李澤培，邱 野，彭 燕

宜賓市第二人民醫(yī)院 1.消化內(nèi)科；2.腫瘤科，四川 宜賓 644000；3.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科

辣椒素對水浸-束縛應(yīng)激大鼠胃動力的作用及機制研究

李澤培1，邱 野2，彭 燕3

宜賓市第二人民醫(yī)院 1.消化內(nèi)科；2.腫瘤科，四川 宜賓 644000；3.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科

目的 探討辣椒素(capsaicin，CAP)對水浸-束縛應(yīng)激(water immersion restraint stress，WIRS)大鼠胃動力的作用及機制。方法 雄性SD大鼠30只，隨機分為3組：正常對照組、WIRS模型組、CAP干預(yù)組。其中正常對照組自由攝食進(jìn)水；WIRS模型組每日WIRS 1 h后自由攝食進(jìn)水；CAP干預(yù)組每日WIRS 1 h后喂食CAP飼料。4周后所有大鼠給予酚紅溶液灌胃后麻醉處死，測定胃酚紅排空率；采用ELISA法檢測血漿胃動素(motilin,MTL)水平；采用免疫組化方法檢測胃竇辣椒素受體(transient receptor potential vanilloid1, TRPV1)、P物質(zhì)(substance P,SP)的表達(dá)；用RT-PCR方法檢測c-kit mRNA、SCF mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 大鼠胃酚紅排空率：WIRS模型組胃酚紅排空率顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組胃酚紅排空率與CAP干預(yù)組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。血漿MTL水平：WIRS模型組血漿MTL水平顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組血漿MTL水平顯著低于CAP干預(yù)組(P<0.05)。免疫組化結(jié)果： 大鼠胃竇組織TRPV1表達(dá)積分：CAP干預(yù)組TRPV1表達(dá)水平顯著高于其余兩組(P<0.05)；正常對照組TRPV1表達(dá)水平與WIRS模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。大鼠胃竇組織SP表達(dá)積分：WIRS模型組SP表達(dá)水平顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組SP表達(dá)水平顯著低于CAP干預(yù)組(P<0.05)。RT-PCR方法檢測結(jié)果：大鼠胃竇組織c-kit mRNA表達(dá)結(jié)果：WIRS模型組c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于正常對照組(P<0.05)；正常對照組、WIRS模型組c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄水平與CAP干預(yù)組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。大鼠胃竇組織SCF mRNA表達(dá)結(jié)果：WIRS模型組SCF mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組SCF mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于CAP干預(yù)組(P<0.05)。結(jié)論 CAP可能對WIRS大鼠胃動力具有改善作用，其機制可能與CAP調(diào)節(jié)TRPV1、SP的表達(dá)及MTL的釋放有關(guān)，是否與Cajal間質(zhì)細(xì)胞相關(guān)尚不明確。

辣椒素；水浸-束縛應(yīng)激；胃動力；c-kit；SCF；TRPV1；SP

胃腸動力障礙性疾病(disorders of gastrointestinal motility，DGIM)是最常見的一類消化系統(tǒng)疾病，包括胃食管反流病(gastroesophageal reflux disease，GERD)、功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)、腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)、糖尿病胃輕癱(diabetic gastroparesis，DGP)等，這類疾病嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，同時又造成大量醫(yī)療資源支出，已成為當(dāng)今社會一重大醫(yī)療衛(wèi)生問題[1]。辣椒素(capsaicin，CAP)是從辣椒中提取的主要活性成分，現(xiàn)有關(guān)于CAP的研究資料主要集中在其與疼痛的關(guān)系及鎮(zhèn)痛方面，CAP已被用作研究疼痛的工具藥[2]。近年來的研究[3]發(fā)現(xiàn)CAP可能對胃腸動力產(chǎn)生一定作用。本實驗通過觀察CAP對水浸-束縛應(yīng)激(water immersion restraint stress，WIRS)大鼠胃排空率的影響，初步探討CAP對大鼠胃動力的作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量180～250 g，購自西南醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。95%的CAP(河南倍特生物技術(shù)有限公司)、兔抗大鼠TRPV1多克隆抗體(Bioworld Technology公司)、兔抗大鼠SP多克隆抗體(Bioworld Technology公司)、二步法免疫組化檢測試劑(PV-6001)(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、總RNA提取試劑盒(Trizol試劑盒)(北京TIANGEN)、RT-PCR試劑盒(成都博瑞克生物技術(shù)有限公司)、DNA Maker(北京TIANGE)、紫外分光光度儀(SHIMADZU公司)、水平電泳儀(美國Bio-Rad公司)、PCR擴增儀(杭州博日公司)、凝膠成像系統(tǒng)(美國Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 CAP飼料的配制方法：稱取95%的CAP 105.3 mg(CAP含量為100 mg)，溶解于30 ml的食用油中，加入面粉100 g，充分混勻，即為CAP含量1 mg/g的大鼠飼料。

