紅千層組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究

朱尾銀

摘 要：該研究以優(yōu)選紅千層新萌發(fā)的嫩芽莖段為外植體進(jìn)行組培快繁。結(jié)果表明：紅千層的啟動培養(yǎng)基以MS+6-BA1.0mg/L + NAA0.2～0.3mg/L最為合適；增殖培養(yǎng)基以改良MS+6-BA0.6mg/L +KT0.2mg/L +NAA0.2mg/L較好；生根培養(yǎng)基以改良1/3MS+NAA0.2mg/L+IBA0.25mg/L+Ac0.15g/L為最佳，生根率可達(dá)95%以上。

關(guān)鍵詞：紅千層；離體培養(yǎng)；莖段

中圖分類號 S79 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-7731（2016）10-0094-03

Tissue Culture and Rapid Propagation of Callistemon rigidus

Zhu Weiyin

（The Experiment Center of Forestry Science and Technique of Fujian Province，Nanjing 363600，China）

Abstract：Using the stem-segment with single bud as the explant，we studied the rapid propagation of Callistemon rigidus. The results indicated that the suitable culture medium at different culture stages was：initial medium MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L，the subculture medium should be MS+6-BA0.6mg/L +KT0.2mg/L +NAA0.2mg/L and the best rooting medium was 1/3 MS+NAA0.2mg/L +IBA0.25mg/L +Ac0.15g/L，the rooting rate was above 95%

Key words：Callistemon rigidus；In vitro culuture；Stem section

紅千層Callistemon rigidus R.Br，屬桃金娘科紅千層屬常綠樹種，小喬木，原產(chǎn)澳大利亞，樹皮堅硬，灰褐色；嫩枝有棱，葉片堅革質(zhì)，線形，先端尖銳，葉柄極短；穗狀花序生于枝頂，萼管略被毛，萼齒半圓形，近膜質(zhì)；花瓣綠色，卵形，長6mm，寬4.5mm，有油腺點；雄蕊長2.5cm，鮮紅色，花藥暗紫色，橢圓形；花柱比雄蕊稍長，先端綠色，其余紅色；屬陽性樹種，喜溫暖、濕潤氣候，能耐烈日酷暑和嚴(yán)寒，抗性好，病蟲害少，耐貧瘠，具生長快、萌芽力強(qiáng)、耐修剪等優(yōu)點。紅千層是一種優(yōu)良的園林及盆栽觀賞植物，其樹冠茂密，樹形美麗，花密集聚生，雄蕊伸出，紅艷奪目，十分美麗奇特，適宜作為庭院美化觀花樹、行道樹、園林樹、風(fēng)景樹等，還可修剪成高貴盆景，極具觀賞價值，近幾年來其園林觀賞價值受到人們的重視，在園林工程中得到了廣泛應(yīng)用。為了大量繁殖苗木，盡快滿足社會對紅千層優(yōu)質(zhì)苗木的旺盛需求，國內(nèi)對紅千層的組織培養(yǎng)已進(jìn)行了不少的探索，并取得了一定的成效[1-2]。本研究開展了不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基與激素類型組合的對比試驗，通過誘導(dǎo)系數(shù)、增殖系數(shù)、生根率的比較，進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基的篩選，以實現(xiàn)紅千層組培快繁技術(shù)優(yōu)化，提高組培效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 以紅千層春季萌發(fā)的嫩芽為外植體，消毒后接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，參加誘導(dǎo)培養(yǎng)基對比試驗；以誘導(dǎo)培養(yǎng)基上生長健壯的芽為增殖培養(yǎng)基對比試驗接種材料；以增殖培養(yǎng)基上增殖生長健壯的芽，為生根培養(yǎng)基對比試驗接種材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒 先用洗衣粉清洗表層，然后用自來水沖洗干凈再進(jìn)行消毒，用75%酒精消毒30～60s，無菌水漂洗2次，1%次氯酸鈉處理10～15min，無菌水漂洗5次以上。

1.2.2 培養(yǎng)條件 接種后材料放在（27±2）℃培養(yǎng)室中的培養(yǎng)，每天光照時間10～12h，光照強(qiáng)度為1 500～2 000lx。

1.2.3 試驗設(shè)計 誘導(dǎo)培養(yǎng)對比試驗、增殖培養(yǎng)對比試驗包含6個處理（見表1、表2），生根培養(yǎng)對比試驗包含3個處理（見表3）。各種培養(yǎng)基中，糖30g/L（生根培養(yǎng)基糖25g/L），卡拉膠5.4g/L，pH值5.8～5.9。各試驗均設(shè)置3次重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)采集與數(shù)據(jù)分析 誘導(dǎo)培養(yǎng)基對比試驗：接種后每隔5d觀察1次出芽情況，并在25d時調(diào)查誘導(dǎo)芽數(shù)，計算誘導(dǎo)系數(shù)；增殖培養(yǎng)基對比試驗：接種后每隔5d觀察1次芽的生長情況，并在30d時調(diào)查增殖芽數(shù)，計算增殖系數(shù)；生根培養(yǎng)基對比試驗：接種后每隔5d觀察1次生根情況，并在15d時調(diào)查生根率。對試驗誘導(dǎo)系數(shù)、增殖系數(shù)、生根率等數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和多重比較，多重比較采用新復(fù)極差法。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基對誘導(dǎo)效果的影響 從表1可以看出，誘導(dǎo)系數(shù)變化幅度為1.38～2.87，不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效果差異很大。方差分析結(jié)果表明，F(xiàn)=8.34>F0.01（5，17）=2.81，不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)系數(shù)間存在極顯著差異。多重比較結(jié)果表明，A3、A4間無顯著差異，誘導(dǎo)系數(shù)最高，與A1、A2、A5、A6間差異均達(dá)到顯著或極顯著水平，A1、A2間無顯著差異，A5、A6間也無顯著差異。由此可見，本試驗設(shè)計中，NAA濃度不同，對誘導(dǎo)系數(shù)的影響不明顯，差異主要由基礎(chǔ)培養(yǎng)基引起。MS培養(yǎng)基對紅千層誘導(dǎo)的培養(yǎng)，誘導(dǎo)出的芽大部分是單芽，且萌芽的時間較長；改良MS培養(yǎng)基中不但誘導(dǎo)出的芽為叢生芽且萌芽時間短，在3/4MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的芽部分出現(xiàn)叢生芽，但大部分是單芽，萌芽時間相對于改良MS偏長。誘導(dǎo)出叢生芽，是提高誘導(dǎo)系數(shù)的關(guān)鍵，因此，誘導(dǎo)培養(yǎng)基適宜采用改良MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L。

