龐維榮，張　強(qiáng)，王　瑞（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

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高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地蝦仁中的甲醛殘留

龐維榮，張強(qiáng)，王瑞
（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

摘要目的：采用高效液相色譜法建立不同產(chǎn)地蝦仁中甲醛殘留含量的測(cè)定方法，為評(píng)價(jià)蝦仁的質(zhì)量提供依據(jù)。方法：以2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）為衍生試劑，在冰乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（pH=5）中反應(yīng)，使甲醛轉(zhuǎn)化為相應(yīng)穩(wěn)定的甲醛-2，4-二硝基苯腙，利用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：甲醛峰面積與濃度在2 μg/mL～20 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r= 0.999 2；回收率為71.12%～73.50%，方法檢出限為5 mg/kg；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD小于5.7%。結(jié)論：該方法的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性均良好，可用于蝦仁中甲醛的限量檢查。

關(guān)鍵詞蝦仁；甲醛；含量測(cè)定；高效液相色譜法

蝦仁營(yíng)養(yǎng)豐富，且肉質(zhì)松軟，易消化，對(duì)身體虛弱以及病后需要調(diào)養(yǎng)的人是極好的養(yǎng)生保健食物。然而隨著人們對(duì)蝦需求量逐年增大，有些漁民和不法商販由于經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，經(jīng)常向浸泡液中加入非食品用的添加劑甲醛，其主要目的是為了保持蝦的新鮮，延長(zhǎng)保質(zhì)期，改善外觀，增加口感和起到定型的作用［1］。甲醛為具有刺激性臭味的無色可燃性液體，易溶于水，具有十分活潑的化學(xué)與生物學(xué)活性，對(duì)人體的毒性主要表現(xiàn)為嗅覺異常、刺激、致敏、免疫毒性、神經(jīng)毒性、腦損傷等，長(zhǎng)期接觸將導(dǎo)致人體基因突變引發(fā)許多器官惡性腫瘤的形成［1-7］。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）已于2004年將其列入第1類致癌物。本研究建立了高效液相色譜測(cè)定蝦仁中甲醛含量的方法，本方法準(zhǔn)確可靠、快速、穩(wěn)定，具有較好的應(yīng)用、普及和推廣價(jià)值。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀（Waters 515 2996檢測(cè)器，美國Waters公司）、FA/JA 1004型萬分之一電子天平（上海天平儀器廠）、HH-2恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠）、渦旋混合器（賽智科技杭州有限公司）、HC-2518高速離心機(jī)（北京東南儀誠實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）、10 mm×150 mm具塞玻璃層析柱、25 μL微量進(jìn)樣器、15 mL具塞比色管、0.45 μm微孔濾膜。

甲醇為色譜純，二氯甲烷、2，4-二硝基苯肼、無水硫酸鈉均為分析純，水為樂百氏純凈水，甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mg/L購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）。蝦仁藥材來源如表1所示。

表1　蝦仁來源

2方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1 2，4-二硝基苯肼溶液的制備稱取100 mg 2，4-二硝基苯肼，精密稱定，溶解于24 mL濃鹽酸中，加水定容至100 mL，即得［8］。

2.1.2甲醛儲(chǔ)備液的制備精密移取甲醛（100 mg/L）標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL至25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，配制成每1 mL含甲醛20 μg的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.1.3甲醛對(duì)照品溶液的制備分別取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、0.75 mL、1.0 mL于15 mL具塞比色管中，加蒸餾水至1 mL，加0.2 mL 2，4-二硝基苯肼溶液，置60℃水浴15 min，然后在流水中快速冷卻，加入2 mL二氯甲烷，渦旋混合器振蕩萃取1 min，3 000 r/min離心2 min，取上清再用二氯甲烷萃取2次，每次1 mL，合并3次萃取的下層黃色溶液，將萃取液經(jīng)無水硫酸鈉脫水，60℃水浴蒸干，放冷，用甲醇定容至1 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得空白溶液和濃度分別為2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、15 μg/mL、20 μg/mL的甲醛與2，4-二硝基苯肼衍生物溶液。

2.1.4供試品溶液的制備取蝦仁藥材粉末（過四號(hào)篩）1g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入10 mL蒸餾水，置于40℃恒溫振蕩器中，40 r/min振搖提取2 h，3 500 r/min離心3 min，取上清2 mL于15 mL具塞比色管中，照“2.1.3”項(xiàng)下，自“加0.2 mL 2，4-二硝基苯肼溶液”起，依法操作，即得供試品溶液［9］。

2.2色譜條件

按《中華人民共和國水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》SCT 3025-2006水產(chǎn)品中甲醛測(cè)定的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。色譜柱：DiamonsiL RP-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇∶水（60∶40），流速：0.5 mL/min，柱溫：室溫，檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：338 nm，進(jìn)樣量：20 μL。

