黃玉紅， 丁劍冰， 李　霞， 艾海權(quán)， 朱玥潔， 鞏曉蕓， 趙　靜， 臘曉琳

(新疆醫(yī)科大學(xué)1基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室, 烏魯木齊　830011; 2第一附屬醫(yī)院生殖助孕中心, 烏魯木齊　830054)

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LHCGR基因、THADA基因、DENND1A基因單核苷酸多態(tài)性與新疆地區(qū)多囊卵巢綜合征的關(guān)聯(lián)性研究

黃玉紅1,2， 丁劍冰1， 李霞2， 艾海權(quán)2， 朱玥潔2， 鞏曉蕓2， 趙靜2， 臘曉琳2

(新疆醫(yī)科大學(xué)1基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室, 烏魯木齊830011;2第一附屬醫(yī)院生殖助孕中心, 烏魯木齊830054)

摘要：目的探討LHCGR基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)rs13405728、THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458和DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106與新疆地區(qū)多囊卵巢綜合征(PCOS)病的關(guān)系。 方法選擇在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖助孕中心就診的PCOS患者(PCOS組,n=33)及與PCOS組年齡、BMI相匹配的門診病人(對照組,n=19)。用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析對LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因SNP多態(tài)性進(jìn)行檢測。測定所有研究對象基礎(chǔ)狀態(tài)下的腰臀比(WHR)、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、卵泡生成素(FSH)、黃體生成素(LH)、催乳素(PRL)、雄性激素(T)、雌二醇(E2) 、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)水平，進(jìn)行口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT)和胰島素釋放試驗(yàn)。 結(jié)果PCOS組THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458 的TG+GG基因型口服糖耐量試驗(yàn)空腹胰島素(OGTT-0INS)和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)高于TT基因型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。PCOS組LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728 的TC+CC基因型口服糖耐量試驗(yàn)30 min血糖(OGTT-30BG)、OGTT-0INS、30 min胰島素(OGTT-30INS)及HOMA-IR均高于TT基因型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。PCOS組DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106 TT基因型和TC+CC基因型臨床代謝指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論THADA基因和LHCGR基因SNP位點(diǎn)與新疆地區(qū)PCOS有相關(guān)性，可能是新疆地區(qū)PCOS的2個易感基因位點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：多囊卵巢綜合征； 單核苷酸多態(tài)性； 基因型

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)是育齡期婦女最常見的內(nèi)分泌及生殖功能障礙性疾病,在育齡期婦女中的群體發(fā)病率為 5%～10%[1],在無排卵性婦女中的發(fā)病率約為70%[2],是導(dǎo)致育齡期患者無排卵性不孕的最常見原因[3]。近年來，隨著人們生活方式和環(huán)境的變化，PCOS發(fā)病率呈逐年上升趨勢[4-5]。多囊卵巢綜合征所導(dǎo)致的內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂對患者的身心健康造成了嚴(yán)重的威脅[6],由于PCOS患者存在多種遠(yuǎn)期并發(fā)癥且風(fēng)險高于正常人群,主要造成高血壓、冠心病、糖尿病及子宮內(nèi)膜癌等疾病[7-9],PCOS已逐漸成為全球關(guān)注的女性健康問題，研究其發(fā)病機(jī)制一直是生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。根據(jù)對國內(nèi)外PCOS研究形勢的分析，新疆地區(qū)PCOS的研究迫在眉睫。新疆地區(qū)具有獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境及人群特點(diǎn)，且人口流動相對較少，是進(jìn)行PCOS研究的珍貴資源。全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)提示LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因與漢族PCOS發(fā)病相關(guān)[10]，在歐洲群體中也有報道[11-12]，但是在新疆地區(qū)尚未見報道。本研究旨在探討新疆地區(qū)PCOS的 LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因的SNP位點(diǎn)多態(tài)性及其與新疆地區(qū)PCOS疾病的相關(guān)性。

