中藥山茱萸中馬錢素的提取工藝研究

禤雪梅　江國(guó)榮（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥劑科　佛山　528000）

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中藥山茱萸中馬錢素的提取工藝研究

禤雪梅江國(guó)榮（廣東省佛山市第一人民醫(yī)院藥劑科佛山528000）

摘要：目的：探討中藥山茱萸中有效成分馬錢素的提取工藝。方法：以提取溫度、提取時(shí)間、溶劑用量作為參考因素，超聲波提取工藝，采用L9（34）正交試驗(yàn)表進(jìn)行工藝優(yōu)化設(shè)計(jì)，馬錢素含量采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定（色譜柱：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），流動(dòng)相：甲醇：水=30∶70，檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm，柱溫：25℃，流量1.0mL/min）。結(jié)果：山茱萸中馬錢素最佳提取工藝為提取溫度為80℃，提取時(shí)間為105min，溶劑95%乙醇用量為50mL。該方法提取出的馬錢素含量為14.25mg/g。結(jié)論：超聲提取優(yōu)化工藝后方法簡(jiǎn)便可行，得到的山茱萸中馬錢素含量較高。

關(guān)鍵詞：山茱萸超聲提取馬錢素高效液相色譜法

山茱萸（Cornus officinalis Sieb. Et Zucc）為山茱萸科植物山茱萸的果實(shí)，是重要的野生植物資源，同時(shí)是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材植物之一［1］。山茱萸臨床上具有補(bǔ)益肝腎、澀經(jīng)固脫之效，用于眩暈耳鳴、腰膝酸痛、尿頻、崩漏等癥［2］。目前研究中認(rèn)為山茱萸中含有的熊果酸、齊墩果酸、山茱萸苷、馬錢素以及沒(méi)食子酸等是主要活性成分［3］。馬錢素是一種環(huán)烯醚萜苷類化合物，也是重要的心血管活性物質(zhì)，在預(yù)防心血管疾病等方面效果顯著［4］。2015年版《中國(guó)藥典》中記載的測(cè)定方式來(lái)測(cè)定馬錢素的量控制山茱萸的質(zhì)量，將中藥山茱萸應(yīng)用于臨床等各個(gè)方面的研究，以發(fā)揮我國(guó)豐富野生自然資源的作用。本研究中以超聲提取作為山茱萸中馬錢素的提取手段，以L9（34）正交試驗(yàn)表，將提取溫度、提取時(shí)間、溶劑用量作為參考因素進(jìn)行工藝優(yōu)化設(shè)計(jì)，馬錢素的含量測(cè)定采用高效液相色譜法?，F(xiàn)將研究報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1試驗(yàn)儀器：高效液相色譜儀采用美國(guó)Watershed公司生產(chǎn)的色譜儀器（主要包括Waters717泵，WatersECM溫度控制器，Waters717色譜數(shù)據(jù)工作站），YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm）色譜柱，KQ-101型超聲發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司），電子分析天平（美國(guó)梅特勒公司，精度：0.0001g），514紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)（安捷倫科技公司），R-203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，DKS-14型電熱恒溫水浴鍋，SHZ-M循環(huán)水式真空泵。

1.2試驗(yàn)藥品：中藥山茱萸粉末（由中藥材公司提供的新鮮山茱萸經(jīng)過(guò)去核、真空減壓干燥、粉碎機(jī)粉碎后過(guò)60目篩），馬錢素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定所，純度為99.97%），甲醇溶液（杭州高晶精細(xì)化工有限公司）為色譜純，95%乙醇溶液，無(wú)水乙醇（北京化學(xué)科技有限公司），乙腈（上海生物科技有限公司）為分析純，水為雙蒸水。

2　方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的配制：精密稱取馬錢素對(duì)照品5.1g，置于5mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度搖勻后靜置，甲醇補(bǔ)充不足的溶液至刻度后，配制成馬錢素1.02mg/mL的對(duì)照品溶液，放置于4℃冰箱中備用。

2.2色譜條件的選擇：采用色譜柱：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），流動(dòng)相：甲醇∶水=30∶70，檢測(cè)波長(zhǎng)為236nm，柱溫：25℃，流量1.0mL/min，進(jìn)樣量為20μL。理論塔板數(shù)按照馬錢素色譜法計(jì)算不低于3000［5］。在上述色譜條件下，馬錢素與其他成分均可以達(dá)到良好的色譜分離。見(jiàn)圖1。

2.3線性關(guān)系的考察：分別吸取“2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分別置于5.0mL容量瓶中，用甲醇溶液定溶至刻度后搖勻，過(guò)0.22μm微孔濾膜后，分別取20μL重復(fù)進(jìn)樣3次，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制線性關(guān)系方程：Y=120410X+119874，r= 0.9997，馬錢素在0.0510～0.510mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗(yàn)：精密吸取“2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)連續(xù)進(jìn)樣5次，按照線性關(guān)系方程進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果表明馬錢素5次進(jìn)樣峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為RSD=1.95%，表明該方法下樣品的精密度良好。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)：將過(guò)40目篩的山茱萸樣品按照超聲提取方式進(jìn)行回流提取，吸取一定量的山茱萸溶液利用甲醇溶液定溶至10mL容量瓶中，分別于0、1、2、4、8、12、24、36、72h取20μL，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果RSD值為4.23%，表明樣品溶液在72h內(nèi)含量穩(wěn)定。

2.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取山茱萸供試品溶液適量，精密稱定后按照馬錢素定量方法重復(fù)測(cè)定5次，結(jié)果顯示RSD為0.74%，表明樣品測(cè)定的重現(xiàn)性較好。

