張 巖，劉運德

（1．天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津300070；2．天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院檢驗科，天津300070）

論著

安圖化學(xué)發(fā)光法檢測高血壓5項激素相關(guān)性分析

張 巖1，劉運德2

（1．天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津300070；2．天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院檢驗科，天津300070）

目的：分析不同廠家試劑盒檢測高血壓5項激素[腎素、血管緊張素Ⅱ（AⅡ）、醛固酮（ALD）、皮質(zhì)醇（COR）和促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）]濃度值差異，并探討用化學(xué)發(fā)光法檢測高血壓5項激素濃度值對原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究的意義。方法：選取159例高血壓患者(收縮壓≥140 mmHg，舒張壓≥90 mmHg)，分別用DRG酶聯(lián)免疫試劑盒和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測定腎素濃度；選取138例高血壓患者，分別用ENZO酶聯(lián)免疫試劑盒和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測定AⅡ濃度；選取146例高血壓患者，分別用IBL酶聯(lián)免疫試劑盒和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測定ALD濃度；選取239例高血壓患者及316例高血壓患者，分別用ROCHE全自動電化學(xué)發(fā)光試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測定COR及ACTH濃度。結(jié)果：不同廠家試劑盒檢測高血壓濃度存在一定的偏差，但相關(guān)性良好（相關(guān)系數(shù)R＞0．95）。結(jié)論：化學(xué)發(fā)光法做為一種高靈敏、高特異、高準(zhǔn)確的定量檢測方法，定量檢測高血壓5項激素對原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究具有重要的意義。

腎素；血管緊張素Ⅱ；醛固酮；皮質(zhì)醇；促腎上腺皮質(zhì)激素；化學(xué)發(fā)光法；高血壓

據(jù)2010年全國居民營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查資料顯示，我國成人高血壓患病率為18．8%，全國有高血壓患者約1．6億[1]。在高血壓的診治中,除原發(fā)性高血壓外，還有一組特殊群體—繼發(fā)性高血壓也不能忽視[2]。原發(fā)性高血壓憑目前的醫(yī)學(xué)技術(shù)尚無法查明病因，因此只能長期服降壓藥來控制，而繼發(fā)性高血壓則不同，由某些特定的病因引起，且往往由于血壓長期居高不下，藥物治療很難奏效，但可以通過查明病因來有效控制血壓[3]。目前檢測高血壓5項[腎素、血管緊張素Ⅱ（AⅡ）、醛固酮（ALD）、皮質(zhì)醇（COR）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）]已成為原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究的重要指標(biāo)[4-6]，而現(xiàn)今國內(nèi)進(jìn)行高血壓5項檢測采用ELISA以及放射免疫分析法（RIA）占多數(shù)。隨著中國檢驗技術(shù)的進(jìn)步，化學(xué)發(fā)光法（CLIA）定量檢測試劑盒也進(jìn)入了中國市場，不同廠家由于使用包被物、標(biāo)記材料及方法學(xué)等方面的差異，會出現(xiàn)同一份標(biāo)本用不同廠家試劑盒檢測數(shù)值方面的差異[7]，為此我們開展了該方面的研究。

1 資料和方法

1．1 一般資料

1．1．1 2013年3月-2014年3月天津市代謝病醫(yī)院收治的159例高血壓患者（收縮壓≥140 mmHg，舒張壓≥90 mmHg），男性106例，女性53例，年齡42～68歲，平均55歲，病程2～10年，其中輕型48例（149 mmHg≥收縮壓≥140 mmHg和/或99 mmHg≥舒張壓≥90mmHg），中型85例（179mmHg≥收縮壓≥160 mmHg和/或109 mmHg≥舒張壓≥100 mmHg），重型26例（收縮壓≥180 mmHg和/或舒張壓≥100 mmHg）[8]，用于進(jìn)行腎素的測定。

1．1．2 2013年8月-2014年2月河南省人民醫(yī)院收治的146例高血壓患者，男性96例，女性50例，年齡45～65歲，平均57歲，病程2～10年，其中輕型48例，中型64例，重型26例，用于進(jìn)行血管緊張素Ⅱ的測定。

1．1．3 2013年8月-2014年2月天津市代謝病醫(yī)院收治的138例高血壓患者，男性86例，女性52例，年齡42～68歲，平均55歲，病程2～10年，其中輕型48例，中型64例，重型34例，用于進(jìn)行醛固酮的測定。

1．1．4 2012年l2月-2014年1月鄭州安圖生物有限公司收集的239例高血壓患者，男性158例，女性81例，年齡42～70歲，平均58歲，病程2～10年，其中輕型68例，中型124例，重型47例，用于進(jìn)行皮質(zhì)醇的測定。

1．1．5 2012年l2月-2014年1月鄭州安圖生物有限公司收集的316例高血壓患者，男性219例，女性97例，年齡42～68歲，平均55歲，病程2～10年，其中輕型98例，中型164例，重型54例，用于促腎上腺皮質(zhì)激素的檢測。

1．1．6 由于標(biāo)本用量和需要病人配合，另外可以減小隨機(jī)誤差，故每個比較組采用不同來源臨床標(biāo)本。

1．1．7 測定前患者應(yīng)停用降壓藥3周以上；停用利尿劑4周以上；停用避孕藥6周以上；不宜停藥的患者應(yīng)改用對試驗影響較小的藥物。

區(qū)域噴發(fā)活動以石炭早期的噴發(fā)活動為主，二疊世噴發(fā)次之。巖性主要是輝石安山玢巖、安山玢巖。噴發(fā)類型為爆發(fā)相—噴溢相。海底噴發(fā)為主，陸相噴發(fā)次之。