1對象與方法

1.1研究對象和標(biāo)本采集及臨床生化指標(biāo)檢測選擇2013年5月-2014年2月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖助孕中心就診的PCOS患者(PCOS組,n=33)，年齡18～45 歲。PCOS 納入標(biāo)準(zhǔn)：采用2003 年荷蘭鹿特丹會議標(biāo)準(zhǔn)[13]，具備下列3項(xiàng)中2項(xiàng)即可:(1)排卵少或不排卵;(2)臨床或生化高雄激素表現(xiàn);(3)超聲顯象卵巢體積>10 mL或可見≥12個直徑2～9 mm的卵泡，并排除先天性腎上腺皮質(zhì)增殖癥、柯興綜合征、卵巢或腎上腺腫瘤。PCOS排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)無高催化乳(PRL)血癥或甲狀腺疾?。?2)無遲發(fā)的先天性腎上腺增生癥(非典型CAH)、 Cushing's 氏綜合征、垂體瘤、多囊卵巢樣；(3)患者在抽血前3個月未使用影響生殖激素、血糖、胰島素水平的藥物，未實(shí)施計劃性減肥。對照組(n=19)入選標(biāo)準(zhǔn)為同期在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖助孕中心就診的門診患者，與PCOS組患者年齡、BMI相匹配，月經(jīng)規(guī)律，血清睪酮正常，臨床無高雄激素血癥癥狀。本研究通過新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。收集所有研究對象加EDTA抗凝的外周血5 mL，置-80℃冰箱保存，檢測腰臀比(WHR)、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、卵泡生成素(FSH)、黃體生成素(LH)、催乳素(PRL)、雄性激素(T)、雌二醇(E2) 、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)水平，并進(jìn)行口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT)和胰島素釋放試驗(yàn)，分別測定口服糖耐量試驗(yàn)空腹血糖(OGTT-0BG)、口服糖耐量試驗(yàn)30 min血糖(OGTT-30BG)、口服糖耐量試驗(yàn)60 min血糖(OGTT-60BG)、口服糖耐量試驗(yàn)120 min血糖(OGTT-120BG)、口服糖耐量試驗(yàn)空腹胰島素(OGTT-0INS)、口服糖耐量試驗(yàn)30 min胰島素(OGTT-30INS)、口服糖耐量試驗(yàn)60 min胰島素(OGTT-60INS)、口服糖耐量試驗(yàn)120 min胰島素(OGTT-120INS)。

1.2基因LHCGR、THADA和DENND1A的SNP檢測

1.2.1提取外周血基因組DNA從-80℃冰箱中取出EDTA抗凝管中分裝的外周靜脈血，經(jīng)4 ℃解溶后，按照外周血基因組DNA提取試劑盒說明書提取基因組DNA。

1.2.2DNA的鑒定根據(jù)核酸蛋白定量儀測定260 nm及280 nm處的吸光度值確定濃度及純度。〗通過計算260 nm和280 nm的吸光度的比值(A260 nm/A280 nm)估計核酸的純度，基因組DNA樣品中A260 nm/A280 nm的比值應(yīng)>1.8。用含溴乙錠的1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，以DL2 000 DNA Marker 作為標(biāo)記，電泳條件：120V恒壓電泳30 min，電泳完畢后使用凝膠成像儀觀察并保存結(jié)果。

1.2.3引物序列的設(shè)計與合成在Gene bank中尋找rs13429458、rs13405728和rs2479106的序列，根據(jù)Primer5.0軟件設(shè)計引物，并由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，引物序列見表1。

表1　rs13429458、rs13405728和rs2479106的引物

1.2.4PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)取質(zhì)檢合格的基因組DNA樣本，取0.6 μL基因組DNA為模板，用rs13429458、rs13405728和rs2479106的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。按下列體系配制PCR反應(yīng)體系：10×Pfu Buffer 3 μL,dNTP Mix(10 mM) 0.6 μL,上游引物 F(10 μM)0.6 μL,下游引物R(10 μM)0.6 μL,模板0.6 μL,Pfu Polymerase(2.5 U/μL) 0.3 μL,ddH2O224.3 μL,總體積30 μL。配制好的反應(yīng)體系在PCR儀中按以下擴(kuò)增參數(shù)進(jìn)行擴(kuò)增：預(yù)變性95℃5 min,變性95℃30 s，退火60℃30 s，延伸72℃30 s，總延伸72℃7 min, 35個循環(huán)。用含溴乙錠的1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，以DL2 000 DNA Marker 作為標(biāo)記,電泳條件：120 V恒壓電泳30 min,電泳完畢后使用凝膠成像儀觀察并保存結(jié)果。