1.2.2 造模方法：將大鼠四肢束縛固定于木板上，然后將鼠板垂直浸入(19±1)℃水中，水面平胸骨劍突，持續(xù)1 h。

1.2.3 動物及分組：SD大鼠用代謝籠飼養(yǎng)，溫度(24±1)℃，隨機分為3組，每組10只。即：正常對照組，自由進(jìn)食，連續(xù)4周；WIRS模型組，每日WIRS 1 h，WIRS結(jié)束后自由進(jìn)食，連續(xù)4周；CAP干預(yù)組，每日WIRS 1 h，WIRS結(jié)束后喂食CAP飼料5 g/kg，待CAP飼料食用完后再給予自由進(jìn)食，連續(xù)4周。

1.2.4 取材：4周后所有實驗大鼠禁食24 h，于第二日早晨給予濃度為50 mg/dl的酚紅溶液灌胃，2 ml/鼠。灌入酚紅溶液30 min后處死大鼠，腹主動脈取血2 ml于采血管中(EDTA)，取出鼠胃。

1.2.5 胃酚紅排空率測定：用蒸餾水將胃內(nèi)容物沖洗到器皿中，定容為20 ml，加入20 ml濃度為0.5 mol/L的NaOH攪拌混勻，靜置1 h，取5 ml上清液，加入0.5 ml濃度為20%的三氯乙酸去蛋白，以3 500 r/min離心10 min，取上清液，用分光光度計測定560 nm波長下待測液的吸光度值，為實測酚紅吸光度。另取2 ml酚紅溶液，先后加入18 ml蒸餾水、20 ml濃度為0.5 mol/L的NaOH、4 ml濃度為20%的三氯乙酸攪拌混勻，用分光光度計測定560 nm波長下標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值，為標(biāo)準(zhǔn)酚紅吸光度。大鼠的胃酚紅排空率(%)=(1-實測酚紅吸光度/標(biāo)準(zhǔn)酚紅吸光度)×100%。

1.2.6 ELISA法測定血漿MTL含量：血液標(biāo)本離心后取上層血漿標(biāo)本，共設(shè)置6個標(biāo)準(zhǔn)孔，每個標(biāo)準(zhǔn)孔加入0.1 ml樣品稀釋液，于第一孔加入0.1 ml標(biāo)準(zhǔn)品，混勻后用加樣器吸出0.1 ml移至第二孔，混勻后用加樣器吸出0.1 ml加入第三孔，反復(fù)作倍比稀釋直至第五孔，最后使第五孔剩余0.1 ml，將第六孔設(shè)為空白對照孔；加入0.1 ml待測血清于對應(yīng)的反應(yīng)板孔中并混勻，于37 ℃溫育60 min；濾紙上拍干，每孔加350 μl洗滌液，靜置30 s后棄去；反復(fù)洗滌5次；每孔加入0.1 ml生物素(Biotin)，混勻，封住板孔，37 ℃溫育60 min；每孔加入0.1 ml辣根過氧化物酶，混勻，封板膜封住板孔，37 ℃溫育30 min；加入底物工作液A、B各50 μl，振蕩混勻10 s，避光顯色10 min；每孔加入100 μl 終止液，輕輕混勻30 s，終止反應(yīng)；30 min內(nèi)，以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測量各孔的OD值；據(jù)標(biāo)品濃度及OD值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；根據(jù)樣品的OD值在公式上計算出樣品濃度。

