王　靜，郭萬(wàn)里，孔亞澤，薛亦豆，許鑫瀚，梁宗鎖b

(1.浙江理工大學(xué)，a.生命科學(xué)學(xué)院；b.植物次生代謝調(diào)控浙江省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310018；2.杭州三葉青農(nóng)業(yè)科技有限公司，杭州 310018)

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珍稀藥用植物三葉青的高效微繁體系研究

王靜1a，郭萬(wàn)里1，孔亞澤1a，薛亦豆1a，許鑫瀚2，梁宗鎖1b

(1.浙江理工大學(xué)，a.生命科學(xué)學(xué)院；b.植物次生代謝調(diào)控浙江省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310018；2.杭州三葉青農(nóng)業(yè)科技有限公司，杭州 310018)

摘要:三葉青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)是我國(guó)南方民間常用藥，具有清熱解毒、消炎、抗腫瘤等功效。社會(huì)需求導(dǎo)致其野生資源匱乏，并且人工繁育的研究滯后，嚴(yán)重阻礙了三葉青的規(guī)?；N植，加重了供需矛盾，限制了產(chǎn)業(yè)鏈的發(fā)展。文章以三葉青帶腋芽的莖段為外植體材料，誘導(dǎo)側(cè)枝的發(fā)生，通過(guò)繼代、生根、移栽等過(guò)程，建立了三葉青高效微繁體系。結(jié)果表明，帶腋芽的半木質(zhì)化莖段(3～8節(jié))作為外植體好于帶芽莖尖；最佳腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L 6BA+0.025 mg/L NAA；最佳側(cè)枝增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6BA+0.025 mg/L NAA，生長(zhǎng)勢(shì)下降時(shí)加入0.025 mg/L GA ；最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+1.5 mg/L IBA；移栽成活率可達(dá)到90%以上。該體系激素濃度配比低，操作簡(jiǎn)便，繁殖效率高等特征適合三葉青種苗的規(guī)?；鸵?guī)范化育苗。

關(guān)鍵詞：三葉青；莖段；腋芽；側(cè)枝；微繁

0引言

三葉青(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg)，又名三葉崖爬藤、金線吊葫蘆、蛇附子等，為葡萄科崖爬藤屬多年生藤本植物[1-2]。廣泛分布于長(zhǎng)江以南各省份，主要有浙江、江西、福建、廣西、云南等地區(qū)。其生長(zhǎng)微環(huán)境主要是山坡、林下的灌叢中或山谷溪邊林下的巖石縫中，海拔高度一般為300～1300 m[3]。三葉青在我國(guó)南方為民間常用藥，主要以塊根入藥，具有清熱解毒、活血化瘀等功效，民間主要用于治療小兒高熱驚厥、肺炎、跌打損傷等[2]。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)三葉青在抗氧化[4]、抗腫瘤[5]、提高免疫力[6]及抗病毒等方面也有顯著的療效[7]。由于受到市場(chǎng)歡迎，野生三葉青被無(wú)節(jié)制的人為采挖，自然資源迅速枯竭。另外，三葉青對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求苛刻，生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，其扦插繁殖效率較低，從而加劇了三葉青野生資源保護(hù)和社會(huì)需求之間的矛盾。目前，鐘毓倩[8]采用莖尖，錢麗華[9]、Jiang等[10]、史清英[11]、邵駿驊等[12]采用帶芽莖段均成功誘導(dǎo)了三葉青的叢生芽，獲得試管苗。然而，腋芽叢生增殖方法中使用的激素濃度較高，苗多次繼代后長(zhǎng)勢(shì)較弱，需進(jìn)行壯苗處理，且其愈傷組織容易褐化導(dǎo)致死亡，不適合規(guī)?；鸵?guī)范化育苗。因此，本研究采用微型扦插法，以半木質(zhì)化的帶腋芽莖段為外植體，在總激素降低的前提下，探索最佳的激素配比組合，誘導(dǎo)側(cè)枝的生長(zhǎng)，優(yōu)化繼代、生根和移栽等程序，建立了操作簡(jiǎn)便且增殖率高的高效微繁體系，適用于三葉青種苗的規(guī)?；鸵?guī)范化培育，具有重要的生產(chǎn)價(jià)值和實(shí)踐意義。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