1.2.5酶切檢測rs13429458位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶為N1aⅣ, rs13405728位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶為Hpy188Ⅲ，rs2479106位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶為Spe1-HF。由限制性內(nèi)切酶、 10×NEBuffer、PCR產(chǎn)物、水組成的酶切體系總體積為25 μL，酶切體系配制好后放入PCR儀中，37℃反應(yīng)60 min，65℃ 20 min，酶切產(chǎn)物用含溴乙錠的3%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，以DL2 000 DNA Marker作為標(biāo)記，電泳條件：120 V恒壓電泳30 min，電泳完畢后使用凝膠成像儀觀察，攝像并保存結(jié)果。

2結(jié)果

2.1LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728、THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458、DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106酶切電泳結(jié)果LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728、THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458、DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106在PCR擴(kuò)增后，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，酶切電泳結(jié)果見圖1、2、3。

MK: marker; 1: PCR擴(kuò)增產(chǎn)物對照; 2～6,9,11: PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶N1aⅣ酶切后的TT 純合子基因型片段；7、8、10、12: PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶N1aⅣ酶切后的TG雜合子基因型片段圖1　THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458酶切后瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

1、4:PCR 產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Hpy188Ⅲ酶切后的CC 純合子基因型片段; 2、7、8、10、13、14:PCR 產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Hpy188Ⅲ酶切后的TC雜合子基因型片段； 3、5、6、9、11、12:PCR 產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Hpy188Ⅲ酶切后的TT純合子基因型片段； 15:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。圖2　LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728酶切后瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

1: PCR產(chǎn)物; 2、3、5、6、7、8、10: PCR 產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Spe1-HF酶切后的TT純合子基因型片段; 4、9、12: PCR 產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Spe1-HF酶切后的TC雜合子基因型片段; 11: PCR 產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Spe1-HF酶切后的CC 純合子基因型片段。圖3　DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106酶切后瓊脂糖凝膠電泳圖

2.2LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因SNP位點(diǎn)2p16.3(rs13405728)、 2p21(rs13429458)、9q33.3(rs2479106) 在PCOS組和對照組Hardy-Weinberg平衡檢測用Hardy-Weinberg平衡來檢測LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因SNP位點(diǎn)的基因型頻率分布，結(jié)果顯示PCOS組和對照組LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728、THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458、DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106的基因型頻率分布的實(shí)際值和理論值均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，說明吻合度檢驗(yàn)較好(P>0.05)，符合遺傳平衡定律，研究對象具有群體代表性，見表2、3、4。

表2　rs13429458基因型分布Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

表3　rs13405728基因型分布Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

2.3PCOS組和對照組LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布PCOS組rs13429458位點(diǎn)G等位基因頻率、rs13405728位點(diǎn)T等位基因頻率、rs2479106位點(diǎn)T等位基因頻率高于對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表5。

表4　rs2479106基因型分布Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

表5rs13429458、rs13405728、rs2479106在PCOS組和對照組基因型和等位基因頻率/例(%)

SNP位點(diǎn)PCOS組對照組χ2值P值rs13429458 TT25(75.8)17(89.5)1.4600.227 TG8(24.2)2(10.5) GG0(0.0)0(0.0) 等位基因 T58(87.9)36(94.7)1.4600.227 G8(12.1)2(5.3)rs13405728 TT23(69.7)11(57.9)3.7370.154 TC10(30.3)6(31.6) CC0(0.0)2(10.5) 等位基因 T56(84.8)30(78.9)0.7420.389 C10(15.2)8(21.1)rs2479106 TT20(60.6)10(52.6)2.8410.242 TC10(30.3)4(21.1) CC3(9.1)5(26.3) 等位基因 T50(75.8)24(63.2)0.3140.575 C16(24.2)14(36.8)

2.4LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因SNP位點(diǎn)基因型與臨床生化代謝特征的關(guān)聯(lián)

2.4.1THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458與臨床代謝的關(guān)系PCOS組THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458的TG+GG基因型臨床代謝指標(biāo)中OGTT-0INS和HOMA-IR高于TT基因型，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表6。

2.4.2LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728與臨床代謝的關(guān)系PCOS組LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728的TC+CC基因型臨床代謝指標(biāo)中的OGTT-30BG、OGTT-0INS和OGTT-30INS、HOMA-IR表達(dá)水平高于TT基因型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表7。

表6　SNP位點(diǎn)rs13429458的臨床和代謝特征(±s)

表7　SNP位點(diǎn)rs13405728的臨床和代謝特征(±s)

