陳 平，孔 梅，于 雙，江明萬，劉 輝，吳澤成

重慶三峽中心醫(yī)院 1.消化內(nèi)科； 2.腎內(nèi)科，重慶 404000

Siglec-1在潰瘍性結(jié)腸炎患者外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)

陳 平1，孔 梅1，于 雙1，江明萬1，劉 輝1，吳澤成2

重慶三峽中心醫(yī)院 1.消化內(nèi)科； 2.腎內(nèi)科，重慶 404000

目的 分析Siglec-1在潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitic，UC)患者外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)水平，并分析其臨床意義。方法 收集40例UC活動期患者、30例UC緩解期患者、40名健康體檢者的全血，流式細(xì)胞術(shù)檢測各組患者外周血單核細(xì)胞中Siglec-1的表達(dá)水平。結(jié)果 UC活動期患者外周血單核細(xì)胞Siglec-1的陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于健康對照組和UC緩解期組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；不同分級(輕度、中度、重度)UC活動期患者外周血單核細(xì)胞Siglec-1陽性細(xì)胞數(shù)差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Siglec-1可能與UC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，有望成為評價UC患者病情活動性及嚴(yán)重程度的指標(biāo)之一。

潰瘍性結(jié)腸炎；Siglec-1；流式細(xì)胞術(shù)；外周血單核細(xì)胞

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因和發(fā)病機制尚不明確的直腸和結(jié)腸慢性非特異性炎癥性疾病。腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)所導(dǎo)致的炎癥過程在UC的發(fā)病中起重要作用[1]。唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素1(sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 1, Siglec-1，也稱CD169)是單核-巨噬細(xì)胞激活的標(biāo)志物，研究[2]發(fā)現(xiàn)其在免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)中起重要作用。Siglec-1是否在UC的發(fā)病中起作用尚不清楚。本文擬通過流式細(xì)胞儀測定UC患者外周血單核細(xì)胞中Siglec-1的表達(dá)水平，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集重慶三峽中心醫(yī)院消化內(nèi)科2011年1月-2015年2月確診為UC的患者70例，其中活動期患者40例，緩解期患者30例，并選取同期健康體檢者40名作為對照。UC診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)》[3]。根據(jù)病例資料建立數(shù)據(jù)庫，錄入每位患者的年齡、性別、排便次數(shù)、便血、脈搏、體溫、血紅蛋白、紅細(xì)胞沉降率、內(nèi)鏡表現(xiàn)、醫(yī)師總體評價等資料。所有研究對象均簽署知情同意書，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測Siglec-1的表達(dá) 取50 μl用枸櫞酸鈉抗凝的UC患者及對照組人員的全血，加入10 μl PE標(biāo)記小鼠抗人Siglec-1單克隆抗體(eBioscience公司)和10 μl FITC標(biāo)記小鼠抗人CD14單克隆抗體(BD公司)，混勻后室溫避光孵育20 min，同時與抗體相匹配的小鼠IgG1同型對照孵育反應(yīng)作為陰性對照(同型對照是指與單抗種屬來源相同、亞型相同、標(biāo)記熒光素相同的未免疫動物的免疫球蛋白)。加入1 ml紅細(xì)胞裂解液，混勻后室溫避光孵育20 min，以1 500 r/min離心5 min后棄上清，用2 ml Stain buffer(pH 7.4的磷酸鈉鹽緩沖液加2 g/dl小牛血清加0.1 d/dl疊氮鈉)洗2次，細(xì)胞沉淀用200 μl Stain buffer懸浮后上流式細(xì)胞儀檢測。每份標(biāo)本獲取10 000個細(xì)胞，重復(fù)檢測3次后取平均值。

1.3 UC活動期患者病情分級 根據(jù)改良的Mayo評分系統(tǒng)進(jìn)行UC活動期患者病情分級：輕度12例、中度20例、重度8例。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較 70例UC患者中男41例，女29例，年齡19～56歲，平均年齡(40.60±5.80)歲，活動期40例，緩解期30例。以40名健康體檢者為對照，男21名，女19名，年齡23～65歲，平均年齡(40.11±3.05)歲。兩組性別、年齡相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(見表1)。

表1 UC患者與健康對照者臨床特征比較

Tab 1 Comparison of the clinical characteristics between two groups

組別例數(shù)性別[n(%)]男女平均年齡(x±s,歲)UC7041(58.6)29(41.4)40.60±5.80 活動期UC4024(60.0)16(40.0)40.83±6.13 輕度127(58.3)5(41.7)38.16±5.45 中度2012(60.0)8(40.0)42.61±6.73 重度85(62.5)3(37.5)39.26±3.06 緩解期UC3017(56.7)13(43.3)41.06±4.78健康對照組4021(52.5)19(47.5)40.11±3.05P值 0.7950.626