2014年6月，三葉青植株取自浙江省杭州市余杭區(qū)杭州市三葉青農(nóng)業(yè)科技有限公司種苗基地，種植在浙江理工大學(xué)浙江省植物次生代謝調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室人工氣候室中預(yù)培養(yǎng)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1外植體處理

選擇三葉青新長(zhǎng)出的莖段(莖尖為1～2節(jié)，半木質(zhì)化莖段為3～8節(jié))，剪取帶腋芽的莖段1.5～2.0 cm，流水沖洗1～2 h，洗潔精清洗5 min，洗凈。移至無(wú)菌超凈臺(tái)，先用70%乙醇洗30 s，無(wú)菌水沖洗，再用0.1%的升汞滅菌8～10 min，期間輕輕震蕩，最后用無(wú)菌水沖洗4～5次，每次5 min。由此獲得無(wú)菌材料。

1.2.2培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：以MS或1/2MS為基本培養(yǎng)基[13]，附加不同種類、濃度的生長(zhǎng)素或細(xì)胞分裂素(包括6BA、NAA、IBA等)。初代及繼代培養(yǎng)基的蔗糖含量為3%，生根培養(yǎng)基的蔗糖含量為2%，瓊脂為0.54%，pH值為5.8～6.0。115℃ 高壓蒸汽滅菌15 min。環(huán)境條件：光周期為14 h光照，10 h黑暗，光照強(qiáng)度為2000～4000 Lx，溫度為(25±2)℃。

1.2.3初代培養(yǎng)

選取嫩枝上帶芽莖尖、帶腋芽的半木質(zhì)化莖段進(jìn)行初培養(yǎng)，將消毒處理后的帶芽莖段置于滅菌的牛皮紙上，切去部分生理下端，留下帶腋芽的1.0～1.5 cm的莖段，接種到相應(yīng)的初代培養(yǎng)基上(表1，C1—C16)，露出腋芽。每個(gè)處理接種30個(gè)外植體。培養(yǎng)至45 d時(shí)觀察并統(tǒng)計(jì)生長(zhǎng)情況。

1.2.4繼代培養(yǎng)

選取長(zhǎng)勢(shì)比較一致的初代無(wú)菌苗，將其上端側(cè)枝分離，剪取2.0 cm左右?guī)б秆壳規(guī)?～6片葉片的莖段，轉(zhuǎn)到相應(yīng)繼代培養(yǎng)基中(表2，J1—J11)。每個(gè)處理接種50個(gè)外植體，培養(yǎng)45 d，觀察并統(tǒng)計(jì)其生長(zhǎng)及增殖情況。

1.2.5生根培養(yǎng)

隨機(jī)選取繼代無(wú)菌苗，將分枝的莖段分離，選取3.0 cm左右?guī)б秆康那o段，留有3～6片頂端葉片，插入不同的生根培養(yǎng)基中(1/2MS + 0～4mg/L IBA或NAA)。每個(gè)處理接種50個(gè)外植體，培養(yǎng)15 d，觀察其生根情況。

1.2.6馴化與移栽

馴化：將生根培養(yǎng)基中的無(wú)菌苗從組織培養(yǎng)室移至人工氣候室，蓋子打開，加水至培養(yǎng)基表面1.0 cm左右，光照14 h，馴化3～5 d。

移栽：將蛭石∶草炭土以2∶1比例混合，高壓滅菌鍋滅菌后鋪滿育種盤。將馴化之后生長(zhǎng)良好的苗取出，輕輕洗去根上的培養(yǎng)基，剪去靠下端的葉片，僅留取頂端葉片即可，移至育種盤中并保濕，置于人工氣候室培養(yǎng)。10 d后揭去塑料蓋，30 d觀察生長(zhǎng)情況并統(tǒng)計(jì)成活率。

2結(jié)果

2.1初代培養(yǎng)

