血小板形態(tài)和功能在體外循環(huán)中的變化研究

黃 麗(四川省珙縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 珙縣 644501)

血小板形態(tài)和功能在體外循環(huán)中的變化研究

黃 麗
(四川省珙縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 珙縣 644501)

目的 探討體外循環(huán)對(duì)患者血小板形態(tài)和功能的影響。方法 選擇76例體外循環(huán)患者，分別在術(shù)前和術(shù)后第1、3、5、7天檢測(cè)患者血小板的計(jì)數(shù)、平均體積、體積分布寬度、聚集率、血漿顆粒膜蛋白。結(jié)果 與術(shù)前比較，血小板計(jì)數(shù)在第1～3天明顯下降(P< 0.05)，第5～7天恢復(fù)正常(P> 0.05)；血小板平均體積和體積分布寬度等指標(biāo)在術(shù)后第1、3、5、7天均無(wú)明顯變化(P> 0.05)；術(shù)后第1、3天時(shí)血小板聚集率顯著下降，血漿顆粒膜蛋白表達(dá)明顯增高(P< 0.05)，術(shù)后第5、7天時(shí)兩者逐漸恢復(fù)正常(P> 0.05)。結(jié)論 體外循環(huán)對(duì)血小板的形態(tài)無(wú)明顯損傷，但在術(shù)后3天之內(nèi)明顯損傷了血小板的功能，3天之后逐漸恢復(fù)正常。

血小板；體外循環(huán)；形態(tài)；功能；

體外循環(huán)(cardiopulmonary bypass，CPB)是利用一系列特殊人工裝置將人體靜脈血引流到體外，經(jīng)人工方法進(jìn)行氣體交換，調(diào)節(jié)溫度和過(guò)濾后，輸回體內(nèi)動(dòng)脈系統(tǒng)的生命支持技術(shù)。在體外循環(huán)過(guò)程中，由于人工裝置取代了人體功能，因此也稱心肺轉(zhuǎn)流，體外循環(huán)機(jī)也稱為人工心肺機(jī)[1]。進(jìn)行CPB是為了在實(shí)施心中直視手術(shù)時(shí)，維持全身組織器官的血液供應(yīng)。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，CPB的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)展，不僅在心臟、肝、腎、肺等大血管手術(shù)中獲得應(yīng)用，在腫瘤治療、心肺功能衰竭患者的生命支持方面也取得令人矚目的成績(jī)，成為臨床醫(yī)學(xué)的一門重要技術(shù)[2]。由于血液在CPB中的停留時(shí)間較長(zhǎng)，各種有形成分均受到一定影響，凝血功能受到損傷[3]。血小板作為血液有形成分之一，其主要功能為止血和凝血，目前尚無(wú)任何一種藥物能夠代替其功能[4]。本研究對(duì)血小板體外循環(huán)前后的形態(tài)和功能進(jìn)行檢測(cè)，探討體外循環(huán)對(duì)血小板的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年12月至2016年3月在我院心臟外科住院，擬在CPB下行心臟直視手術(shù)的患者76例，其中男47例，女29例，年齡(55±16.52)歲，體重(59±13.52) kg，心功能Ⅱ～Ⅳ級(jí)，ASAⅢ～Ⅳ級(jí)。排除標(biāo)準(zhǔn):術(shù)前凝血異常的患者；肝腎功能不全的患者。退出標(biāo)準(zhǔn):CPB時(shí)間小于100 min的患者；術(shù)中或術(shù)后24小時(shí)內(nèi)死亡的患者。

1.2 方法 分別在術(shù)前、術(shù)后第1、3、5、7天抽取患者標(biāo)本，檢測(cè):①血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)、體積分布寬度(PDW):按常規(guī)法用XT-2000型血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定。②血小板聚集率(PAgT):采用全血電阻抗法測(cè)定血小板最大聚集率，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。③血漿顆粒膜蛋白(GMP-140):應(yīng)用GMP-140 ELISA檢測(cè)試劑盒(上海雙贏生物科技有限公司)進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PLT計(jì)數(shù)及形態(tài)指標(biāo)的變化 與術(shù)前比較，術(shù)后第1～7天的MPV和PDW無(wú)明顯變化(P> 0.05)，PLT計(jì)數(shù)在術(shù)后第1～3天明顯下降(P< 0.05)，第5～7天恢復(fù)正常(P> 0.05)，見(jiàn)表1。