1.2.7 二步免疫組化法(PV法)檢測胃竇組織TRPV1、SP表達(dá)情況：取大鼠胃竇組織，固定、脫水、石蠟包埋，制作成4 μm切片，切片在60 ℃恒溫烤箱中烤片過夜。二甲苯脫蠟濃度由高到低梯度酒精水化，PBS液浸泡清洗，抗原修復(fù)液修復(fù)抗原，PBS液浸泡清洗，3%過氧化氫室溫孵育去除內(nèi)源性酶，PBS液浸泡沖洗，滴加一抗稀釋液(1∶100)，4 ℃過夜，第二天室溫下復(fù)溫30 min，PBS液清洗后加通用型二抗，PBS液清洗后DAB顯色，自來水沖洗后蘇木精顯色，自來水沖洗，1%鹽酸酒精分化，飽和碳酸鋰反藍(lán)，濃度由低到高梯度酒精脫水，二甲苯透明；晾干封片后讀片。結(jié)果判定：棕黃色反應(yīng)為陽性，參照文獻(xiàn)[4]進(jìn)行結(jié)果分析：選取同批次免疫組化切片于光鏡下觀察，隨機觀察5個視野，根據(jù)陽性反應(yīng)的廣度與深度分別計分：4分“++++”特別密集，3分“+++”密集，2分“++”中等，1分“+”稀疏，0分“-”陰性。

1.2.8 RT-PCR方法檢測大鼠胃竇組織酪氨酸激酶受體(c-kit)mRNA及干細(xì)胞生長因子(stem cell factor，SCF)mRNA的轉(zhuǎn)錄：引物合成由生工生物工程(上海)股份有限公司完成(見表1)。

表1 引物

Tab 1 Primer

基因方向和序列長度(bp)c-kit上游:5'-TTGGCAAAGAAGA-CAACGAC-3'276下游:5'-GCACAGACACCACTGGGA-TA-3'SCF上游:5'-AACCCTCAACTATGTCGC-3'179下游:5'-CCACGAGGTCATCCACTA-3'GAPDH上游:5'-ACCACAGTCCATGCCAT-CAC-3'450下游:5'-TCCACCACCCTGTTGCTG-TA-3'

取大鼠胃竇組織，加1 ml裂解液R后研磨至細(xì)胞懸液，室溫靜置5 min，13 400×g離心5 min，轉(zhuǎn)上清于離心管中，加入200 μl氯仿，劇烈振蕩15 s，靜置3 min，13 400×g離心10 min，將水相移至離心管中，與0.5倍體積無水乙醇混勻后轉(zhuǎn)入吸附柱CR3中，13 400×g離心30 s，棄廢液，加入去蛋白液RD 500 μl，13 400×g低溫離心30 s，棄廢液，加入漂洗液RW 600 μl，室溫靜置2 min，13 400×g低溫離心30 s，棄廢液，將吸附柱移入收集管中，13 400×g低溫離心2 min，取出吸附柱，室溫放置片刻，將吸附柱轉(zhuǎn)入一個新的離心管中，加40 μl RNase-free ddH2O，室溫放置2 min，13 400×g低溫離心2 min。RNA的檢測：每個標(biāo)本取1 μl的RNA在紫外分光光度儀下檢測其濃度與純度。逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，逆轉(zhuǎn)錄前每個標(biāo)本的RNA用RNase-free ddH2O配成相同濃度，按RT試劑盒(20 μl體系)說明在PCR管中配反應(yīng)液，將混合液的PCR管放入PCR儀中，設(shè)置參數(shù)：30 ℃×10 min，4 ℃×20 min，99 ℃×5 min，4 ℃×5 min。PCR得到目的基因，配置PCR反應(yīng)體系，將PCR管放入PCR儀中，進(jìn)行PCR反應(yīng)，設(shè)置反應(yīng)條件：第一步：94 ℃×5 min，第二步：94 ℃×30 s，退火溫度(GAPDH、c-kit、SCF退火溫度分別為57.3 ℃、56.2 ℃、53.0 ℃)×30 s，72 ℃×1 min，循環(huán)30次，第三步：72 ℃×1 min。PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳檢測，電泳后紫外凝膠成像的結(jié)果用Quantity One軟件分析各組相對表達(dá)量差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠胃酚紅排空率 正常對照組胃酚紅排空率為(62.91±1.10)%，WIRS模型組為(55.33±1.79)%，CAP干預(yù)組為(61.88±2.07)%。結(jié)果顯示W(wǎng)IRS模型組大鼠胃酚紅排空率顯著低于其余兩組(P<0.05);正常對照組胃酚紅排空率與CAP干預(yù)組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 血漿MTL水平 正常對照組大鼠血漿MTL水平為(190.30±1.68)pg/ml，WIRS模型組為(179.75±1.72)pg/ml，CAP干預(yù)組為(200.06±2.06)pg/ml。結(jié)果顯示W(wǎng)IRS模型組血漿MTL水平顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組血漿MTL水平顯著低于CAP干預(yù)組(P<0.05)。

