9）：777-779.

[4] 徐冬香， 游慶華， 土愛(ài)華， 等. Survivin和Smac在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及意義.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2011， 8（16）：109-111.

[5] 孫紅芹， 趙長(zhǎng)林， 胡芳娟， 等.直腸癌組織Smac與Survivin表達(dá)及其臨床意義的探討.中華腫瘤防治雜志， 2011， 18（12）：956-960.

[6] 李世森， 秦思達(dá)， 王希方， 等.食管鱗狀細(xì)胞癌中Survivin與Smac蛋白的表達(dá)及臨床意義.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)， 2013， 21（1）：75-78.

[收稿日期：2015-11-09]