表1 PLT、MPV及PDW檢測(cè)結(jié)果

*與術(shù)前比較，P< 0.05

2.2 血小板功能的變化 與術(shù)前比較，PAgT在術(shù)后第1～3天明顯降低(P< 0.05)，GMP-140的表達(dá)明顯升高(P< 0.05)。但是在術(shù)后第5～7天，兩者均恢復(fù)正常(P> 0.05)，見(jiàn)表2。

表2 PAgT和GMP-140的檢測(cè)結(jié)果

*與術(shù)前比較，P< 0.05

3 討論

心血管類手術(shù)基本上要在CPB的支持下才能進(jìn)行，由于CPB機(jī)器管道介面的異物性、血流切應(yīng)力、血?dú)饨佑|、低溫、魚(yú)精蛋白和肝素的應(yīng)用等原因，血小板的數(shù)量、形態(tài)和功能均發(fā)生改變，釋放生物活性物質(zhì)，造成凝血功能障礙及微血管栓塞[5]。目前認(rèn)為，血小板數(shù)量和功能的改變是導(dǎo)致CPB下心內(nèi)直視手術(shù)后非外科出血的主要原因[6]。本研究所示，CPB結(jié)束之后的第1～3天，PLT顯著降低，第5～7天逐漸恢復(fù)正常。不過(guò)，雖然PLT在前3天顯著下降，但是PLT仍然處于正常范圍之內(nèi)(PLT>100×109)。需要引起我們注意的是，PLT計(jì)數(shù)處于正常范圍之內(nèi)，并不代表血小板功能正常，因?yàn)檠?xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)血小板時(shí)，血小板主要以顆粒的方式呈現(xiàn)，此時(shí)的計(jì)數(shù)只與血小板的大小和形狀有關(guān)，而與血小板功能沒(méi)有直接關(guān)系[7]。

血小板依靠黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮這五大作用來(lái)維持血管內(nèi)皮完整性，修復(fù)血管，發(fā)揮止血和凝血的功能，其中血小板的聚集是血小板發(fā)揮止血功能和形成血栓的主要環(huán)節(jié)[8，9]。本研究顯示血小板聚集率在CPB術(shù)后第1～3天明顯下降，說(shuō)明CPB嚴(yán)重?fù)p傷了血小板的聚集功能。血小板富含大量的α顆粒，當(dāng)其受到外界刺激和活化時(shí)，GMP-140就會(huì)表達(dá)在血小板表面，因此，GMP-140是判斷血小板活化的特異性指標(biāo)[10]。因此，測(cè)定GMP-140的表達(dá)，可特異性地反映血小板活化和破壞程度。本研究顯示GMP-140的表達(dá)在CPB術(shù)后第1～3天明顯增強(qiáng)，說(shuō)明血小板活化程度顯著增高，破壞增多。研究發(fā)現(xiàn)，CPB導(dǎo)致血小板釋放ADP減少，并且激活脫粒血小板，此時(shí)GMP-140表達(dá)的改變最具特異性和敏感性[11，12]。因此，監(jiān)測(cè)GMP-140可以判斷血小板功能的變化。

研究發(fā)現(xiàn)，CPB導(dǎo)致血小板激活釋放的可溶性CD40配體(Scd40L)，能夠促進(jìn)炎癥反應(yīng)和血栓形成。另外，由于血小板表面α2腎上腺素能受體的明顯減少，血小板的聚集功能顯著下降。這些因素綜合作用，導(dǎo)致或者加重術(shù)后出血及并發(fā)癥的發(fā)生[13，14]。在CPB術(shù)前，利用血小板分離技術(shù)從患者自身抽取并分離富血小板血漿(PRP)的辦法能夠改善術(shù)后出血[15]。血小板分離技術(shù)可以將患者的血液分離為PRP、貧血小板血漿(PPP)和濃縮紅細(xì)胞三部分。濃縮紅細(xì)胞及PPP可以在適當(dāng)時(shí)候回輸給患者；PRP既可以減少CPB對(duì)血小板造成的破壞，還可把PRP與鈣離子及凝血酶混合，制備自體血小板膠(APG)。APG可用于術(shù)中止血、封閉傷口、促進(jìn)傷口和胸骨的愈合。

[1] Qin C，Gu J，Qian H，et al.Analysis of circulatory mitochondrial DNA level after cardiac surgery with cardiopulmonary bypass and potential prognostic implications[J].Indian Heart J，2016，68(3):389-390.