2.3 胃竇組織TRPV1、SP的表達(dá)情況

2.3.1 TRPV1在胃竇組織的表達(dá)積分：正常對照組TRPV1表達(dá)水平為(2.30±0.48)分，WIRS模型組為(2.20±0.42)分，CAP干預(yù)組為(3.30±0.48)分。CAP干預(yù)組TRPV1表達(dá)水平顯著高于其余兩組(P<0.05)；正常對照組TRPV1表達(dá)水平與WIRS模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見圖1)。

2.3.2 SP在胃竇組織的表達(dá)積分：正常對照組SP表達(dá)水平為(2.00±0.47)分，WIRS模型組為(1.20±0.42)分，CAP干預(yù)組為(3.20±0.63)分。WIRS模型組SP表達(dá)水平顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組SP表達(dá)水平顯著低于CAP干預(yù)組(P<0.05，見圖2)。

2.4 胃竇組織c-kit mRNA、SCF mRNA的表達(dá)

2.4.1 胃竇組織c-kit mRNA的表達(dá)：正常對照組為0.624±0.016，WIRS模型組為0.606±0.011，CAP干預(yù)組為0.622±0.011。其中WIRS模型組c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于正常對照組(P<0.05)；正常對照組c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄水平與CAP干預(yù)組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；WIRS模型組c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄水平與CAP干預(yù)組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見圖3)。

圖1 各組大鼠胃竇組織TRPV1的表達(dá) A-1、A-2：正常對照組；B-1、B-2：WIRS模型組；C-1、C-2：CAP干預(yù)組

Fig 1 The expression of TRPV1 in the gastric antrum tissue of rats A-1, A-2: normal control group; B-1, B-2: WIRS model group; C-1, C-2: CAP group

圖2 各組大鼠胃竇組織SP的表達(dá) A-1、A-2：正常對照組；B-1、B-2：WIRS模型組；C-1、C-2：CAP干預(yù)組

Fig 2 The expression of SP in the gastric antrum tissue of rats A-1, A-2: normal control group; B-1, B-2: WIRS model group; C-1, C-2: CAP group

圖3 RT-PCR檢測各組c-kit mRNA的表達(dá) A：正常對照組；B：WIRS模型組；C：CAP干預(yù)組

Fig 3 Expression of c-kit mRNA in each group detected by RT-PCR A: normal control group; B: WIRS model group; C: CAP group

2.4.2 胃竇組織SCF mRNA的表達(dá)：正常對照組為0.894±0.011，WIRS模型組為0.853±0.009，CAP干預(yù)組為0.932±0.009。WIRS模型SCF mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于其余兩組(P<0.05)；正常對照組SCF mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于CAP干預(yù)組(P<0.05，見圖4)。

圖4 RT-PCR檢測各組SCF mRNA的表達(dá) A：正常對照組；B：WIRS模型組；C：CAP干預(yù)組

Fig 4 Expression of SCF mRNA in each group detected by RT-PCR A: normal control group; B: WIRS model group; C: CAP group

