許文艷，涂云貴，杜巧麗

(昆鋼醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明 650302)

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·經(jīng)驗(yàn)交流·

血小板假性減少的原因分析與對(duì)策

許文艷，涂云貴，杜巧麗

(昆鋼醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明 650302)

摘要:目的探討導(dǎo)致血小板假性減少的原因與對(duì)策。方法選取78例在云南昆鋼醫(yī)院就診時(shí)應(yīng)用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)時(shí)血小板計(jì)數(shù)減少、直方圖異常或異常報(bào)警的患者標(biāo)本，分別用草酸銨法手工計(jì)數(shù)血小板和涂片鏡檢觀察血小板數(shù)量和形態(tài)分布，間接判斷血小板數(shù)量。以草酸銨法手工計(jì)數(shù)血小板為參照，糾正假性血小板減少的誤報(bào)，保證血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。另外對(duì)2014年6月至2015年10月確診為EDTA-K2依賴性血小板假性減少癥(PTCP)病例3例，采集靜脈血2 mL 3份分別加入無(wú)抗凝劑真空管、EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，檢測(cè)不同時(shí)間內(nèi)血小板數(shù)量的變化，并與草酸銨法比較。結(jié)果在78例血小板直方圖異常的標(biāo)本中，3例有血小板凝集，62例存在比例不同的大血小板，10例存在小紅細(xì)胞、1例PTCP、2例存在紅細(xì)胞碎片；EDTA-K2、枸櫞酸鈉與草酸銨法檢測(cè)PTCP患者血小板結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論涂片鏡檢復(fù)查及草酸銨手工法，對(duì)發(fā)現(xiàn)血小板假性減少有重要意義；確診為PTCP的患者應(yīng)采用無(wú)抗凝劑真空管采血后即刻檢測(cè)，可獲得準(zhǔn)確的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果。

關(guān)鍵詞:血細(xì)胞分析儀；直方圖；EDTA-K2依賴性；血小板假性減少癥

血小板是臨床最常用的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)之一，目前臨床血小板計(jì)數(shù)多使用全自動(dòng)細(xì)胞分析儀完成,但由于其特異的生理特性,血小板的數(shù)量容易受多種因素的影響，主要為樣本凝集、樣本量不足、樣本被稀釋、冷凝集樣本、自身凝集樣本、小紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片、大血小板等[1]。因此，在臨床工作中，血小板計(jì)數(shù)結(jié)果波動(dòng)大是困擾臨床和檢驗(yàn)科的難題，那如何才能保證血小板的計(jì)數(shù)準(zhǔn)確呢？為此，筆者通過(guò)在工作中不斷探索，取得了滿意的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源本院門(mén)診住院各科患者靜脈血標(biāo)本2 mL,用EDTA-K2抗凝,篩選出血小板計(jì)數(shù)減少、直方圖異常或異常報(bào)警的標(biāo)本共78例,標(biāo)本的采集嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)[2]進(jìn)行,且在4 h完成所有的操作。

1.2儀器與試劑采用Sysemx的XS-800i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀和原裝配套試劑。標(biāo)本的檢測(cè)嚴(yán)格照儀器操作說(shuō)明書(shū)的要求執(zhí)行,檢測(cè)前儀器狀態(tài)良好,室內(nèi)質(zhì)控在控。手工計(jì)數(shù)所用的草酸銨稀釋液，試劑及操作按配《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)執(zhí)行。Olympus BX-46雙目光學(xué)顯微鏡用于血涂片顯微鏡分析；血涂片采用自配的瑞氏染液。

1.3方法常規(guī)用含EDTA-K2抗凝的真空采血管抽取患者靜脈血2 mL，充分混勻后上機(jī)檢測(cè)，注意觀察血小板計(jì)數(shù)結(jié)果和直方圖。如發(fā)現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)減少、直方圖異常或異常報(bào)警時(shí)，立即觀察血液外觀，是否有肉眼可見(jiàn)凝集，如有凝集，即為血液抗凝不充分導(dǎo)致血小板凝集所致假性血小板減少。如無(wú)肉眼可見(jiàn)凝集，取抗凝血制作血涂片，待涂片自然干燥，用瑞氏染液進(jìn)行染色后在電光源顯微鏡下用油鏡觀察涂片中的血小板平均數(shù)量、形態(tài)和分布情況。正常情況下,在血片厚薄適中區(qū)域(每個(gè)紅細(xì)胞彼此相互接觸但不重疊),每個(gè)油鏡視野約有血小板8～15個(gè)；少于8個(gè)/油鏡可初步認(rèn)為血小板減少；大于30個(gè)/油鏡視野則可初步認(rèn)為血小板增加。油鏡下的細(xì)胞形態(tài)異常判斷標(biāo)準(zhǔn):(1)血小板凝集:血小板5個(gè)以上成堆；(2)細(xì)胞碎片:各種不完整形狀的細(xì)胞碎片；(3)巨、大血小板:直徑6 μm以上或直徑4～6 μm。對(duì)血小板減少者均重新采血并注意充分混勻后上機(jī)檢測(cè)，同時(shí)使用草酸銨稀釋液進(jìn)行手工計(jì)數(shù)[3]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料差異采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