2.1.1外植體的選擇

不同外植體材料(帶芽莖尖、帶腋芽的半木質(zhì)化莖段)在添加不同濃度6BA的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行初培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)莖段的腋芽誘導(dǎo)出的無(wú)菌苗都明顯較莖尖誘導(dǎo)的長(zhǎng)勢(shì)好(圖1)。帶腋芽莖段誘導(dǎo)的無(wú)菌苗分枝較多，葉片較多，較大，更健壯，且莖尖誘導(dǎo)的無(wú)菌苗隨著6BA濃度的增加葉片出現(xiàn)嚴(yán)重退化，而莖段誘導(dǎo)的雖葉片變小但少有退化。這可能是因?yàn)椴煌课坏那o段上的腋芽體內(nèi)的激素水平不同。因此，我們選用半木質(zhì)化帶腋芽的莖段作為外植體進(jìn)行初代培養(yǎng)。

圖1　不同外植體材料在初代培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況注：A、B、C為莖尖分別在1.0、2.0、3.0 mg/L 6BA的MS培養(yǎng)基；D、E、F為莖段分別在1.0、2.0、3.0 mg/L 6BA的MS培養(yǎng)基。

2.1.2不同激素濃度對(duì)腋芽誘導(dǎo)的影響

消毒后的腋芽莖段在初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 d左右，腋芽開始萌動(dòng)(圖2A)，30 d左右成長(zhǎng)為無(wú)菌小苗(圖2B)，45 d左右生長(zhǎng)旺盛(圖1D、E、F)。研究發(fā)現(xiàn)，在1/2MS基本培養(yǎng)基中，加入少量NAA(0.025 mg/L)對(duì)初代苗的生長(zhǎng)有顯著促進(jìn)作用，隨著6BA濃度增加，平均株高出現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，其中當(dāng)6BA達(dá)到1.5 mg/L時(shí)，初代苗平均株高達(dá)到最高(4.6±0.84 cm)(圖3A)；在MS基本培養(yǎng)基中，加入少量NAA(0.025 mg/L)對(duì)初代苗株高有一定抑制作用，但對(duì)其葉片過(guò)小有一定改善作用，其中，6BA濃度增加時(shí)，株高逐漸增高并與不含NAA的差距縮短，當(dāng)達(dá)到1.5 mg/L時(shí)，與不含NAA的株高并無(wú)顯著性差異(圖3B、表1)；在不含NAA激素時(shí)，與1/2MS基本培養(yǎng)基相比，MS對(duì)株高有明顯促進(jìn)作用，而加入少量NAA后，MS卻對(duì)株高有一定的抑制作用，不過(guò)，隨著6BA濃度的增加，其抑制作用逐漸降低(圖3C、D)。此外，1/2MS中的無(wú)菌苗長(zhǎng)勢(shì)比MS慢，加入少量NAA，愈傷有一定的增大，葉片也有一定的增多增大(表1)，因此選用C15(MS+1.5 mg/L 6BA+0.025 mg/L NAA)作為初代苗的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

A：帶腋芽的莖段；B：誘導(dǎo)的無(wú)菌苗；C：繼代小苗；D：增殖苗；E：30d生根；F：馴化；G：移栽至溫室；H：移栽至大田圖2　三葉青微繁體系

圖3　培養(yǎng)基對(duì)初代苗高度的影響

編號(hào)基本培養(yǎng)基6BA/(mg·L-1)NAA/(mg·L-1)生長(zhǎng)情況C11/2MS0.50愈傷較小,葉較多,芽較少,長(zhǎng)勢(shì)較慢C21/2MS1.00愈傷較小,葉較多,芽適中,長(zhǎng)勢(shì)較慢C31/2MS1.50愈傷較小,上端葉較小,芽聚集,長(zhǎng)勢(shì)較慢C41/2MS2.00愈傷較小,葉小、有畸形,芽聚集,長(zhǎng)勢(shì)較慢C51/2MS0.50.025愈傷增大,葉較多、較大,芽較少C61/2MS1.00.025愈傷較大,葉較多、上段葉較大,芽適中C71/2MS1.50.025愈傷較大,葉較多、上段葉較小,芽聚集C81/2MS2.00.025愈傷較大,葉較小,芽聚集較多C9MS0.50愈傷較小,葉較多、較大,芽較少C10MS1.00愈傷較小,葉較多,上段葉較小,芽適中C11MS1.50愈傷較小,上段葉較小,芽較多C12MS2.00愈傷較小,上端葉小、畸形,芽聚集C13MS0.50.025愈傷增大,葉較大,芽較少C14MS1.00.025愈傷增大,葉較多,芽適中C15MS1.50.025愈傷較大,中下段葉較大,芽較多C16MS2.00.025愈傷較大,下段葉較大,芽較多

