任　曼　宮碧霜　靳二輝　李升和　曾祥芳　譙仕彥*

(1.安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，鳳陽233100；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，北京100193)

營養(yǎng)、大腸桿菌和氨基酸對(duì)豬小腸上皮細(xì)胞抗菌肽和信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響

任曼1,2宮碧霜1靳二輝1李升和1曾祥芳2譙仕彥2*

(1.安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，鳳陽233100；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，北京100193)

摘要：為了研究應(yīng)激和氨基酸對(duì)上皮抗菌肽表達(dá)的作用和分子機(jī)制，試驗(yàn)選用豬小腸上皮細(xì)胞系IPEC-J2作為研究對(duì)象，饑餓和大腸桿菌感染分別作為營養(yǎng)應(yīng)激和細(xì)菌應(yīng)激，丙氨酸和異亮氨酸作為氨基酸處理，收集細(xì)胞mRNA，利用熒光定量PCR測(cè)定β防御素和相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平。結(jié)果表明：與對(duì)照組(DMEM/F12培養(yǎng)基)相比，饑餓顯著降低了小腸上皮細(xì)胞豬防御素2(pBD-2)、豬防御素3(pBD-3)和豬防御素EP2c(pEP2c)及沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1(Sirt1)、叉頭轉(zhuǎn)錄因子1(FoxO1)和叉頭轉(zhuǎn)錄因子4(FoxO4)的表達(dá)(P<0.05)，大腸桿菌對(duì)β防御素表達(dá)無顯著影響(P>0.05)。與對(duì)照組(饑餓培養(yǎng)基)相比，丙氨酸處理未顯著影響pBD-2和pBD-3的表達(dá)(P>0.05)，但顯著提高了pEP2c表達(dá)水平(P<0.05)；異亮氨酸處理使pBD-2、pBD-3和pEP2c表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)。與對(duì)照組相比，丙氨酸和異亮氨酸處理不同程度影響信號(hào)通路蛋白轉(zhuǎn)錄，丙氨酸處理顯著提高了Sirt1和FoxO4的表達(dá)水平(P<0.05)，異亮氨酸處理顯著促進(jìn)了Sirt1、FoxO1和FoxO4的表達(dá)(P<0.05)。由此得出，營養(yǎng)應(yīng)激降低豬小腸上皮細(xì)胞中β防御素的表達(dá)，而氨基酸的補(bǔ)充可促進(jìn)其表達(dá)，該調(diào)控作用可能與Sirt1和叉頭轉(zhuǎn)錄因子(FoxO)信號(hào)通路蛋白有關(guān)。

關(guān)鍵詞：豬小腸上皮細(xì)胞；抗菌肽；防御素；信號(hào)通路；Sirt1；FoxO

抗生素在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用歷史超過50年之久，主要用于減少畜禽發(fā)病率、提高生產(chǎn)速度和飼料利用率，然而，濫用抗生素引發(fā)眾多人畜病原菌產(chǎn)生耐藥性，直接危害全球公共健康[1]。研究表明，短期使用低劑量抗生素會(huì)造成豬腸道內(nèi)微生物耐藥性基因的數(shù)量和多樣性增加[2]。研究開發(fā)提高動(dòng)物免疫力和抗病力的策略迫在眉睫，近年發(fā)現(xiàn)通過營養(yǎng)調(diào)控手段提高畜禽腸道先天性免疫功能成為可行策略之一[3]。