3例標(biāo)本重新采血后血小板數(shù)量為正常，可能由于采血不順或未充分混勻?qū)е卵耗淘斐裳“寮傩詼p少；62例標(biāo)本在血涂片上可見(jiàn)數(shù)量不等的大、巨血小板；10例標(biāo)本可見(jiàn)小紅細(xì)胞；2例標(biāo)本可見(jiàn)紅細(xì)胞碎片；1例標(biāo)本在抗凝血涂片中可見(jiàn)血小板聚集，因正常情況下在抗凝血涂片中血小板是散在分布的，而在抗凝血涂片易見(jiàn)3～5個(gè)血小板聚集,初步考慮為EDTA依賴性假性血小板減少，重新用無(wú)抗凝劑真空管采血后即刻檢測(cè)后血小板計(jì)數(shù)正常。2014年6月至2015年10月共發(fā)現(xiàn)3例EDTA-K2依賴性血小板假性減少癥(PTCP)，均采用含EDTA-K2、枸櫞酸鈉及不含抗凝劑的真空采血管重新采血后上機(jī)檢測(cè)，并檢測(cè)不同時(shí)間血小板計(jì)數(shù)變化的規(guī)律。見(jiàn)表1。EDTA和枸櫞酸鈉抗凝的標(biāo)本血小板結(jié)果均低于無(wú)抗凝劑即刻檢測(cè)法與草酸銨法，這可能與EDTA和枸櫞酸鈉能誘導(dǎo)PLT相關(guān)IgG抗體的異常增高有關(guān)[4]。因此對(duì)于確診為PTCP的患者，宜采用無(wú)抗凝劑的真空管即刻檢測(cè)，可獲得較為準(zhǔn)確的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果。

表1　　3種檢測(cè)方法于不同時(shí)間內(nèi)同時(shí)檢測(cè)3例

A：無(wú)抗凝劑即刻檢測(cè)法；B:EDTA法；C：枸櫞酸鈉法；D：草酸銨法。

以手工草酸銨法檢測(cè)作為對(duì)照，比較無(wú)抗凝劑法、EDTA法、枸櫞酸鈉法在0、10、30和60min不同時(shí)刻血小板計(jì)數(shù)的差異。除0min時(shí)無(wú)抗凝劑與手工草酸銨檢測(cè)的血小板計(jì)數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P=0.38)，其余各抗凝劑在不同時(shí)間與對(duì)照方法的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。經(jīng)兩因素方差分析顯示，不同檢測(cè)時(shí)間里各抗凝劑間血小板計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P<0.05)。

表2　　　　　使用不同抗凝劑在不同時(shí)間計(jì)數(shù)血小板與

*：與對(duì)照方法比較。

3討論

血小板計(jì)數(shù)的波動(dòng)較大是臨床實(shí)際工作中一個(gè)常見(jiàn)的問(wèn)題，可使檢驗(yàn)醫(yī)師不敢貿(mào)然報(bào)告，也給臨床的診斷帶來(lái)困擾。分析其原因，一方面是人為因素造成，主要是部分臨床護(hù)理人員在采集患者標(biāo)本時(shí)操作不規(guī)范，標(biāo)本與抗凝劑未充分混勻；或采血不順利，導(dǎo)致標(biāo)本凝集或不完全凝集，使血小板計(jì)數(shù)假性降低。另一方面，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用的全自動(dòng)血球分析儀采用電阻抗原理，血小板測(cè)量和紅細(xì)胞測(cè)量在同一個(gè)通道，通常不能完全排除血小板凝集、大血小板、血小板衛(wèi)星現(xiàn)象、血小板碎片、體外溶血、冷球蛋白等對(duì)血小板計(jì)數(shù)造成的干擾。因此在工作中發(fā)現(xiàn)血小板計(jì)數(shù)減少、直方圖異?；虍惓?bào)警時(shí)，操作人員應(yīng)首先觀察標(biāo)本是否有凝集，然后重新采血進(jìn)行手工計(jì)數(shù)復(fù)查，并同時(shí)制作血涂片染色進(jìn)行觀察。通過(guò)顯微鏡鏡檢，不僅能觀察血涂片中血小板的數(shù)量，還能觀察血小板聚集情況,直接排除大血小板、小紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片和血小板凝集對(duì)血小板的干擾。通過(guò)顯微鏡鏡檢觀察血小板分布的數(shù)量和形態(tài)后，再結(jié)合手工計(jì)數(shù)的結(jié)果最終再發(fā)報(bào)告，可以得出一個(gè)更加準(zhǔn)確的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果以指導(dǎo)臨床診斷和治療?？傮w來(lái)說(shuō),顯微鏡涂片復(fù)檢觀察血小板的數(shù)量和形態(tài)及草酸銨法手工計(jì)數(shù)血小板是對(duì)儀器法的很好補(bǔ)充,對(duì)及早發(fā)現(xiàn)和糾正血小板計(jì)數(shù)假性降低有明顯意義。在日常工作中還應(yīng)加強(qiáng)與臨床醫(yī)護(hù)人員的溝通和交流，使臨床理解并主動(dòng)配合檢驗(yàn)科對(duì)標(biāo)本采集的要求，提高血細(xì)胞分析標(biāo)本的質(zhì)量。同時(shí)應(yīng)主動(dòng)詢問(wèn)患者的情況，用臨床思維去分析判斷結(jié)果，只有這樣，才能提高檢驗(yàn)質(zhì)量，為臨床提供準(zhǔn)確的報(bào)告。

參考文獻(xiàn)

[1]劉善鳳，王利民，曾筱倩，等．涂片鏡檢對(duì)初步糾正血小板假性降低的意義[J]．臨床血液學(xué)雜志:輸血與檢驗(yàn)版，2010，23(2)：193-195．

[2]尚紅，王毓三，申子喻．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M]．4版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2015:14-15．

[3]朱忠勇．準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板方法學(xué)研究進(jìn)展[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè)，2002，23(3)：131-132．

[4]邵永生，鄭宏偉．組合檢驗(yàn)法在EDTA依賴性假性血小板減少癥中的應(yīng)用[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(16)：2036-2037．

(收稿日期：2016-02-02)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.067

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4130(2016)08-1157-02