2.4.3DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106與臨床代謝的關(guān)系PCOS組DENND1A基因SNP位點(diǎn)rs2479106的TT基因型與TC+CC基因型的臨床代謝指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但胰島素抵抗指數(shù)均>2.77。即具有胰島素抵抗，見表8。

3討論

多囊卵巢綜合征是發(fā)病具有多因性、臨床表現(xiàn)具有多態(tài)性的生殖功能障礙性、代謝紊亂性內(nèi)分泌綜合征[14],主要表現(xiàn)為月經(jīng)異常、不孕、肥胖、多毛、高雄激素血癥、胰島素抵抗以及引發(fā)的高胰島素血癥[15]，臨床表現(xiàn)多樣性揭示了PCOS的發(fā)病與多種基因有關(guān)聯(lián)。在對漢族女性進(jìn)行的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)基因THADA、DENND1A和LHCGR具有與PCOS相關(guān)的SNP位點(diǎn)[12,16]，并成功定位了PCOS的易感基因染色體區(qū)域，其中在2號染色體2p16、2p21區(qū)域和9號染色體9q33.3區(qū)域與PCOS疾病的發(fā)生具有顯著相關(guān)性。有學(xué)者確定了THADA、DENND1A基因上多態(tài)位點(diǎn)在中國漢族女性PCOS中的作用[17-18]。2015年Ha等[19]確定了LHCGR基因SNPrs13405728在中國寧夏回族女性PCOS中的作用。本研究結(jié)果顯示PCOS組和對照組LHCGR基因、THADA基因和DENND1A基因SNP位點(diǎn)2p16.3(rs13405728)、2p21(rs13429458)、9q33.3(rs2479106)的基因型頻率分布的實(shí)際值和理論值均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，說明吻合度檢驗(yàn)較好，符合遺傳平衡定律，研究對象具有群體代表性。

表8　SNP位點(diǎn)rs2479106的臨床和代謝特征(±s)

LHCGR 編碼的孕酮-絨毛膜激素受體的低甲基化是一個潛在的PCOS致病機(jī)制[20]。本研究結(jié)果顯示PCOS組多態(tài)位點(diǎn)rs13405728 的TC+CC基因型臨床代謝指標(biāo)中OGTT-30BG、OGTT-0INS和OGTT-30INS、HOMA-IR表達(dá)水平高于TT基因型，提示易感基因LHCGR SNP突變影響PCOS患者體內(nèi)糖代謝和胰島素的分泌活動，尤其是胰島素對血糖的負(fù)調(diào)控作用減弱，從而引起血糖的升高和胰島素大量分泌, 推測LHCGR基因SNP位點(diǎn)rs13405728可能與新疆地區(qū)PCOS發(fā)病有關(guān)?；騎HADA是與2號染色體p21位點(diǎn)關(guān)系最為密切的PCOS易感基因，最初在甲狀腺腺瘤中被發(fā)現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，PCOS組多態(tài)位點(diǎn)rs13429458 的TG+GG基因型臨床代謝指標(biāo)中OGTT-0INS和HOMA-IR高于TT基因型。說明THADA基因SNP位點(diǎn)2p21(rs13429458)可能通過抑制胰島素對血糖的作用，導(dǎo)致胰島素反應(yīng)性的分泌增加出現(xiàn)胰島素抵抗，進(jìn)而成為新疆地區(qū)PCOS發(fā)病危險因子?；駾ENND1A是在9號染色體q33.3 上與 PCOS 密切相關(guān)的基因，本研究中PCOS組的TC+CC基因型與TT基因型臨床代謝指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。暫不能說明DENND1A基因SNP位點(diǎn)9q33.3(rs2479106)與新疆地區(qū)PCOS疾病發(fā)生有相關(guān)性，但實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示基因DENND1A在PCOS組中具有胰島素抵抗作用，基因DENND1A可能是PCOS疾病發(fā)生的危險基因，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