2.3線性范圍考察

分別精密吸取“2.1.3”項(xiàng)下的各對(duì)照品溶液20 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定其峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。甲醛的回歸方程為y=338 620x+69 015，r=0.999 2，線性范圍為2 μg/mL～20 μg/mL。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)

照高效液相色譜法（附錄VID）實(shí)驗(yàn)，精密吸取“2.1.3”項(xiàng)下10 μg/mL對(duì)照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算甲醛峰面積積分值的RSD值為2.3%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

稱取北極蝦（20111009）藥材粉末（過四號(hào)篩）6份，每份1g，精密稱定，照“2.1.4”項(xiàng)下方法制備，得北極蝦藥材的樣品溶液1、2、3、4、5、6。分別精密吸取上述溶液20 μL，依法測(cè)定，計(jì)算甲醛含量的RSD值為2.9%，結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2.6加樣回收率實(shí)驗(yàn)

稱取已知含量的北極蝦（20111009）藥材粉末（過4號(hào)篩）9份，每份1g，精密稱定，每3份分別加入100 mg/L的甲醛對(duì)照品溶液50 μL、100 μL、200 μL，照“2.1.4”項(xiàng)下方法制備，得加樣回收率實(shí)驗(yàn)的樣品溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9。

分別精密吸取上述溶液20 μL，注入高效液相色譜儀中，按上述的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算甲醛的加樣回收率和RSD值，結(jié)果如表2所示。甲醛加樣回收率為71.12%～73.50%，RSD值為3.9%～5.7%，結(jié)果表明方法的準(zhǔn)確度良好。

表2　加樣回收率實(shí)驗(yàn)?。╪=9）

2.7檢出限

精密量取“2.1.2”項(xiàng)下的甲醛對(duì)照品溶液適量，照“2.1.4”項(xiàng)下方法制備，調(diào)節(jié)對(duì)照品加入量，進(jìn)樣并記錄色譜圖，在S/N＞3時(shí)，甲醛的檢出限為5 mg/kg。

2.8樣品含量測(cè)定

按照上述方法，分別測(cè)定中國對(duì)蝦樣品3批、日本對(duì)蝦樣品3批、凡納濱對(duì)蝦樣品2批、鷹爪蝦樣品1批、脊尾白蝦樣品2批、北極蝦樣品1批，色譜圖如圖1所示，結(jié)果見表3。

3討論

《中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T840-2004）“蝦的理化要求”項(xiàng)下規(guī)定，甲醛不得超過10.0 mg/kg，即百萬分之十。12批蝦仁有9批（中國對(duì)蝦20111008、中國對(duì)蝦20111025、中國對(duì)蝦20111111、日本對(duì)蝦20111120、凡納濱對(duì)蝦20111008、凡納濱對(duì)蝦20111120、鷹爪蝦20111008、脊尾白蝦20111008、北極蝦20111009）甲醛測(cè)定結(jié)果超過了百萬分之十（10 ppm），因此應(yīng)將甲醛的含量限度納入蝦仁的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

圖1　甲醛HPLC色譜圖

表3　不同批次蝦仁樣品中甲醛的含量

本研究采用回旋振蕩提取、2，4-二硝基苯肼衍生化、HPLC法測(cè)定蝦仁中的甲醛含量，取得滿意結(jié)果，重現(xiàn)性和穩(wěn)定性較好，為大批量蝦仁中甲醛的測(cè)定及質(zhì)量控制提供了一種快速、高效、可靠的方法。

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（編輯：梁葆朱）

Conclusion：The method hasgood precision degree，stability and reproducibility and could be used for limited examination of formaldehyde in the shrimp.

Determination of formaldehyde in shrimp from different areas by HPLC

Pang Weirong，Zhang Qiang，Wang Rui
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

AbstractObjective：To develop a method for determinating the content of formaldehyde in shrimp from different areas，and provide a basis for evaluating the quality of shrimp.Methods：2，4 dinitrophenyl hydrazine（2，4-DNPH）was used as derivative reagent in this study，and reaction was carried out inglacial acetic acid-sodium acetate buffer solution（pH=5）so that formaldehyde could converted to formaldehyde-2，4 dinitrophenyl hydrazone.Content of formaldehyde was determinated by diode array detector.Rusults：Thegood linear range of formaldehyde was 2 μg/mL～20 μg/mL（r=0.999 2），the recovery rate was 71.12%～73.50%，the detection limit was 5 mg/kg，and the relative standard deviation（RSD）was less than 5.7%.

Key wordsshrimp；formaldehyde；content determination；HPLC

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-0258（2016）02-0026-03

［基金項(xiàng)目］山西中醫(yī)學(xué)院博士基金資助項(xiàng)目

［作者簡(jiǎn)介］龐維榮，E-mail：wrgreentea@163.com