3 討論

CAP具有多種藥理作用，已有研究[5-9]發(fā)現(xiàn)CAP具有止痛、降血壓、改善呼吸功能、抗癌、減肥等作用。近年研究[3]發(fā)現(xiàn)CAP對消化功能有一定作用，其中對胃腸動力的作用已引起學(xué)者重視，故本實驗通過觀察CAP對實驗大鼠胃排空作用，初步探討CAP對胃動力的作用及機制。

3.1 CAP對胃腸動力的作用 有關(guān)CAP對胃腸動力作用的研究報道不一，多數(shù)研究認(rèn)為小劑量CAP可促進(jìn)胃動力，而大劑量則對胃動力產(chǎn)生抑制作用。Holzer-Petsche等[10]報道0.0015 mg/kg的CAP可引起大鼠胃平滑肌的收縮。而Takeuchi等[11]報道30 mg/kg的CAP灌胃能抑制大鼠的胃運動，在給藥30 min后胃電波的收縮幅度抑制70%。Matsumoto等[12]報道CAP可引起大鼠結(jié)腸的雙相收縮，即瞬時收縮和持久收縮。Barth等[13]報道CAP可引起豚鼠回腸平滑肌收縮，其機理與神經(jīng)末梢釋放生物活性物質(zhì)刺激平滑肌細(xì)胞和肌間神經(jīng)元有關(guān)。本實驗結(jié)果提示：CAP干預(yù)后大鼠胃酚紅排空率顯著高于模型組，提示5 mg/kg的CAP飼料可能對WIRS大鼠胃動力具有促進(jìn)作用。

3.2 CAP作用于胃腸動力的機制 胃腸動力受到神經(jīng)因素和體液因素調(diào)節(jié)。神經(jīng)因素中腸神經(jīng)系統(tǒng)、Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of Cajal,ICC)、平滑肌細(xì)胞組成的網(wǎng)絡(luò)對胃腸運動起重要作用[14]。在胃腸激素中以內(nèi)分泌形式為主要作用方式的激素有：胃泌素、胃動素、膽囊收縮素、神經(jīng)降壓素等；而SP、血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide, VIP)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide, GRP)、生長抑素(somatostatin, SS)、腦啡肽等以胃腸肽的形式為主要作用方式。

3.3 CAP與TRPV1 TRPV1是一種通透鈣離子的非選擇性陽離子通道，CAP激活TRPV1后，導(dǎo)致細(xì)胞鈣離子內(nèi)流，激活CAP敏感傳入神經(jīng)元釋放多種神經(jīng)遞質(zhì)，進(jìn)而產(chǎn)生多種生物學(xué)作用。Zhong等[15]報道CAP敏感的傳入神經(jīng)元(capsaicin sensitive afferent neurons，CSAN)廣泛分布于胃腸道，而TRPV1分布在CSAN的胞體膜和感覺神經(jīng)末梢上。Holzer等[16]報道CAP刺激胃腸道的TRPV1通道，激活CSAN釋放多種神經(jīng)遞質(zhì)，如SP、VIP、CGRP、膽囊收縮素、神經(jīng)激肽A和興奮性氨基酸等，從而與胃腸動力的調(diào)節(jié)有關(guān)。本實驗結(jié)果顯示CAP干預(yù)組大鼠胃竇組織TRPV1較正常對照組及WIRS模型組升高。推測CAP對實驗大鼠胃動力的改善作用可能與CAP增加胃竇組織TRPV1的表達(dá)量相關(guān)。

3.4 CAP與胃腸肽 MTL主要由腸道M細(xì)胞、嗜鉻樣細(xì)胞分泌。Bardhan等[17]研究認(rèn)為MTL可刺激其消化道中的MTL受體，引起消化間期移行性復(fù)合運動的周期變化，從而促進(jìn)胃排空。周呂等[18]報道狗胃體和胃竇的肌間神經(jīng)叢、黏膜下神經(jīng)叢有大量MTL受體表達(dá)，并與腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system, ENS)、ICC聯(lián)系在一起，腸神經(jīng)元通過釋放神經(jīng)遞質(zhì)作用于ICC，從而參與胃腸運動的調(diào)節(jié)。此外還有研究[19]認(rèn)為MTL通過作用于ICC引起大鼠胃平滑肌的收縮。

