馬瑞東，曾小飛，郭利明，郝 明(.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，四川 成都 60500；.成都醫(yī)學(xué)院，四川 成都 60083)

抑癌基因PTEN在食管鱗癌組織中的表達(dá)

馬瑞東1，曾小飛1，郭利明1，郝 明2
(1.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，四川 成都 610500；2.成都醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610083)

目的 探討抑癌基因PTEN在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況。方法 選取2015年1～12月我院胸外科食管癌手術(shù)切組織標(biāo)本及癌組織2 cm以外的食管正常上皮組織各113例，采用免疫組化法檢測(cè)兩種組織中PTEN的表達(dá)情況。結(jié)果 與癌旁食管正常上皮組織相比，食管鱗癌組織中PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著降低 (P< 0.01)；PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)在不同分化程度、TNM分期以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)；PTEN的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期呈負(fù)相關(guān)(P< 0.05)。結(jié)論 食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展可能與PTEN蛋白的低表達(dá)有關(guān)。

PTEN基因；免疫組織化學(xué)；食管鱗癌

目前食管癌在我國(guó)發(fā)病率較高，食管鱗狀細(xì)胞癌是其主要的病理類(lèi)型，雖然手術(shù)以及放化療取得了一定的療效，但患者遠(yuǎn)期效果較差，5年生存率低，為5%～45%[1]。食管癌的發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚，原癌基因激活以及抑癌基因的缺失、失活以及突變可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。磷酸酶及張力蛋白同源基因(PTEN)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，多個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)與它相關(guān)，惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與它的異常表達(dá)關(guān)系密切[2]。本文采用免疫組化檢測(cè)食管鱗癌組織中PTEN蛋白的表達(dá)情況，從而了解PTEN蛋白表達(dá)與食管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 所有標(biāo)本均取自2015年1～12月成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外科食管癌手術(shù)切組織標(biāo)本。所有標(biāo)本術(shù)后經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為食管鱗癌，且術(shù)前未經(jīng)過(guò)放化療。另外取原發(fā)灶組織以及癌組織2 cm以外的食管正常上皮組織(經(jīng)病理檢查證實(shí)未見(jiàn)癌細(xì)胞)。共搜集標(biāo)本226例，食管正常組織113例，食管鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本113例，男85例，女28例，年齡43歲～72歲，中位年齡57歲；Ⅰ期29例、Ⅱ期57例、Ⅲ期27例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例；高分化22例、中分化39例、低分化52例。

1.2 研究方法 福爾馬林(10%)固定標(biāo)本，經(jīng)脫水和石蠟包埋后進(jìn)行切片，再HE染色和免疫組化。常規(guī)脫蠟、水化、微波恢復(fù)抗原，然后進(jìn)行染色(二甲基羥苯胺顯色+蘇木素復(fù)染)，最后采用SP法檢測(cè)PTEN基因的表達(dá)情況。SP試劑盒以及鼠抗人PTEN抗體分別來(lái)自Zymed和Santa Cruz公司。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，分別設(shè)有陽(yáng)性對(duì)照(已知食管鱗癌PTEN陽(yáng)性標(biāo)本)和陰性對(duì)照(PBS液代替一抗)。

1.3 結(jié)果判定 細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒為PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)。以100個(gè)細(xì)胞/每個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400)；根據(jù)染色強(qiáng)度分別計(jì)0～3分:0～3分顏色分別為無(wú)著色、淡黃色、棕黃色以及棕褐色；再以陽(yáng)性細(xì)胞所占比例計(jì)分，0～3分陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為<5%、5%～25%、26%～50%、>50%，兩項(xiàng)得分相加，≥1分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)；兩變量的相關(guān)性行Sperman相關(guān)分析。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTEN在食管鱗癌以及癌旁正常組織的表達(dá)情況 食管鱗癌組織中PTEN陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于癌旁食管正常組織(P< 0.01)，見(jiàn)表1。

表1 PTEN在食管鱗癌與癌旁食管正常組織的表達(dá)情況

2.2 PTEN蛋白表達(dá)與食管鱗癌臨床及病理特征的關(guān)系 在本實(shí)驗(yàn)中，在分化程度上，高分化組、中分化組、低分化組PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為77.3%、61.5%、42.3%，高分化組PTEN陽(yáng)性表達(dá)率最高(P< 0.05)；與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較，PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中明顯升高(P< 0.05)；在TNM分期方面，I期、Ⅱ期、Ⅲ期PTEN的陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.4%、57.9%、33.3%，I期PTEN的陽(yáng)性表達(dá)率最高(P< 0.05)，且隨著病理分期越晚，PTEN的陽(yáng)性表達(dá)率越低。見(jiàn)表2。

表2 PTEN基因的表達(dá)與食管癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系

注:分化程度、TNM分期為單向有序技術(shù)資料，采用CMH法進(jìn)行分析；其他資料采用卡方檢驗(yàn)

