耿昕穎，劉　蕾，王家禎，王　巍，單曉楓，馬紅霞，高云航（.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春308；.吉林向海國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局，吉林白城375）

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醇提五倍子對(duì)鳙魚消化酶活性及腸道形態(tài)的影響

耿昕穎1，劉蕾2，王家禎1，王巍1，單曉楓1，馬紅霞1，高云航1
（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130118；2.吉林向海國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局，吉林白城137215）

摘要：為了研究五倍子對(duì)鳙魚消化酶活性及腸道形態(tài)的影響，本試驗(yàn)以鳙魚為研究對(duì)象，分別飼喂含有0.00%、0.50%、1.00%、2.00%醇提五倍子的餌料，于第15、30、45天采集腸道內(nèi)容物，檢測(cè)消化酶活力，并于45 d采集前腸及后腸，制作石蠟切片，觀察腸道形態(tài)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：（1）第15天試驗(yàn)組胰蛋白酶、脂肪酶活力隨著五倍子添加濃度增加而降低，飼養(yǎng)至第45天，0.50%組消化酶活力均高于對(duì)照組（P>0.05），2.00%組消化酶始終低于其他各組；第15天試驗(yàn)組淀粉酶活力高于對(duì)照組，1.00%組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），第30、45天試驗(yàn)組酶活力有所下降但仍高于對(duì)照組；（2）各試驗(yàn)組間前腸絨毛高度與各組前腸V/C值差異不顯著（P>0.05），以1.00%組最高；0.50%組、對(duì)照組后腸絨毛高度與2.00%組差異顯著（P<0.05）；各組后腸V/C差異不顯著（P>0.05），以0.50%組最高。由此看出，日糧中添加不同濃度醇提五倍子，初期抑制了消化酶分泌及腸道發(fā)育，隨飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，低濃度五倍子可促進(jìn)消化酶分泌和腸道發(fā)育，而高濃度五倍子抑制消化酶分泌和腸道發(fā)育，最適添加比例為0.50%。

關(guān)鍵詞：醇提；五倍子；鳙魚；消化酶活性；腸道形態(tài)

在規(guī)模化養(yǎng)殖中，抗生素類藥物被廣泛應(yīng)用，對(duì)魚類疾病的防控發(fā)揮了一定的作用，但魚類腸道機(jī)能同樣遭到破壞[1]。天然中草藥提取物因其毒性小，并能提高生產(chǎn)性能和免疫能力等優(yōu)點(diǎn)而被推廣使用。五倍子具有高效的抗菌作用，在防治魚白皮病、赤皮病及細(xì)菌性腸炎等方面取得良好效果[3]。姚嘉赟等通過體外抑菌試驗(yàn)篩選對(duì)嗜水氣單胞菌具有較強(qiáng)抑制效果的中藥，結(jié)果表明，五倍子可作為抗嗜水氣單胞菌的備選藥物[4]。張海賓等測(cè)定了嗜水氣單胞菌菌株對(duì)12種中草藥的敏感性，結(jié)果表明，五倍子的抑制作用明顯[5]。近年來五倍子對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物消化機(jī)能影響的研究相對(duì)較少，本試驗(yàn)在鳙魚日糧中添加不同濃度醇提五倍子，研究其對(duì)鳙魚消化酶及腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，旨在為五倍子在魚料加工、疾病防治的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1飼養(yǎng)魚與飼養(yǎng)條件試驗(yàn)鳙魚，購(gòu)自長(zhǎng)春市大南漁場(chǎng)。將體重均為25.67±1.01 g的600條鳙魚隨機(jī)均分4組，3組為試驗(yàn)組（0.50%、1.00%、2.00%組），1組為對(duì)照組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，各組常規(guī)飼養(yǎng)，定時(shí)投喂，每次投餌量為魚體重量的2%～3%。

1.2試驗(yàn)飼料及藥品本試驗(yàn)五倍子角倍，購(gòu)自長(zhǎng)春市百草大藥房；基礎(chǔ)飼料，購(gòu)自長(zhǎng)春市通威飼料公司；胰蛋白酶測(cè)試盒、脂肪酶測(cè)試盒、淀粉酶測(cè)試盒，均購(gòu)自南京建成生物工程公司。

1.3藥餌的制備一次選取4.00 g肚倍，利用索氏抽提器中以80%乙醇溶液15倍量提取3次，25 min/次，制成中藥浸膏。使用前將醇提五倍子按照添加濃度經(jīng)生理鹽水稀釋，均勻噴灑于基礎(chǔ)餌料后中，60℃烘干備用。