1.2 不同試劑盒方法學(xué)和對比方法

1.2.1 由于代理商供貨問題，與安圖對比的試劑盒采用不同廠家的試劑盒，均為進(jìn)口已上市公司。

1.2.2 DRG腎素定量檢測試劑盒（ELISA），為定量檢測試劑，正常參考值范圍為0.81～128 pg/mL。

1.2.3 ENZO血管緊張素Ⅱ定量檢測試劑盒（ELISA），為定量檢測試劑，正常參考值范圍為4.6～1 000 pg/mL。

1.2.4 IBL醛固酮定量檢測試劑盒（ELISA），為定量檢測試劑，正常參考值范圍為10～1 000 pg/mL。

1.2.5 羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光儀，與其配套的皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素定量檢測試劑盒，正常參考值范圍分別為0.018～63.4μg/dL及1.0～2000pg/mL。

1.3 測定方法

1.3.1 腎素的測定 利用DRG腎素定量檢測試劑盒及鄭州安圖生物腎素定量檢測試劑盒分別測定159例高血壓患者血漿中腎素的含量。

1.3.2 血管緊張素Ⅱ的測定 利用ENZO血管緊張素Ⅱ定量檢測試劑盒及鄭州安圖生物血管緊張素Ⅱ定量檢測試劑盒分別測定138例高血壓患者血漿中血管緊張素Ⅱ的含量。

1.3.3 醛固酮的測定 利用IBL醛固酮定量檢測試劑盒及鄭州安圖生物醛固酮定量檢測試劑盒分別測定159例高血壓患者血漿中血管緊張素Ⅱ的含量。

1.3.4 皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素的測定 利用羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光儀及鄭州安圖生物皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素定量檢測試劑盒分別測定239例及316例高血壓患者血漿中皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素的含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，檢測結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 腎素檢測 DRG酶免定量試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中腎素含量方面無顯著差別,回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，綜合分析對比結(jié)果,兩方試劑均按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量溯源,相關(guān)性分析見圖1。

圖1 腎素檢測相關(guān)性分析Fig 1 Correlation analysis of renin detection

2.2 AⅡ檢測 ENZO酶免定量試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中AⅡ含量方面無顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見圖2。

圖2 血管緊張素Ⅱ檢測相關(guān)性分析Fig 2 Correlation analysis of angiotensinⅡdetection

2.3 ALD檢測 IBL酶免定量試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中ALD含量方面無顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見圖3。

圖3 醛固酮檢測相關(guān)性分析Fig 3 Correlation analysis of aldosterone detection

2.4 COR檢測 羅氏電化學(xué)發(fā)光試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中COR含量方面無顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見圖4。

圖4 皮質(zhì)醇檢測相關(guān)性分析Fig 4 Correlation analysis of cortisol detection

2.5 ACTH檢測 羅氏電化學(xué)發(fā)光試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中ACTH含量方面無顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見圖5。

圖5 促腎上腺皮質(zhì)激素檢測相關(guān)性分析Fig 5 Correlation analysis of the detection of ACTH

3 討論

通過對不同廠家試劑盒檢測高血壓5項激素濃度值進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在定量標(biāo)準(zhǔn)的選取方面和臨床樣本檢測方面，目前市場檢測高血壓的主要方法和鄭州安圖生物化學(xué)發(fā)光定量檢測試劑盒無顯著性差異，相關(guān)性R大于0.95。

化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量化學(xué)物質(zhì)的一項新型免疫測定技術(shù)。其檢測原理是借助發(fā)光底物自身的發(fā)光強(qiáng)度直接進(jìn)行測定。酶促化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的原理在于免疫反應(yīng)中的酶作用于發(fā)光底物,發(fā)光底物在酶的作用下,產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。當(dāng)這種中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時,可發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號測量儀器可測量光量子產(chǎn)額。由此可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算樣品中待測物質(zhì)的含量[9]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析具有高靈敏度和寬線性范圍，廣泛適用于高血壓5項激素的定量檢測。

研究發(fā)現(xiàn)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）基因的變異參與了原發(fā)性高血壓的發(fā)生[10]，RAAS是一個十分復(fù)雜的多層次的內(nèi)分泌系統(tǒng),有研究發(fā)現(xiàn)腎素活性（PRA）和ALD水平可能顯著影響著血壓的晝夜節(jié)律模式[11],并與靶器官損害有密切關(guān)系[12]。雖然目前COR導(dǎo)致血壓升高的機(jī)制仍不明確,但其可能通過多種作用途徑直接或間接的導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生一系列異常,包括血容量的增加、外周血管阻力增加、心輸出量增加等病理生理改變[13-14]。高分泌的COR與皮質(zhì)醇增多癥的高血壓發(fā)病機(jī)制相關(guān)，皮質(zhì)醇增多癥分為ACTH依賴性（COR高、ACTH高）和ACTH非依賴性（COR高、ACTH低）兩種類型[15]。皮質(zhì)醇增多癥是一種能夠引起繼發(fā)性高血壓的重要疾病,其中80%以上的成人皮質(zhì)醇增多癥患者伴發(fā)高血壓，因此檢測高血壓5項激素已成為原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究的重要指標(biāo)。

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（2015-10-25收稿）

R544．1

A

1006－8147（2016）03-0253-03

張巖（1984-），男，技師，碩士在讀，研究方向：免疫學(xué)；通信作者：劉運德,E-mail：yundeliu@126.com。