[2] Donmez A，Yurdakok O.Cardiopulmonary bypass in infants[J].J Cardiothorac Vasc Anesth，2014，28(3):778-788.

[3] Feng J，Liu H，Chen J，et al.Levosimendan Reduces Lung Injury in a Canine Model of Cardiopulmonary Bypass[J].Korean Circ J，2016，46(3):402-407.

[4] Jones A，Heyes J.Processing，testing and selecting blood components[J].Nurs Times，2014，110(37):20-22.

[5] 魏海燕，史宏偉，張媛.圍體外循環(huán)期血小板保護(hù)的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，11(7):1391-1393.

[6] Tempo JA，Englyst NA，Holloway JA，et al.Platelet Microvesicles(Microparticles) in Cardiac Surgery[J].J Cardiothorac Vasc Anesth，2016，30(1):222-228.

[7] 李天君，趙峰，張印則，等.血小板功能特性質(zhì)量檢測(cè)方法學(xué)研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10(10):727-729.

[8] 吳侗，楊南萍.血小板生成素及其受體c-Mpl的作用和信號(hào)通路研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2014，11(3):155-159.

[9] 劉方鶴，榮敬娟，曹珍珍.血小板聚集檢測(cè)方法及質(zhì)量控制[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7(23):34-35.

[10] Pan G，Xie ZF，Zhang Y，et al.Platelet activation through the efficacy of aspirin in congenital heart disease patients undergoing transcatheter closure of atrial septal defects or ventricular septal defects[J].Genet Test Mol Biomarkers，2014，18(12):832-838.

[11]Olsson A，Alfredsson J，Hakansson E，et al.Protamine reduce whole blood platelet aggregation after cardiopulminary bypass[J].Scand Cardiovasc J，2016，50(1):58-63.

[12] 閆瑞，程標(biāo).血小板膜糖蛋白Ⅵ在急性冠脈綜合征中的臨床意義及研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2012，9(2):154-158.

[13]Grieshaber P，Bakchoul T，Wilhelm J，et al.Platelet-activating protamine-heparin-antibodies lead to higher protamine demand in patients undergoing cardiac surgery[J].J Thorac Cardiovasc Surg，2015，150(4):967-973.

[14] Mckenzie EC，Esser MM，McNitt SE，et al.Effect of infusion of equine plasma or 6% hydroxyethyl starch (600/0.75) solution on plasma colloid osmotic pressure in healthy horses[J].Am J Vet Res，2016，77(7):708-714.

[15] Puspita S，Utoro T，Haniastuti T.Nestin expressions of exposed pulp after direct pulp capping by calciumhydroxide and platelet rich plasma[J].Eur J Dent，2016，10(3):341-344.

Changes of morphology and function of platelet in cardiopulmonary bypass

HUANGLi
(DepartmentofClinicalLaboratory，GongxianPeople'sHospital，Gongxian644501，China)

Objective To investigate the effects of cardio-pulmonary bypass on the morphology and function of platelets.Methods Platelet count，average volume，volume distribution width，aggregation rate (PAgT%) and GMP-140 were determined in 76 patients with cardiopulmonary bypass at pre-operation and on 1，3，5 and 7 days after operation.Results Compared with the preoperative，platelet count was significantly decreased on postoperative day1 to day3 (P< 0.05).The decrease was restored on postoperative day 5 to day7 (P> 0.05).Average volume and volume distribution width of platelet had no significant changes on postoperative day1，3，5 and 7(P> 0.05).PAgT% was decreased significantly and GMP-140 was increased significantly on postoperative day1 and 3 (P< 0.05).PAgT% and GMP-140 had no significant changes in the postoperative day 5 and 7 (P> 0.05).Conclusion There was no significant damage to the platelet morphology in the extracorporeal circulation.However，the function of platelets was obviously damaged within 3 days after operation and returned to normal after 3 days of operation.

Platelet； Cardiopulmonary bypass； Morphology； Function

R446.11+1

A

1672-6170(2016)05-0094-03

2016-05-09；

2016-06-24)