哺乳動(dòng)物內(nèi)源合成的抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)具有廣譜抗菌作用，其種類多樣且功能復(fù)雜，參與組成機(jī)體先天性免疫系統(tǒng)，微生物對(duì)其不易產(chǎn)生抗性[4]。位于腸道表面的上皮細(xì)胞可分泌大量多樣AMP，以抵擋復(fù)雜的微生物環(huán)境和病原微生物入侵[4]，與腸上皮黏膜表面分泌型免疫球蛋白A(sIgA)共同形成先天免疫屏障[5]。近年關(guān)于AMP參與免疫調(diào)節(jié)的研究日益增多，它們可通過趨化途徑和調(diào)控Toll樣受體(TLR)信號(hào)強(qiáng)度發(fā)揮免疫調(diào)控功能[6]。目前，在豬體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)25種AMP，分別為11種cathelicidins、12種防御素、1種saposin和1種cecropin[7]。研究發(fā)現(xiàn)，多種因素可影響和調(diào)控內(nèi)源AMP表達(dá)，包括發(fā)育階段、損傷、營養(yǎng)物質(zhì)(如維生素D、短鏈脂肪酸、氨基酸等)及脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)等。前期研究發(fā)現(xiàn)異亮氨酸可調(diào)控?cái)嗄套胸i腸道黏膜免疫功能，并對(duì)AMP表達(dá)具有一定的促進(jìn)作用[8]。但關(guān)于營養(yǎng)水平對(duì)豬腸上皮細(xì)胞AMP表達(dá)的影響的研究較少，有關(guān)AMP誘導(dǎo)表達(dá)的分子機(jī)制知之甚少。因此，本研究以豬小腸上皮細(xì)胞系IPEC-J2為模型，研究營養(yǎng)和細(xì)菌應(yīng)激及不同氨基酸處理對(duì)小腸上皮細(xì)胞AMP和信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響，旨在為研究應(yīng)激和營養(yǎng)素調(diào)控內(nèi)源AMP表達(dá)及腸上皮黏膜屏障功能的提高提供借鑒，也為免疫促進(jìn)功能的營養(yǎng)物質(zhì)篩選提供理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1細(xì)胞培養(yǎng)

豬腸上皮細(xì)胞系IPEC-J2為本實(shí)驗(yàn)室保存，受贈(zèng)于伍國耀教授(Texas A & M University)。該細(xì)胞系分離自新生仔豬空腸上皮，單層貼壁生長，其培養(yǎng)基為含5%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)(Gibco，美國)、1%胰島素硒(insulin transferrin selenium，ITS)(ScienCell，美國)和1 μg/L內(nèi)皮生長因子(endothelial growth factor，EGF)(Sigma，美國)的DMEM/F12培養(yǎng)基(Hyclone，中國)。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)和處理

豬小腸上皮細(xì)胞IPEC-J2接種于6孔板，加入完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)至80%細(xì)胞愈合時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。營養(yǎng)與大腸桿菌應(yīng)激：棄去待處理細(xì)胞的細(xì)胞液，換新的培養(yǎng)基，其中對(duì)照組為DMEM/F12培養(yǎng)基，饑餓組為饑餓培養(yǎng)基(Earle’s鹽平衡緩沖液+維生素混合液)，大腸桿菌組為DMEM/F12培養(yǎng)基+1×103CFU/孔大腸桿菌，處理12 h后收集細(xì)胞。氨基酸處理：棄去待處理細(xì)胞的細(xì)胞液，加入以下處理培養(yǎng)基：對(duì)照組為饑餓培養(yǎng)基，丙氨酸組為饑餓培養(yǎng)基中添加1.0 mmol/L的丙氨酸(異亮氨酸等氮組)，異亮氨酸組為饑餓培養(yǎng)基中添加1.0 mmol/L的異亮氨酸，處理12 h后收集細(xì)胞。

1.3總mRNA提取和反轉(zhuǎn)錄

1.4基因引物設(shè)計(jì)

內(nèi)參基因(β-actin)、AMP基因[豬防御素2(pBD-2)、豬防御素3(pBD-3)和豬防御素EP2c(pEP2c)]以及信號(hào)通路蛋白基因[沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1(Sirt1)、叉頭轉(zhuǎn)錄因子1(FoxO1)和叉頭轉(zhuǎn)錄因子4(FoxO4)]引物通過Primer Premier 6.0軟件設(shè)計(jì)，由北京三博志遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司合成。根據(jù)梯度PCR和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)引物的最適退火溫度和擴(kuò)增片段的特異性，無引物二聚體和非特異擴(kuò)增的引物可用，引物序列見表1。