1.4樣品的采集分別于第15、30、45天無菌采集各組前腸、后腸及腸道內(nèi)容物，-20℃保存，用于酶活力測(cè)定。腸道于Bouin氏液中固定，用于制作石蠟切片。

1.5消化酶活力測(cè)定Trypsin采用精氨酸乙酯法、Lipase采用甘油三酯水解法、Amylas采用碘-淀粉比色法。

1.6五倍子對(duì)鳙魚絨毛高度及V/C的影響常規(guī)方法制作石蠟切片，測(cè)定前腸、后腸的絨毛高度以及隱窩深度，計(jì)算絨毛高度/隱窩深度。

1.7統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行單因素方差分析，并對(duì)均數(shù)作LSD多重比較。結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2　結(jié)果與分析

2.1五倍子對(duì)鳙魚Trypsin的影響由圖1可以看出，第15天試驗(yàn)組Trypsin活力均低于對(duì)照組，隨著飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，試驗(yàn)組均有所上升，1.00%組、0.50%組均超過對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05）。

圖1　五倍子對(duì)Trypsin活力的影響

2.2五倍子對(duì)鳙魚Lipase的影響由圖2可以看出，第15天試驗(yàn)組Lipase活力均低于對(duì)照組，且2.00%組顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；第30、45天0.50%組、1.00%組均有所提高，第45天0.50%組、對(duì)照組均顯著高于2.00%組（P<0.05）。

圖2　五倍子對(duì)Lipase活力的影響（U/mg）

2.3五倍子對(duì)鳙魚Amylas的影響由圖3可以看出，隨著五倍子添加量增加Amylas活力隨之升高，第15、30天試驗(yàn)組與對(duì)照組差異不顯著（P> 0.05）；第45天1.00%、2.00%與對(duì)照組、0.50%組相比差異顯著（P<0.05）。

2.4五倍子對(duì)鳙魚絨毛高度及V/C的影響由表2、中插彩版圖4、5可以看出，各組間前腸絨毛高度以及前腸V/C的值各組之間差異不顯著（P> 0.05），1.00%組最高，后腸絨毛高度試驗(yàn)組0.50%、對(duì)照組與2.00%組比較差異顯著（P<0.05）；后腸V/C各組之間差異不顯著（P>0.05），以0.50%組最高、2.00%組最低。

圖3　五倍子對(duì)鳙魚血清Amylas的影響（U/mL）

表2　五倍子對(duì)絨毛高度及V/C的影響

3　討論

魚類消化酶活力決定了個(gè)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收，影響著個(gè)體的發(fā)育和生長(zhǎng)[6]。胰腺分泌的消化酶可進(jìn)入小腸近端，促使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)分解成小分子或單體被腸上皮細(xì)胞吸收[7]。消化酶類屬蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分子的苯環(huán)、雜環(huán)等有些疏水基團(tuán)可與單寧酸分子的苯環(huán)疏水基發(fā)生疏水結(jié)合形成絡(luò)合物，從而抑制消化酶分泌[8]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，第15天各組胰蛋白酶、脂肪酶活力隨著添加五倍子濃度的增加而逐漸降低，可能是由于五倍子中含有單寧等有效成分對(duì)消化酶活力產(chǎn)生了一定抑制作用。隨飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，0.50%組與1.00%組上升趨勢(shì)明顯；至第45天，0.50%組消化酶活力均高于對(duì)照組（P>0.05），2.00%組消化酶始終低于其他各組，隨飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)無顯著變化且低于其他試驗(yàn)組；第15天試驗(yàn)組淀粉酶活力高于對(duì)照組，1.00%組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），第30天、45天試驗(yàn)組酶活力有所下降，且1.00%、2.00%與對(duì)照組、0.50%組相比差異顯著（P<0.05），可能為單寧酸對(duì)酶抑制作用會(huì)隨飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而有所降低，飼養(yǎng)一段時(shí)間后，動(dòng)物腸道適應(yīng)一定濃度的單寧酸，恢復(fù)消化酶的分泌。同時(shí)由于五倍子的主要有效成分鞣質(zhì)在酸性條件下完全水解形成葡萄糖和沒食子酸，進(jìn)一步促進(jìn)了消化酶分泌[9]。

鳙魚屬于無胃魚，腸道是消化與吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所，因此腸道的完整性對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育起著關(guān)鍵作用。小腸絨毛V/C值是評(píng)定動(dòng)物消化吸收能力的重要指標(biāo)。V/C值越大，說明消化吸收能力越強(qiáng)，反之越差[10]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各組之間前腸絨毛高度差異不顯著（P>0.05），1.00%組最高；前腸V/C的值各組之間差異不顯著（P> 0.05），1.00%組最高，2.00%組最低；后腸絨毛高度試驗(yàn)組0.50%、對(duì)照組與2.00%組比較差異顯著（P<0.05）；后腸V/C各組之間差異不顯著（P> 0.05）。說明高濃度五倍子在一定程度上抑制腸道發(fā)育，低濃度促進(jìn)腸道發(fā)育，且1.00%為最佳。但關(guān)于五倍子對(duì)腸道發(fā)育及酶活力的影響機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]王清印，李杰仁，楊寧生，等.異育銀鯽[J].中國(guó)水產(chǎn)生物種資源與利用，2010（2）：18-36.