SP在整個胃腸道和腸神經(jīng)系統(tǒng)都有廣泛分布[20]。研究[21-22]表明SP是調(diào)節(jié)胃腸運動的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，SP對胃腸道縱行肌和環(huán)行肌可表現(xiàn)為兩相的收縮效應(yīng)，即瞬時收縮和持久收縮。Schmidt等[23]研究認(rèn)為SP對胃平滑肌的興奮作用強于對幽門括約肌的收縮作用，因此總體表現(xiàn)為促進(jìn)胃排空。Mulè等[24]研究發(fā)現(xiàn)ICC細(xì)胞膜上存在NK1-R，SP可能在NK1-R的介導(dǎo)下參與移行性復(fù)合運動的起搏。本實驗結(jié)果顯示CAP干預(yù)組血漿MTL水平、胃竇組織SP表達(dá)較WIRS組高。據(jù)此我們推測CAP可能對MTL的釋放及SP表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，但尚需進(jìn)一步實驗予以證實。

3.5 胃腸運動的起搏細(xì)胞-ICC 1893年，西班牙解剖學(xué)家Ramny Cajal在家兔小腸腸神經(jīng)元與小腸平滑肌細(xì)胞之間發(fā)現(xiàn)一種間質(zhì)細(xì)胞，當(dāng)時他認(rèn)為這種間質(zhì)細(xì)胞是交感神經(jīng)元的末梢細(xì)胞[25]。隨后人們把這種間質(zhì)細(xì)胞命名為Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)，研究[26]發(fā)現(xiàn)ICC參與維持胃腸平滑肌的節(jié)律運動，同時具有產(chǎn)生、傳導(dǎo)慢波電位，調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)等功能。c-kit是ICC表面的特異性蛋白，幾乎所有ICC表面均表達(dá)c-kit受體[27]。SCF是c-kit的自然配體，二者結(jié)合后啟動的信號途徑對維持ICC的生長、發(fā)育及表型起著重要作用[28]。

本實驗RT-PCR結(jié)果顯示W(wǎng)IRS模型組SCF mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著低于CAP干預(yù)組，但c-kit mRNA轉(zhuǎn)錄水平與CAP干預(yù)組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，故CAP是否與ICC有相關(guān)性尚不明確。CAP可能對胃動力具有改善作用，可能成為調(diào)節(jié)胃腸動力的新藥，但其具體作用機制目前仍未闡明，尚需進(jìn)一步研究加以探索。

[1]Halder SL, Locke GR 3rd, Schleck CD, et al. Natural history of functional gastrointestinal disorders: a 12-year longitudinal population-based study [J]. Gastroenterology, 2007, 133(3): 799-807.

[2]林綺雯, 楊得坡, 黃世亮, 等. 辣椒素的藥理與臨床研究概況[J]. 廣東藥學(xué), 2000, 10(5): 5-8. Lin QW, Yang DP, Huang SL, et al. Recent progress of pharmacological and clinical research of capsaicin [J]. Guangdong Pharmaceutical Journal, 2000, 10(5): 5-8.

[3]Rofes L, Arreola V, Martin A, et al. Natural capsaicinoids improve swallow response in older patients with oropharyngeal dysphagia [J]. Gut, 2013, 62(9): 1280-1287.

[4]Vanderwinden JM, De Laet MH, Schiffmann SN, et al. Nitric oxide synthase distribution in the enteric nervous system of Hirschsprung’s disease [J]. Gastroenterology, 1993, 105(4): 969-973.

[5]Vaishnava P, Wang DH. Capsaicin sensitive-sensory nerves and blood pressure regulation [J]. Curr Med Chem Cardiovasc Hematol Agents, 2003, 1(2): 177-188.

[6]Ebihara T, Takahashi H, Ebihara S, et al. Capsaicin troche for swallowing dysfunction in older people [J]. J Am Geriatr Soc, 2005, 53(5): 824-828.

[7]Rapoport AM, Bigal ME, Tepper SJ, et al. Intranasal medications for the treatment of migraine and cluster headache [J]. CNS Drugs, 2004, 18(10): 671-685.