3　提取工藝試驗(yàn)

3.1高效液相色譜法測(cè)定提取樣品中馬錢素的含量：在同一色譜條件下，比較進(jìn)樣量相同的對(duì)照品及樣品的出峰時(shí)間，出峰時(shí)間相同則為同一個(gè)組份，后根據(jù)線性關(guān)系方程對(duì)樣品中馬錢素的含量進(jìn)行定量測(cè)定［6］。

3.2提取溶劑對(duì)山茱萸中馬錢素提取效果的影響：取中藥山茱萸藥材粗粉末約1.0g，精密稱重后治愈離心管內(nèi)，加入適量的甲醇溶液10mL提取20min后置于3000rad/min離心機(jī)中分離5min，將上清液過(guò)濾，殘?jiān)^續(xù)加入甲醇溶液10mL進(jìn)行第二次提取，共提取5次后，合并濾液。馬錢素是一種水溶性的環(huán)烯醚萜苷類化合物，因此試驗(yàn)中選擇了極性較大的95%乙醇溶液、甲醇溶液以及雙蒸水作為提取溶劑進(jìn)行比較，回流提取溫度均為65℃，回流時(shí)間均為60min。其中馬錢素的含量測(cè)定方式為將定溶至5mL的樣品進(jìn)行稀釋，吸取20μL溶液后按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件分別重復(fù)進(jìn)樣3次，以線性回歸方程測(cè)定質(zhì)量濃度，見(jiàn)表1。

3.3正交試驗(yàn)：為確定中藥山茱萸中馬錢素的最佳提取工藝，以提取溫度、提取時(shí)間、溶劑用量作為參考因素，采用L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)，各因素水平見(jiàn)表2。

表1　不同溶劑提取馬錢素的含量比較（%）

表2　超聲波提取山茱萸中馬錢素因素水平表

3.4正交試驗(yàn)結(jié)果：山茱萸中馬錢素的超聲波提取正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　超聲波提取山茱萸中馬錢素的正交試驗(yàn)結(jié)果

4　小結(jié)

馬錢素是中藥山茱萸中的主要活性成分［7］，在山茱萸中的含量較高，性質(zhì)穩(wěn)定，采用高效液相色譜法進(jìn)行含量的測(cè)定操作方法簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性較好。

4.1提取溶劑的影響：提取溶劑的極性對(duì)于馬錢素的提取效率影響較大，95%乙醇溶液的提取效果好于采用甲醇或雙蒸水溶液對(duì)馬錢素的提取。

4.2提取溫度、時(shí)間的影響：對(duì)于超聲波提取方式，提取溫度對(duì)于山茱萸中馬錢素的提取效率影響較大，最佳的提取溫度為80℃，同時(shí)提取時(shí)間對(duì)山茱萸中馬錢素含量的影響有一定的決定性，超聲波提取條件下最佳的提取時(shí)間為105min左右。

4.3乙醇體積對(duì)提取工藝的影響：正交試驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇體積的多少對(duì)提取效率影響不大，因此考慮提取工藝的經(jīng)濟(jì)性，在不影響馬錢素含量的條件下，較少的乙醇用量可以應(yīng)用于提取工藝。本研究中通過(guò)試驗(yàn)確定最佳提取工藝為：在80℃的條件下，加入95%乙醇溶液的量為50mL，進(jìn)行超聲提取105min得到最大含量的馬錢素。該方法操作簡(jiǎn)單，易行。

參考文獻(xiàn)

［1］吳立明.山茱萸研究現(xiàn)狀和開(kāi)發(fā)前景［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2012，6（8）：32-34.

［2］俞堅(jiān)，勵(lì)建榮，鄭群雄.微波提取山茱萸馬錢素的工藝研究［J］.浙江工商大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，4（1）：45-47.

［3］呂鵬飛，李倩.山茱萸中馬錢素標(biāo)準(zhǔn)版的制備研究［J］.河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，22（5）：529-531.

［4］徐立華，彭國(guó)平.山茱萸水煎醇沉工藝的正交實(shí)驗(yàn)研究［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，16（5）：291-292.

［5］呼海濤，張振凌，朱瑄.山茱萸不同工藝炮制品中馬錢素含量比較［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，18（5）：1072-1074.

［6］郭富禮，張振凌.山茱萸不同炮制品中熊果酸含量的比較［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，13（7）：524.

［7］潘揚(yáng)，王天山，張弦，等.RP-HPLC法測(cè)定中藥山茱萸中馬錢素的含量［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，16（1）：25-27.

The study of extraction process of loganin in Chinese medicine dogwood

Abstract：Objective：To investigate the extraction process of loganin in Chinese medicine dogwood. Methods：The extraction temperature，extraction time and the amount of solvent were as the reference factors，ultrasonic was used for extraction process. The L9（34）orthogonal test table was for design optimization process，and the loganin were determined by high performance liquid chromatography（column：YWGC18（4.6mm×250mm，2.5μm），mobile phase：methanol：water=30∶70，the detection wavelength was 236nm，column temperature：25℃，flow rate was 1.0mL/min）. Results：The temperature of dogwood Loganin optimum extraction extraction was 80℃，extraction time was 105min，the amount of solvent was 95%，ethanol was 50mL. The method of extracted loganin content was 14.25mg/g. Conclusion：The method of ultrasonic extraction optimization technology is simple and feasible，and the content of dogwood Loganin is higher.

Key words：Dogwood Ultrasonic extraction Loganin HPLC

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1672-8351（2016）06-0118-03