有關(guān)研究表明，PCOS患者有50%～70%存在胰島素抵抗[21]。胰島素抵抗是 PCOS生殖內(nèi)分泌功能失調(diào)和代謝紊亂的主要因素[22]。胰島素抵抗是指機(jī)體外周組織對胰島素敏感性降低，使胰島素生物學(xué)作用減弱進(jìn)而對血糖負(fù)調(diào)控作用減弱，引起血糖升高，使胰島素代償性分泌增加，形成高胰島素血癥。過高的胰島素在通過一系列生理作用后可引起患者排卵障礙及月經(jīng)異常[23]。胰島素抵抗作為關(guān)鍵因素導(dǎo)致PCOS的發(fā)生與發(fā)展[24]。本研究結(jié)果顯示PCOS患者的3個SNP位點(diǎn)都有胰島素抵抗(HOMA-IR均>2.77)，提示胰島素與血糖之間的調(diào)控平衡關(guān)系對PCOS疾病發(fā)生具有很大影響。

新疆地區(qū)是一個多民族聚居地,由于民族習(xí)慣、人口流動性及通婚狀況較少，并保持了獨(dú)特的民族生活和飲食習(xí)慣,為研究新疆地區(qū)PCOS提供了良好的資源?？赡懿煌褡宓幕蚺cPCOS的關(guān)系不同，民族差異性體現(xiàn)遺傳與疾病關(guān)聯(lián)的多樣性，還有待對新疆民族間PCOS疾病發(fā)生的差異進(jìn)行研究。PCOS是一種基因與環(huán)境因素相互作用的復(fù)雜性疾病，PCOS的病變受到基因-環(huán)境及基因間的調(diào)控，新疆少數(shù)民族獨(dú)特的生活環(huán)境對PCOS的影響也還需深入研究。

綜上所述，LHCGR 基因SNP位點(diǎn)rs13405728、THADA基因SNP位點(diǎn)rs13429458與新疆地區(qū)PCOS的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)聯(lián)，是PCOS發(fā)病的危險因素。

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(本文編輯楊晨晨)

基金項(xiàng)目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金(2013211A087)

作者簡介：黃玉紅(1991-)，女，在讀碩士，研究方向：生殖免疫。 通信作者：臘曉琳,女，博士生導(dǎo)師，博士，主任醫(yī)師，研究方向：生殖醫(yī)學(xué)，E-mail：2022498255@qq.com。

中圖分類號：R271.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-5551(2016)08-0997-07

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.08.016

[收稿日期：2016-03-28]

Analysis of LHCGR, THADA, DENND1A gene polymorphism with polycystic ovary syndrome in Xinjiang region

HUANG Yuhong1,2, DING Jianbing1, LI Xia2, AI Haiquan2, ZHU Yuejie2,GONG Xiaoyun2, ZHAO Jing2, LA Xiaolin2

(1DepartmentofImmunology,CollegeofPreclinicalMedicine,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011，China;2ReproductiveMedicineCenter,theFirstAffiliatedHospitalXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830054，China)

Abstract:ObjectiveTo explore the association between single nucleotide polymorphisms of LHCGR gene on rs13405728 site, THADA gene rs13429458 site, DENND1A gene rs2479106 and the incidence of PCOS, respectively. MethodsThe polycystic ovarian syndrome (PCOS) patients in study goroup came from the reproductive assisted reproduction center of first affiliated hospital of Xinjiang medical university and the cases in normal control group were matched with the PCOS group by age and BMI. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis was used to test SNP polymorphism of LHCGR genes, THADA gene and DENND1A. In basal conditions, waist-to-hip ratio (WHR), body mass index (BMI), follicular hormone (FSH), luteinizing hormone (LH), Prolactin (PRL), the index of insulin resistance (HOMA IR), testosterone (T), Estradiol (E2) levels and oral glucose tolerance test (OGTT) and insulin releasing test of patients and their contols were tested. ResultsIn the PCOS group, fasting insulin (OGTT-0INS) and indexes of insulin resistance (HOMA-IR) of the patients with TG+GG genotype of THADA gene SNP loci rs13429458 were higher than those with TT genotype, and there was statistically significant difference (P<0.05). In PCOS group, oral glucose 30 min (OGTT-30BG), OGTT-0INS, insulin 30 min (OGTT-30INS) and HOMA IR of the patients with TC+CC genotype of LHCGR gene SNP loci rs13405728 were higher than those in TT genotype, and there was statistically significant difference (P<0.05). There was no statistical difference (P>0.05) in clinical metabolic indices between TT genotype and TC+CC genotype of DENND1A gene SNP loci rs2479106. ConclusionThe PCOS in Xinjiang region with LHCGR and THADA genes SNP loci have correlation, which may be two susceptibility loci of PCOS.

Keywords：polycystic ovary syndrome; single nucleotide polymorphisms; genotype