[2]殷祿隔，郭金龍，宮春光，等.藥物在魚體內(nèi)殘留和休藥期[J].河北漁業(yè)，2010（2）：52.

[3]于麗萍.幾種防治魚病效果顯著的中草藥[J].河北漁業(yè)，1999 （3）：45-46.

[4]姚嘉赟，徐洋，茹洪順，等.29種中草藥提取物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑菌活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（26）：12911-12922.

[5]張海賓，楊桂芳.12種中草藥對(duì)嗜水氣單胞菌殺傷能力的研究[J].水產(chǎn)科學(xué)，2006，25（1）：16-18.

[6] Flávia C P，Silva，Jacques R，et al.Zambonino-Infante.Influence of partial substitution of dietary fish meal on the activity of diges?tive enzymes in the intestinal brush border membrane of gilthead sea bream，Sparus aurata and goldfish，Carassius auratus[J].Aqua?culture，306（2010）：233-237.

[7] Chikwati E M，Sahlmanni C，Holm H.Alterations in digestive enzyme activities during the development of diet-induced enteritis in Atlantic salmon，Salmo salar L[J].Aquaculture，402-403（2013）：28-37.

[8] Naczk M，Amarowicz R，Zadernowski R.Protein precipitating ca?pacity of condensed tannins of beach pea，canola hulls，evening primrose and faba bean [J].Food Science，73（2001）：467-471.

[9]丁平陽(yáng)，劉季科，陶雙倫，等.沒食子酸及其衍生物對(duì)α-淀粉酶作用機(jī)制研究[J].食品工程科技，2012，33（2）：167-169.

[10]韓正康.家畜營(yíng)養(yǎng)生理學(xué)[M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：16-17.

Influenceof digestiveenzymeactivity and morphology of the intestinal to aristichtysnobilisusing gallnut extracted by alcohol

GENG Xin-ying1，LIU Lei2，WANG Jia-zhen1，WANG Wei1，SHAN Xiao-feng1，MA Hong-xia1，GAO Yun-hang1
（1.College of Animal Science and Technology，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China；2.Jilin Xianghai national nature reserve，Baicheng 137215，China）

Abstract：In order to study the effect of gallnut on digestive enzyme activity and intestinal morphology of Aristichtys nobilis，0.00%，0.50%，1.00% and 2.00% alcohol extractions of gallnut were added into the basic diet respectively.Intestinal contents were collected to detect the digestive enzyme activity at 15，30，and 45 d.At 45 d，foregut and hindgut were collected to make paraffin sections to observe morphological changes.The results showed that the trypsin and lipase activities reduced with the increasing con?centration of gallnut at 15 d in test group，and the digestive enzyme activity of 0.50% group was higher than the control group when feeding to 45 d（P>0.05）.Digestive enzyme activity of 2.00% group was always lower than other groups.At 15 d，amylase activity in test groups was higher than the control group.1.00% group was significantly higher than the control group（P<0.05）.At 30 d and 45 d in test group，enzyme activity decreased but was still higher than the control group.Difference in foregut villus height between the experimental groups was non-significant，and 1.00% was the highest；Height of hindgut intestinal villus in 0.50% group and the control group was significantly different from that of the 2.00 group（P<0.05）.V/C difference was not significant in each groups （P>0.05），and 0.50% group was the highest.For the diets supplemented with different concentrations of alcohol extracted gallnut，secretion of digestive enzyme and intestinal development were impaired at the beginning .However，with the extension of feeding time，secretion of digestive enzyme and intestinal development were enhanced by low concentration gallnut，and the optimum add?ing proportion was 0.50%.

Key words：alcohol extraction；gallnut；aristichtys nobilis；digestive enzyme activity；intestinal morphology

中圖分類號(hào)：S859.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0529-6005（2016）05-0114-03

收稿日期：2015-01-29

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31201927）；吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目（20150204065NY）

作者簡(jiǎn)介：耿昕穎（1993-），女，碩士，研究方向?yàn)閯?dòng)物疫病防治；E-mail：1160455285@qq.com

通訊作者：高云航，E-mail：gaoyunhang@163.com

Corresponding author：GAO Yun-hang