[8]Sánchez AM, Sánchez MG, Malagarie-Cazenave S, et al. Induction of apoptosis in prostate tumor PC-3 cells and inhibition of xenograft prostate tumor growth by the vanilloid capsaicin [J]. Apoptosis, 2006, 11(1): 89-99.

[9]Bartness TJ, Kay Song C, Shi H, et al. Brain-adipose tissue cross talk [J]. Proc Nutr Soc, 2005, 64(1): 53-64.

[10]Holzer-Petsche U, Seitz H, Lembeck F. Effect of capsaicin on gastric corpus smooth muscle of the rat in vitro [J]. Eur J Pharmacol, 1989, 162(1): 29-36.

[11]Takeuchi K, Niida H, Matsumoto J, et al. Gastric motility changes in capsaicin-induced cytoprotection in the rat stomach [J]. Jpn J Pharmacol, 1991, 55(1): 147-155.

[12]Matsumoto K, Kurosawa E, Terui H, et al. Localization of TRPV1 and contractile effect of capsaicin in mouse large intestine: high abundance and sensitivity in rectum and distal colon [J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2009, 297(2): G348-G360.

[13]Barthó L, Benkó R, Patacchini R, et al. Effects of capsaicin on visceral smooth muscle: a valuable tool for sensory neurotransmitter identification [J]. Eur J Pharmacol, 2004, 500(1-3): 143-157.

[14]李毅, 齊清會. 胃腸道神經(jīng)-Cajal間質(zhì)細(xì)胞-平滑肌網(wǎng)絡(luò)研究進(jìn)展[J]. 國際消化病雜志, 2007, 27(3): 225-227. Li Y, Qi QH. Study progress of the gastrointestinal nerve-ICC-smooth muscle network [J]. Int J Dig Dis, 2007, 27(3): 225-227.

[15]Zhong F, Christianson JA, Davis BM, et al. Dichotomizing axons in spinal and vagal afferents of the mouse stomach [J]. Dig Dis Sci, 2008, 53(1): 194-203.

[16]Holzer P, Painsipp E, Schuligoi R. Differential effects of intragastric acid and capsaicin on gastric emptying and afferent input to the rat spinal cord and brainstem [J]. BMC Neurosci, 2005, 6: 60.

[17]Bardhan KD, Bodemar G, Geldof H, et al. A double-blind, randomized, placebo-controlled dose-ranging study to evaluate the efficacy of alosetron in the treatment of irritable bowel syndrome [J]. Aliment Pharmacol Ther, 2000, 14(1): 23-34.

[18]周呂, 袁勃, 田瑞, 等. Cajal間質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)胃動素興奮胃起搏區(qū)運動的作用[J]. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床, 2001, 21(z1): 84-85. Zhou L, Yuan B, Tian R, et al. The motilin excited gastric pacing motion function area mediated by interstitial cells of Cajal [J]. Basic Medical Sciences and Clinics, 2001, 21(z1): 84-85.

[19]周呂, 王禮建, 袁勃, 等. 胃動素對Cajal間質(zhì)細(xì)胞引起的大鼠胃平滑肌收縮的作用[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2003, 83(16): 1422-1427. Zhou L, Wang LJ, Yuan B, et al. Effect of motlin on gastric smooth contraction induced by interstitial cells of Cajal [J]. Natl Med J China, 2003, 83(16): 1422-1427.

[20]Maake C, Kloas W, Szendefi M, et al. Neurohormonal peptides, serotonin, and nitric oxide synthase in the enteric nervous system and endocrine cells of the gastrointestinal tract of neotenic and thyroid hormone-treated axolotls (Ambystoma mexicanum) [J]. Cell Tissue Res, 1999, 297(1): 91-101.

[21]L?rdal M, Theodorsson E, Hellstr?m PM. Tachykinins influence interdigestive rhythm and contractile strength of human small intestine [J]. Dig Dis Sci, 1997, 42(9): 1940-1949.

[22]Wheatley JM, Hutson JM, Chow CW, et al. Slow-transit constipation in childhood [J]. J Pediatr Surg, 1999, 34(5): 829-832; discussion 832-833.

[23]Schmidt PT, Holst JJ. Tachykinins in regulation of gastric motility and secretion [J]. Cell Mol Life Sci, 2000, 57(4): 579-588.