1.5熒光定量PCR

將所提cDNA經(jīng)相應(yīng)引物PCR擴(kuò)增后，回收基因片段，按10-1～10-9倍連續(xù)稀釋，選擇10-2～10-98個(gè)梯度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)梯度3個(gè)重復(fù)，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，驗(yàn)證引物擴(kuò)增效率。將反轉(zhuǎn)的cDNA作為模板進(jìn)行熒光定量PCR，按照SYBR Green定量PCR試劑盒(TaKaRa，中國)操作，采用10 μL反應(yīng)體系，其中檢測(cè)β-actin時(shí)cDNA量為1/20，檢測(cè)目的基因時(shí)cDNA量為1/10，熒光定量PCR在ABI7500快速檢測(cè)系統(tǒng)(Applied Biosystems，美國)中進(jìn)行。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，72 ℃ 10 s，42個(gè)循環(huán)。

1.6數(shù)據(jù)分析

根據(jù)2-△△CT法分析基因表達(dá)情況，以內(nèi)參基因?yàn)閰⒄眨@得目的基因相對(duì)表達(dá)量，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。相對(duì)表達(dá)量數(shù)值采用SAS 8.1(SAS Institute，Gary，美國)單因子方差分析(one-way ANOVA)模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若處理間差異顯著，用Duncan氏法多重比較進(jìn)行檢驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05表示差異顯著。

2結(jié)果與分析

2.1應(yīng)激和氨基酸處理對(duì)IPEC-J2AMP表達(dá)的影響

豬小腸上皮細(xì)胞系單層貼壁生長(圖1)，增長速度快，當(dāng)細(xì)胞愈合至90%以上時(shí)生長速率降低。本研究篩選出3種豬AMP基因引物用于熒光定量PCR，均為β防御素，分別為pBD-2、pBD-3和pEP2c。營養(yǎng)和大腸桿菌應(yīng)激對(duì)豬腸上皮細(xì)胞系IPEC-J2防御素轉(zhuǎn)錄水平的影響見圖2。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，細(xì)胞液中加入1×103CFU/孔大腸桿菌并未顯著影響pBD-2、pBD-3和pEP2c的表達(dá)(P>0.05)；而饑餓應(yīng)激則顯著降低了防御素的表達(dá)(P<0.05)，其中pBD-2表達(dá)水平降至對(duì)照組的47%，pBD-3降至58%，pEP2c降至25%。與對(duì)照組相比，丙氨酸和異亮氨酸處理后，發(fā)現(xiàn)丙氨酸未顯著影響pBD-2和pBD-3表達(dá)(P>0.05)，但顯著提高了pEP2c表達(dá)(P<0.05)；而異亮氨酸則

顯著促進(jìn)了3種防御素表達(dá)(P<0.05)，pBD-2表達(dá)升高至5.68倍，pBD-3表達(dá)升高至9.94倍，pEP2c升高至5.34倍。丙氨酸作為異亮氨酸的等氮對(duì)照處理，旨在說明異亮氨酸對(duì)防御素的誘導(dǎo)表達(dá)是其本身作用還是氮素的作用，以上結(jié)果說明氮素的補(bǔ)充可影響防御素pEP2c的表達(dá)，但異亮氨酸對(duì)防御素表達(dá)具有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，此作用與氮素?zé)o關(guān)。