2.2繼代培養(yǎng)

將外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的無(wú)菌苗側(cè)枝切分，接種到繼代培養(yǎng)基中(圖2C、D)，培養(yǎng)45 d后以無(wú)菌苗生長(zhǎng)情況及側(cè)枝的增殖情況為主要參考依據(jù)(表2)來(lái)篩選最佳增殖培養(yǎng)方案。

當(dāng)培養(yǎng)基為J1—J5時(shí)，隨著6BA濃度的增加，繼代苗的平均株高逐漸降低，而其平均增殖系數(shù)先增加后降低，在6BA濃度為1.25 mg/L時(shí)達(dá)到最高(5.48 cm)，但葉片較小，有部分退化現(xiàn)象。當(dāng)6BA為1.0～1.5 mg/L時(shí)，其增殖系數(shù)并無(wú)顯著性差異。綜合考慮株高、增殖系數(shù)、愈傷及葉片大小，當(dāng)6BA濃度為1.0 mg/L時(shí)，其長(zhǎng)勢(shì)及增殖情況最佳。

當(dāng)培養(yǎng)基為J6、J3、J7時(shí)，隨著GA濃度的增加，繼代苗的平均株高逐漸升高，但平均增殖系數(shù)逐漸降低，并無(wú)顯著性差異。當(dāng)GA為0.025 mg/L時(shí)，長(zhǎng)勢(shì)及增殖情況最佳。

當(dāng)培養(yǎng)基為J8、J3、J9時(shí)，隨著NAA濃度的增加，繼代苗的平均株高逐漸降低，而其增殖系數(shù)先增加后降低，愈傷逐漸增大，葉片逐漸變多變大。當(dāng)NAA為0.025 mg/L時(shí)，長(zhǎng)勢(shì)及增殖情況最佳。

當(dāng)培養(yǎng)基為J10、J11、J3時(shí)，隨著MS強(qiáng)度的增加，繼代苗的平均株高和增殖系數(shù)先略降低后升高，葉片逐漸變大。當(dāng)為全MS時(shí)，長(zhǎng)勢(shì)及增殖情況最佳。

綜合考慮繼代苗的株高、增殖系數(shù)、愈傷及葉片大小，選擇J3(MS+1.0 mg/L6BA+0.025 mg/LNAA+0.025 mg/LGA)為最佳增殖培養(yǎng)基。

表2　植物激素對(duì)三葉青瓶苗的影響

2.3生根情況

在1/2MS基本培養(yǎng)基上加入不同濃度的IBA、NAA，無(wú)菌苗的生根情況不同(圖2E、圖4(a)、(b))。其中，加入IBA或NAA后，其生根率達(dá)到100%，但是當(dāng)NAA濃度超過(guò)1.5 mg/L時(shí)，其生根率逐漸降低(圖4a)；隨著IBA濃度的增加，其生根數(shù)明顯增多，達(dá)到1.5 mg/L時(shí)，其增加并不顯著(13.32±5.87根)，4.0 mg/L時(shí)，生根數(shù)達(dá)到最多(14.72±5.39根)，加入NAA的生根數(shù)也是隨著濃度的增高而先增加后減少，達(dá)到1.0 mg/L時(shí)，其生根數(shù)達(dá)到最高(10.4±4.48根)，出于成本與效果的考慮，選擇1.5 mg/L IBA為最佳誘導(dǎo)生根濃度(圖4(b))。由此看出，IBA的誘導(dǎo)生根效果明顯好于NAA，因此選擇1/2MS+1.5 mg/L IBA為最佳生根培養(yǎng)基。