[24]Mulè F, D’Angelo S, Tabacchi G, et al. Involvement of tachykinin NK2 receptors in the modulation of spontaneous motility in rat proximal colon [J]. Neurogastroenterol Motil, 2000, 12(5): 459-466.

[25]Haycock JW, Bro S. Corpus striatum (Translation of S.Ramón y Cajal). translated from Corps Strié, chapter 23, in “Histologie du systéme nerveux de l'homme et des vertébrés” 1911 [J]. Behav Biol, 1975, 14(3): 387-402.

[26]Huizinga JD, Chen JH, Mikkelsen HB, et al. Interstitial cells of Cajal, from structure to function [J]. Front Neurosci, 2013, 7: 43.

[27]Vannucchi MG. Receptors in interstitial cells of Cajal: identification and possible physiological roles [J]. Microsc Res Tech, 1999, 47(5): 325-335.

[28]Huizinga JD, Thuneberg L, Klüppel M, et al. W/kit gene required for interstitial cells of Cajal and for intestinal pacemaker activity [J]. Nature, 1995, 373(6512): 347-349.

(責(zé)任編輯：馬 軍)

Effect and mechanism of capsaicin on gastric motility in water immersion restraint stress rats

LI Zepei1, QIU Ye2, PENG Yan3

1.Department of Gastroenterology; 2.Department of Oncology, the Second People’s Hospital of Yibin City, Yibin 644000; 3. Department of Gastroenterology, the Affiliated Hospital of Southwest Medical University, China

Objective To investigate the effect and mechanism of capsaicin (CAP) on gastric motility in water immersion restraint stress (WIRS) rats.Methods Thirty male SD rats were randomly divided into 3 groups: normal control group, WIRS model group and CAP group. Rats in normal control group were freely accessed to food and water. Rats in WIRS model group were freely accessed to food and water after the stress. Rats in CAP group were fed the CAP after the stress. After 4 weeks, all the rats were lavaged with phenol red solution, then the rats were killed. The gastric emptying rate of phenol red was tested, the plasma MTL level was detected by ELISA method, the expressions of TRPV1, SP were detected by immunohistochemical method, and the transcriptional levels of c-kit mRNA, and SCF mRNA were detected by RT-PCR method.Results The gastric emptying rate of phenol red: the gastric emptying rate in WIRS model group was significantly lower than that in other two groups (P<0.05); the gastric emptying rate between normal control group and CAP group had no significant difference (P>0.05). The plasma MTL results: the level of plasma MTL in WIRS model group was significantly lower than that in other two group (P<0.05); the level of plasma MTL in normal control group was significantly lower than that in the CAP group (P<0.05). Immunohistochemistry detection results: the expression of TRPV1 in the CAP group was significantly higher than that in other two groups (P<0.05); but there was no significant difference between normal control group and WIRS model group (P>0.05). The expression of SP in WIRS model group was significantly lower than that in other two groups (P<0.05); the expression of SP in normal control group was significantly lower than that in the CAP group (P<0.05). Results of RT-PCR method: the expression of c-kit mRNA in WIRS model group was significantly lower than that in normal control group (P<0.05); but there were no significant differences between normal control group and CAP group or WIRS model group and CAP group (P>0.05). The expression of SCF mRNA in WIRS model group was significantly lower than that in other two groups (P<0.05); the expression of SCF mRNA in normal control group was significantly lower than that in the CAP group (P<0.05).Conclusion CAP may improve the gastric emptying rate of WIRS rats, the mechanism of CAP on gastric motility may be related with regulating the expressions of TRPV1 and SP, the release of MTL, but has no obvious relationship with interstitial cells of Cajal.

Capsaicin; Water immersion restraint stress; Gastric motility; c-kit; SCF; TRPV1; SP

李澤培，碩士，住院醫(yī)師，研究方向：胃腸動力。E-mail：752169489@qq.com

彭燕，教授，主任醫(yī)師，研究方向：胃腸黏膜屏障與酒精相關(guān)性疾病。E-mail：1806857826@qq.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.07.012

論著·胃相關(guān)疾病

R573

A

1006-5709(2016)07-0759-06

2015-10-26