表1　熒光定量PCR引物序列

圖1　豬小腸上皮細(xì)胞系IPEC-J2

2.2營養(yǎng)應(yīng)激和氨基酸處理對(duì)信號(hào)通路蛋白轉(zhuǎn)錄水平的影響

本試驗(yàn)選用3種信號(hào)通路蛋白，分別是Sirt1、FoxO1和FoxO4。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，饑餓應(yīng)激顯著降低了IPEC-J2細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)(P<0.05)，Sirt1表達(dá)水平降低至對(duì)照組的36%，F(xiàn)oxO1降低至31%，F(xiàn)oxO4降低至39%(圖3)。與對(duì)照組相比，丙氨酸和異亮氨酸均不同程度影響信號(hào)通路蛋白的轉(zhuǎn)錄，其中，丙氨酸顯著提高了Sirt1(2.13倍)和FoxO4(3.16倍)的表達(dá)水平(P<0.05)，異亮氨酸顯著促進(jìn)了Sirt1(30.76倍)、FoxO1(3.45倍)和FoxO4(3.00倍)表達(dá)(P<0.05)。

3討論

動(dòng)物腸道黏膜面臨大量挑戰(zhàn)，如維持共生菌群平衡和阻止病原微生物入侵。腸上皮表面的AMP在抵御微生物過程中扮演重要角色，這些“天然抗生素”屬于進(jìn)化古老的先天性免疫效應(yīng)因子[9]。其中，β防御素是目前研究最為深入和存在最為廣泛的AMP之一，它一方面可阻止上皮表面微生物的入侵，另一方面參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[10]。近年研究表明，豬腸道上皮組織可表達(dá)多種β防御素[11]。豬小腸細(xì)胞系IPEC-J2是一種未完全分化的腸上皮細(xì)胞，分離于初生仔豬空腸上皮組織，其保持了腸道細(xì)胞的多種特性，如表達(dá)β防御素等[12]。為研究營養(yǎng)和微生物應(yīng)激以及氨基酸對(duì)小腸上皮細(xì)胞AMP表達(dá)的作用，本試驗(yàn)篩選到IPEC-J2可表達(dá)的3種豬源β防御素(即pBD-2、pBD-3和pEP2c)引物。

同基因數(shù)據(jù)柱形標(biāo)注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

Value columns of a gene with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖2應(yīng)激(A)和氨基酸處理(B)對(duì)IPEC-J2細(xì)胞中防御素表達(dá)的影響

Fig.2Effects of stress (A) and amino acid treatments (B) on defensin expression in IPEC-J2 cells

圖3　營養(yǎng)應(yīng)激(A)和氨基酸處理(B)對(duì)IPEC-J2細(xì)胞中信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響

內(nèi)源AMP的表達(dá)和活性受多種因素調(diào)控，如細(xì)菌和LPS、營養(yǎng)供給和一些功能性營養(yǎng)物質(zhì)等。Muturi等[13]和Becker等[14]研究發(fā)現(xiàn)饑餓可增加埃及伊蚊和果蠅防御素表達(dá)，而Akoda等[15]研究結(jié)果表明饑餓未影響舌蠅體內(nèi)AMP的表達(dá)，而大腸桿菌卻可刺激其表達(dá)。與前人研究結(jié)果不同，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去除培養(yǎng)基中氨基酸對(duì)IPEC-J2細(xì)胞造成營養(yǎng)應(yīng)激可顯著降低防御素的表達(dá)，但大腸桿菌未顯著影響防御素表達(dá)。本試驗(yàn)中大腸桿菌添加濃度為103CFU/mL，Akoda等[15]研究添加10 mL OD600 nm為0.5的大腸桿菌菌體，可能是由于添加量上的差異造成上述結(jié)果不同。有關(guān)饑餓和細(xì)菌對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞AMP作用的研究較為缺乏，因種屬、試驗(yàn)對(duì)象(體內(nèi)和體外)和防御素種類的不同造成了以上結(jié)果的差異，關(guān)于營養(yǎng)和細(xì)菌應(yīng)激對(duì)AMP的影響仍需更多的研究。近期研究發(fā)現(xiàn)，氨基酸能夠促進(jìn)不同的上皮細(xì)胞表達(dá)β防御素，F(xiàn)ehlbaum等[16]報(bào)道3.12～12.50 μg/mL異亮氨酸可顯著促進(jìn)牛腎上皮細(xì)胞中β防御素的表達(dá)，但當(dāng)濃度≥25 μg/mL時(shí)這種促進(jìn)作用明顯降低。Sherman等[17]研究發(fā)現(xiàn)100～250 μg/mL異亮氨酸能夠促進(jìn)人結(jié)腸癌細(xì)胞系(HCT-116)中人β防御素1表達(dá)，Konno等[18]也報(bào)道細(xì)胞培養(yǎng)基中添加5～50 μg/mL的異亮氨酸可提高人結(jié)腸上皮細(xì)胞系Caco-2中人β防御素2的表達(dá)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中添加1.0 mmol/L(約131 μg/mL)異亮氨酸可顯著促進(jìn)β防御素的表達(dá)，此結(jié)果與前人研究一致，而添加等氮量丙氨酸卻未見此作用，說明異亮氨酸的作用并非是由于補(bǔ)充氮源而影響防御素的轉(zhuǎn)錄。