2.3 PTEN蛋白表達(dá)與食管鱗癌臨床及病理特征的相關(guān)性 PTEN的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期呈負(fù)相關(guān)(P< 0.05)；PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與其他臨床和病理特征無(wú)關(guān)系(P> 0.05)，見(jiàn)表3。

表3 PTEN蛋白表達(dá)與食管鱗癌臨床及病理特征的相關(guān)性

3 討論

1997年發(fā)現(xiàn)的抑癌基因PTEN不但具有抑癌作用，而且還具有磷酸酶活性[3]；它能抑制腫瘤的增殖，影響腫瘤血管的生成以及加快腫瘤細(xì)胞的凋亡，最終抑制腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展[4]。PTEN的抑癌機(jī)制主要通過(guò)以下途徑完成:①抑制腫瘤細(xì)胞周期和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡:作為細(xì)胞內(nèi)的第二信使的磷脂酰3，4，5-三磷酸肌醇(PIP3)，它能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和抑制細(xì)胞的凋亡，PTEN能使PIP3去磷酸化，從而影響PI3K/PKB/AKT信號(hào)途徑，導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯[5]；②抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移:黏著斑激酶(FAK)調(diào)控著細(xì)胞凋亡，腫瘤的發(fā)生與該基因的激活有密切的聯(lián)系，抑制該基因的功能可加速細(xì)胞的凋亡[6]。PTEN可以通過(guò)去磷酸化使FAK失活，也可以通過(guò)抑制PI3K /AKT傳導(dǎo)通路來(lái)調(diào)控FAK，使之失活，從而使腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移受到抑制[7]。③影響腫瘤血管的生成:腫瘤血管的生成與HIF1以及促血管生成素/血管緊張素2(Ang/Tie2)體系有著密切關(guān)系，HIF1是調(diào)控腫瘤血管生成非常重要的轉(zhuǎn)錄因子[8]。PTEN可以通過(guò)調(diào)控PI3K信號(hào)通路影響HIF1 信號(hào)來(lái)調(diào)控VEGF 的表達(dá)，腫瘤血管的生成受到影響[9]。PTEN也可以通過(guò)Ang/Tie-2體系影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的周期以及干預(yù)腫瘤血管的生成[10]。

PTEN蛋白的表達(dá)異常與多種惡性腫瘤相關(guān)[11]，李亞楠等[12]報(bào)道，PTEN蛋白失活在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展有著重要的作用，并且可以用來(lái)評(píng)估患者的病情嚴(yán)重程度以及預(yù)后。有資料顯示[13，14]，PTEN在乳腺癌中表達(dá)率較低，并與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床預(yù)后相關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道[5，15]，PTEN蛋白的表達(dá)在肝癌組織以及骨肉瘤組織中顯著降低。

食管鱗狀細(xì)胞癌占食管癌的大多數(shù)，鱗癌來(lái)源于上皮組織，而PTEN蛋白在上皮細(xì)胞中廣泛表達(dá)，基因的突變、缺失以及甲基化是它失活的主要原因[16]。王建正等[17]報(bào)道，與癌旁食管正常組織相比，食管鱗癌組織的PTEN表達(dá)陽(yáng)性率顯著降低，與本文結(jié)果一致，說(shuō)明食管鱗癌的發(fā)生與PTEN蛋白的低表達(dá)有密切關(guān)系。本文對(duì)PTEN的表達(dá)與食管鱗癌患者的臨床及病理特征的關(guān)系進(jìn)一步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PTEN的表達(dá)與患者的性別、年齡以及腫瘤大小無(wú)關(guān)；與腫瘤的惡性程度以及腫瘤的病理分期相關(guān)，PTEN蛋白隨著分化程度的逐漸降低以及病理分期越晚表達(dá)越低；與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者PTEN陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降；已上說(shuō)明了食管鱗癌的發(fā)展可能與PTEN 蛋白的低表達(dá)有關(guān)，與相關(guān)文獻(xiàn)一致[17]。在本研究中，PTEN蛋白在腫瘤是否浸及肌層之間無(wú)差異，可能原因是大多數(shù)文獻(xiàn)浸潤(rùn)深度以是否浸及食管外膜分組，而本文是以是否浸及食管肌層分組；也可能是本研究未浸及肌層病例數(shù)較少，造成結(jié)果的差異，還需擴(kuò)大病例數(shù)量進(jìn)一步研究。

食管鱗癌的發(fā)生和發(fā)展與PTEN蛋白的表達(dá)密切相關(guān)，它可以用來(lái)評(píng)估食管鱗癌惡性程度、病理分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。對(duì)PTEN 在食管癌中的作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，為綜合治療食管癌提供新方法和依據(jù)。

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四川省衛(wèi)生廳科研基金資助項(xiàng)目(編號(hào):090117)

郝 明

R735.1

A

1672-6170(2016)05-0114-03

2016-05-26；

2016-06-30)