圖4　不同生長(zhǎng)素濃度對(duì)生根的影響

2.4移栽情況

由于繼代所用的外植體為側(cè)枝，較為粗壯，通過(guò)馴化、移栽，其成活率可達(dá)到90%以上(圖2G、H)。

3討論

在無(wú)菌苗誘導(dǎo)過(guò)程中，外植體的選擇至關(guān)重要。與外植體先脫分化形成愈傷再分化成幼苗的途徑相比，植物以芽繁芽的方式操作簡(jiǎn)便，且更能穩(wěn)定地遺傳母本的優(yōu)良性狀，不易變異[14-15]。莖尖頂芽具有分生能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快、含病毒少等優(yōu)點(diǎn)，常被選作多種植物的外植體材料，但是張宗勤[16]研究發(fā)現(xiàn)葡萄莖尖頂芽幼嫩，不耐受消毒劑并且容易褐化，從而選擇去除頂芽后枝條上端的腋芽作為優(yōu)良外植體；此外，莖尖材料較少，不宜進(jìn)行大規(guī)模剪切。經(jīng)過(guò)本文研究發(fā)現(xiàn)，三葉青上端半木質(zhì)化莖段上的腋芽與莖尖頂芽相比，誘導(dǎo)出的無(wú)菌苗萌芽率高，分枝多，長(zhǎng)勢(shì)好，這可能與體內(nèi)不同部位激素水平不同有關(guān)，尤其與細(xì)胞分裂素的濃度有關(guān)，如圖1隨著6BA濃度的增加，愈傷變大、葉退化嚴(yán)重，很可能頂芽中內(nèi)源6BA濃度較高，添加外源激素時(shí)，進(jìn)一步打破了外植體體內(nèi)激素平衡，導(dǎo)致頂芽的誘導(dǎo)效果較差。因此，本文采用三葉青半木質(zhì)化莖段上的腋芽來(lái)誘導(dǎo)無(wú)菌苗，這與楊威等[17]在烏蘞莓的研究中對(duì)外植體的選擇一致。

在三葉青無(wú)菌培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，基本培養(yǎng)基及植物激素(6BA、NAA、GA、IBA)對(duì)腋芽誘導(dǎo)、增殖及無(wú)菌苗生長(zhǎng)、生根情況均有顯著影響。結(jié)果顯示，MS基本培養(yǎng)基比1/2MS誘導(dǎo)的無(wú)菌苗長(zhǎng)勢(shì)較快，增殖率較高，適用于誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)，但1/2MS更適合誘導(dǎo)三葉青生根，用于生根培養(yǎng)。在植物中細(xì)胞分裂素主要促進(jìn)細(xì)胞分裂，改變頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)芽的分化等，生長(zhǎng)素主要影響莖和節(jié)間伸長(zhǎng)、頂端優(yōu)勢(shì)、生根等[18]。本研究發(fā)現(xiàn)一定濃度的6BA(1.0～1.5 mg/L)可促進(jìn)三葉青腋芽誘導(dǎo)率及增殖率，但隨著濃度逐漸增高，其促進(jìn)作用強(qiáng)度逐漸降低，且外植體伸長(zhǎng)生長(zhǎng)受到嚴(yán)重抑制；低濃度的NAA(0.025 mg/L)可促進(jìn)愈傷，葉片增大，減少畸形，并增加腋芽增殖率，但高濃度(0.050 mg/L)卻對(duì)腋芽增殖率有一定的抑制作用；只要低濃度的GA(0.025 mg/L)便可在短時(shí)間內(nèi)促進(jìn)莖及節(jié)間的伸長(zhǎng)，但抑制芽的分化增殖，高濃度的GA(0.050 mg/L)抑制作用尤為明顯。Jiang等[10]認(rèn)為加入GA可增加三葉青叢生芽高度，但選擇最適增殖培養(yǎng)基(2.0 mg/L 6BA +0.1 mg/L NAA)時(shí)并未加入GA。因此選擇在繼代多次生長(zhǎng)勢(shì)出現(xiàn)下降時(shí)使用少量GA(0.025 mg/L)以提高組培苗高度。IBA與NAA廣泛用于生根，本文中IBA與NAA均能刺激根的發(fā)生，但高濃度又抑制根的生長(zhǎng)，且IBA生根效果優(yōu)于NAA。