通過氨基酸饑餓造成的營養(yǎng)應(yīng)激和氨基酸的補(bǔ)充均屬于營養(yǎng)物質(zhì)調(diào)控范疇。研究表明，調(diào)節(jié)控制動(dòng)物體內(nèi)AMP表達(dá)的信號(hào)通路有核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)、沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白(Sirt)和叉頭轉(zhuǎn)錄因子(FoxO)等[4]。其中，NF-κB信號(hào)通路主要是細(xì)菌、LPS和感染等影響AMP表達(dá)的作用通路[19]，本研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對(duì)防御素的影響，因此未測(cè)定該通路蛋白的變化。氨基酸相關(guān)的信號(hào)通路主要有絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Sirt、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、FoxO等[20-21]，由此可見，氨基酸可能是Sirt和FoxO信號(hào)通路調(diào)控AMP表達(dá)。Sirt1是一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依賴去乙?；?，它是釀酒酵母沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白2(Sirt2)基因在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的同源基因，目前有關(guān)其研究主要集中在壽命調(diào)控方面[22]。近年，越來越多的研究表明Sirt1還是一種重要的營養(yǎng)物質(zhì)敏感性生長調(diào)節(jié)因子[23]。D’Antona等[24]研究發(fā)現(xiàn)，支鏈氨基酸(包括異亮氨酸)可影響大鼠體內(nèi)Sirt1的表達(dá)水平。FoxO是叉頭(forkhead)蛋白家族的一個(gè)亞群，從蠕蟲到人類均有表達(dá)，其在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分別由4個(gè)基因編碼組成：FoxO1、叉頭轉(zhuǎn)錄因子3(FoxO3)、FoxO4和叉頭轉(zhuǎn)錄因子6(FoxO6)。作為一種轉(zhuǎn)錄因子，F(xiàn)oxO家族參與調(diào)控細(xì)胞增殖、免疫反應(yīng)和機(jī)體壽命[25]。應(yīng)激和營養(yǎng)物質(zhì)可通過FoxO依賴通路調(diào)節(jié)Sirt1[26]，而Sirt1可直接影響防御素的表達(dá)[27]。Becker等[14]研究發(fā)現(xiàn)，營養(yǎng)應(yīng)激可影響FoxO的活化程度，進(jìn)而調(diào)節(jié)AMP表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，營養(yǎng)應(yīng)激在降低防御素表達(dá)的同時(shí)也降低了Sirt1和FoxO表達(dá)水平，而異亮氨酸則顯著促進(jìn)了防御素以及信號(hào)通路蛋白Sirt1和FoxO的表達(dá)，其中對(duì)Sirt1的促進(jìn)作用最為強(qiáng)烈，丙氨酸促進(jìn)了pEP2c以及信號(hào)通路蛋白Sirt1和FoxO4的表達(dá)，但程度顯著低于異亮氨酸，驗(yàn)證了前人研究結(jié)果，說明營養(yǎng)應(yīng)激與氨基酸對(duì)防御素表達(dá)的調(diào)控與Sirt1和FoxO信號(hào)通路有關(guān)，但信號(hào)通路蛋白對(duì)不同氨基酸的應(yīng)答反應(yīng)程度各不相同，具體調(diào)控通路還需進(jìn)一步的研究。