2.2 不同增殖培養(yǎng)基對增殖效果的影響 從表2可知，不同增殖培養(yǎng)基的增殖系數(shù)差異較大，變化幅度為1.95～3.73。方差分析結(jié)果表明，F(xiàn)=10.13>F0.01（5，17）=2.81，不同增殖培養(yǎng)基的增殖系數(shù)間存在極顯著差異。多重比較結(jié)果（表2）表明，B4增殖效果最好，增殖系數(shù)達(dá)到3.73，與其他增殖培養(yǎng)基間均存在顯著或極顯著差異；B3次之，與其它增殖培養(yǎng)基間也均存在顯著或極顯著差異。B1、B2間無顯著差異，B5、B6間無顯著差異，B1、B2與B5、B6間存在顯著或極顯著差異，說明增殖系數(shù)的大小，受基礎(chǔ)培養(yǎng)基的影響較大。在改良MS培養(yǎng)基中繼代周轉(zhuǎn)周期為26d，芽生長比較壯，在MS和3/4MS培養(yǎng)基中周轉(zhuǎn)周期偏長一點，需要30d，芽生長偏細(xì)。B3、B4間差異顯著，說明在改良MS中，KT激素的添加對提高增殖系數(shù)有益。本試驗中，改良MS+6BA0.6mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.2mg/L是最佳增殖培養(yǎng)基。

2.3 不同生根培養(yǎng)基對生根效果的影響 把生長一致的紅千層小苗接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)3種培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)出根，生根率變化范圍為63.6%～95.8%，生根效果存在較大差異。方差分析結(jié)果表明，F(xiàn)=23.58>F0.01（2，8）=8.65，不同生根培養(yǎng)基的生根率間差異達(dá)統(tǒng)計學(xué)上的極顯著水平。多重比較結(jié)果（表3）表明，C1、C2、C3間均存在顯著或極顯著差異。C2生根率達(dá)95.8%，出根時間短只需10d，且根系粗壯，平均4根以上；而另外2種培養(yǎng)基雖能生根，但時間較長，生根率低，平均根數(shù)少，不利于移栽。因此，生根培養(yǎng)基以C2為最佳。

3 結(jié)論與討論

3.1 結(jié)論 試驗結(jié)果表明，6種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，A3、A4的誘導(dǎo)效果最好；6種增殖培養(yǎng)基中，以B4為最佳，增殖系數(shù)達(dá)到3.73，與其它增殖培養(yǎng)基間均存在顯著或極顯著差異；3種生根培養(yǎng)基中，以C2的生根率最高，達(dá)到95.8%，與C1、C3的生根率間差異顯著或極顯著。因此，本試驗中，紅千層組培的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2～0.3mg/L，最佳增殖培養(yǎng)基為改良MS+6BA0.6mg/L+KT0.2mg/L+NAA0.2mg/L，最佳生根培養(yǎng)基為改良1/3MS+NAA0.2mg/L+IBA0.25mg/L+Ac0.15g/L。

3.2 討論 紅千層組織培養(yǎng)是解決紅千層種苗來源的一個重要途徑，是實現(xiàn)紅千層種苗產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的基礎(chǔ)。雖然目前已有少量有關(guān)紅千層組織培養(yǎng)獲得成功的文獻(xiàn)報道，但不同學(xué)者間的觀點還存在一定的分歧[2-3]。例如，紅洪如（2005）報道了紅千層的離體培養(yǎng)及組培快繁技術(shù)，認(rèn)為繼代和增殖培養(yǎng)基以MS+6BA1mg/L+NAA0.25mg/L為最佳。本試驗中發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)培養(yǎng)基是影響增殖效果的最主要因素，改良MS的增殖效果顯著高于MS，而所添加的激素組合的作用，在參試的幾個組合中，表現(xiàn)不明顯，這有待于進(jìn)一步驗證。在生根試驗中，相同的激素添加下，不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基間的生根率差異達(dá)到極顯著差異水平，改良1/3MS分別是1/2MS、1/3MS的1.34倍和1.51倍，說明基礎(chǔ)培養(yǎng)基對紅千層的生根影響極大，這方面也有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]鄭耀恩.淺談紅千層的栽培與大苗移植[J].中國園林，1993，9（3）：35，60.

[2]江洪如，余發(fā)新，劉騰云.紅千層的離體培養(yǎng)及快速繁殖[J].園藝學(xué)報，2005，32（3）：541-543.

[3]龔偉，宮淵波，胡庭興，等.紅千層離體培養(yǎng)和植株再生[J].植物生理學(xué)通訊，2004，1（40）：66.

（責(zé)編：張宏民）