4結(jié)論

本研究以三葉青帶腋芽的半木質(zhì)化莖段為外植體，消毒后接于初代培養(yǎng)基(MS+1.5 mg/L 6BA+0.025 mg/L NAA)進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，長(zhǎng)大后將側(cè)枝分離轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基(MS+1.0 mg/L 6BA+0.025 mg/L NAA)，增殖率為5.08±1.35，繼代幾次后，組培苗生長(zhǎng)勢(shì)下降時(shí)在培養(yǎng)基中加入0.025 mg/L GA，生根時(shí)選取健壯的植株轉(zhuǎn)入(1/2 MS+1.5 mg/L IBA)培養(yǎng)基，15 d后進(jìn)行馴化移栽，移栽成活率可達(dá)到90%以上，在大田中長(zhǎng)勢(shì)良好。該體系具有遺傳性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)操作過(guò)程簡(jiǎn)單，增殖效率高，移栽容易成活等優(yōu)點(diǎn)，為三葉青種苗規(guī)模化、規(guī)范化育苗提供可操作的體系。目前，采用該體系已經(jīng)培育了5萬(wàn)多株種苗，證明該體系用于三葉青的工廠化繁育是有效可行的。

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(責(zé)任編輯： 許惠兒)

Study on High-Efficiency Micropropagation System of Rare Medicinal Plant-TetrastigmaHemsleyanumDiels et Gilg

WANGJing1a,GUOWanli1,KONGYaze1a,XUEYidou1a,XUXinhan2,LIANGZongsuo1b

(1a.College of Life Science; 1b.Key Laboratory of Plant Secondary Metabolism and Regulation of Zhejiang Province, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China;2. Hangzhou San Ye Qing Agricultural Technology Co., Ltd., Hangzhou 310018, China)

Abstract：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg (Vitaceae) is a folk common herb in the south of China and it has the effects of heat clearing, detoxification, anti-inflammatory and anticancer. Social needs result in its shortage of wild resources, and the research on artificial breeding falls behind. This severely hindered large-scale plantation of T. hemsleyanum, aggrawated the imbalance between supply and demand and restricted the development of industrial chain. Therefore, we established high-efficiency micropropagation system of T. hemsleyanum by using stem segments of T. hemsleyanum with axillary buds as the explant materials to induce lateral branch as well as proliferation, rooting and transplantation process. The results showed that the semi-lignified stem segments (3-8 segments) with axillary buds were better than stem apex with buds as explants; the optimal culture medium for bud induction was MS+1.5 mg/L 6BA+0.025 mg/LNAA; the optimal culture medium for lateral branch proliferation was MS+1 mg/L6BA+0.025 mg/LNAA, and 0.025 mg/L GA was added when growth trend declineed; the best rooting culture medium was 1/2 MS+1.5 mg/L IBA; survival rate of transplanting could reach 90%. With lower hormone concentration ratio, user-friendly control, and high breeding efficiency, the micropropagation system is totally suitable for large-scale and standardized production of seedlings of T. hemsleyanum.

Key words：Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg; stem segment; axillary buds; lateral branch; micropropagation

DOI:10.3969/j.issn.1673-3851.2016.07.027

收稿日期：2016-01-19

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81373908);浙江理工大學(xué)科研啟動(dòng)項(xiàng)目(14042008-Y)

作者簡(jiǎn)介：王靜(1990-)，女，河北石家莊人，碩士研究生，主要從事三葉青快繁與指紋圖譜方面研究。 通信作者： 梁宗鎖，E-mail：liangzs@ms.iswc.ac.cn

中圖分類號(hào)：TS195.644

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1673- 3851 (2016) 04- 0636- 07 引用頁(yè)碼： 070704