4結(jié)論

綜上，營養(yǎng)應(yīng)激可降低豬小腸上皮細(xì)胞中β防御素的表達(dá)，而氨基酸的補(bǔ)充可促進(jìn)β防御素表達(dá)，其中異亮氨酸的促進(jìn)作用最為顯著。營養(yǎng)應(yīng)激和氨基酸對(duì)防御素的調(diào)控作用可能與Sirt1和FoxO信號(hào)通路蛋白有關(guān)。

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(責(zé)任編輯田艷明)

Effects of Nutrition,Escherichiacoliand Amino Acids on Expression of Antimicrobial Peptide and Signaling Pathway Protein in Porcine Intestinal Epithelial Cells

REN Man1,2GONG Bishuang1JIN Erhui1LI Shenghe1ZENG Xiangfang2QIAO Shiyan2*

(1. College of Animal Science, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China;2. College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China)

Abstract:To investigate the effects and molecular mechanism of stress and amino acids on epithelial antimicrobial peptide, porcine intestinal epithelial cell line IPEC-J2 was treated with starvation (as nutritional stress), Escherichia coli (as bacterial stress), alanine or isoleucine (both as amino acid treatments), and cell mRNA was collected. Then the expression levels of β-defensins and signaling pathway protein were tested using real-time quantitative PCR. From results, we found compared with the control group (with DMEM/F12 medium), starvation treatment significantly decreased the expression levels of porcine β-defensin 2 (pBD-2), porcine β-defensin 2 (pBD-3), porcine β-defensin EP2c (pEP2c), silent mating type information regulation 2 homolog 1 (Sirt1), forkhead transcription factor 1 (FoxO1) and forkhead transcription factor 4 (FoxO4) (P<0.05), but Escherichia coli treatment had no significant effects on β-defensin expression (P>0.05). Compared with the control group (with starvation medium), alanine treatment significantly increased pEP2c expression level (P<0.05), but did not significantly change the expression of pBD-2 and pBD-3, and the expression levels of pBD-2, pBD-3 and pEP2c in isoleucine group were significantly increased (P<0.05). Signaling pathway protein transcription was different affected by alanine and isoleucine treatments. Compared with the control group, the expression levels of Sirt1 and FoxO4 in alanine group were significantly increased and isoleucine treatment significantly increased the expression of Sirt1, FoxO1 and FoxO4 (P<0.05). In conclusion, nutritional stress can increase β-defensin expression in intestinal epithelial cells, and amino acid supplementation can promote its expression. The mechanism of defensin regulation is related to Sirt1 and forkhead transcription factor (FoxO) signaling pathway protein.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(5)：1489-1495]

Key words:porcine intestinal epithelial cell; antimicrobial peptide; defensin; signaling pathway; Sirt1; FoxO

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.05.025

收稿日期：2015-12-25

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金(31501968)；安徽省高校自然科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2015A296)；安徽省自然科學(xué)基金(1608085QC72)；安徽科技學(xué)院高層次人才引進(jìn)項(xiàng)目(ZRC2014453)

作者簡介：任曼(1986—)，女，安徽淮北人，博士，動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè)。E-mail: renman@yeah.net *通信作者：譙仕彥，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail: qiaoshy@mafic.ac.cn

中圖分類號(hào)：S811

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)05-1489-07

*Corresponding author, professor, E-mail: qiaoshy@mafic.ac.cn