2.2 Siglec-1在外周血單核細(xì)胞中的表達(dá) 健康對照(1.46%)、UC活動期(8.70%)、UC緩解期(2.73%)外周血單核細(xì)胞Siglec-1的陽性細(xì)胞數(shù)經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=20.169，P<0.01)。經(jīng)SNK-q檢驗進(jìn)一步兩兩比較可見，UC活動期明顯高于健康對照組和UC緩解期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；健康對照組與UC緩解期相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 不同病情分級UC患者Siglec-1的表達(dá)差異 將40例UC活動期患者分為輕度、中度和重度，進(jìn)一步分析各亞組患者外周血單核細(xì)胞Siglec-1的表達(dá)水平，輕度、中度、重度組陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)分別為4.13%、8.56%、15.9%。經(jīng)單因素方差分析，不同分級UC患者外周血單核細(xì)胞Siglec-1含量不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=19.380，P<0.05)；經(jīng)SNK-q檢驗進(jìn)一步兩兩比較可見，病情分級重者，Siglec-1含量越高(P<0.05)。

3 討論

Siglecs家族是特異性表達(dá)于各種免疫和造血細(xì)胞表面的一類免疫球蛋白樣黏附分子，通過識別含有唾液酸的糖鏈結(jié)構(gòu)而促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞間結(jié)合和相互作用，介導(dǎo)細(xì)胞信號傳導(dǎo)，從而調(diào)節(jié)造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞的功能[4]。

Siglec-1屬于Siglecs家族。它在正常人外周血單核細(xì)胞上并不表達(dá)，而是組成性表達(dá)于特定組織巨噬細(xì)胞上，是單核-巨噬細(xì)胞活化的標(biāo)記物[5]。Siglec-1參與原發(fā)性膽汁淤積性肝硬化[6]、系統(tǒng)性硬化[7]、系統(tǒng)性紅斑狼瘡[8]等多種免疫炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展。

Siglec-1作為單核巨噬細(xì)胞激活的重要標(biāo)志，是否參與UC的初始發(fā)病過程，至今未見相關(guān)報道。本研究利用流式細(xì)胞術(shù)檢測70例UC患者及40名健康體檢者外周血單核細(xì)胞中Siglec-1的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Siglec-1在UC患者外周血單核細(xì)胞中表達(dá)水平明顯高于健康對照者，不同病情分級患者血漿Siglec-1含量也存在差異。結(jié)果提示Siglec-1與UC密切相關(guān)，Siglec-1可能參與了UC的發(fā)生、發(fā)展，且血漿Siglec-1可以反映UC病情的活動程度，Siglec-1有望成為評價UC患者病情活動性及嚴(yán)重程度的指標(biāo)之一。

我們推測Siglec-1參與UC的可能發(fā)病機制是：UC患者外周血單核細(xì)胞受到病原微生物、環(huán)境等因素刺激后，發(fā)生巨噬細(xì)胞化后細(xì)胞膜上Siglec-1表達(dá)增加，通過Siglec-1和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面含唾液酸結(jié)構(gòu)的糖鏈復(fù)合物結(jié)合而黏附血管內(nèi)皮，向血管內(nèi)皮下移動并激活，分泌巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α/β(MIP-1α/β)、MCP-1、IL-8等趨化因子誘導(dǎo)更多的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞募集和活化，從而參與UC的發(fā)病過程。通過研究巨噬細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子可以進(jìn)一步了解UC的發(fā)病機制，并通過活化調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的方法治療UC 將會有廣闊前景。

[1]王吉耀. 內(nèi)科學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2010: 443-449. Wang JY. Internal medicine [M]. Beijing: People’s Medical Publishing House, 2010: 443-449.

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(責(zé)任編輯：王豪勛)

Expression of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells of ulcerative colitis patients

CHEN Ping1, KONG Mei1, YU Shuang1, JIANG Mingwan1, LIU Hui1, WU Zecheng2

1.Department of Gastroenterology; 2.Department of Nephrology, Chongqing Three Gorges Central Hospital, Chongqing 404000, China

Objective To investigate the expression of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells of ulcerative colitic (UC) patients and to evaluate its clinical significance.Methods The expression of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells was detected by flow cytometry in 40 patients with UC in active stage, 30 patients with UC in remission stage and 40 healthy controls.Results The number of positive cells of Siglec-1 in peripheral blood mononuclear cells of UC patients in active stage was obviously higher than that in healthy controls and UC patients in remission stage, there was statistically significant difference among three groups (P<0.01); the level of Siglec-1 among different grades (mild, moderate, severe) of UC patients in active stage was also obviously different (P<0.05).Conclusion Siglec-1 may be associated with the occurring and development of UC, it is expected to be one of the evaluation indexes of the disease activity of UC patients.

Ulcerative colitis; Siglec-1; Flow cytometry; Peripheral blood mononuclear cells

重慶市萬州區(qū)科技計劃項目(201303008)

陳平，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：消化疾病的診療。E-mail：chenping53520@163.com

吳澤成，主治醫(yī)師，研究方向：免疫腎臟病學(xué)。E-mail：wufeng53520@163.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.07.009

R574.62

A

1006-5709(2016)07-0749-03

2015-09-25