黃頌1， 2，劉仲華1， 2， 3，黃建安1， 3，陽衡1， 2，李勤1， 2， 3*

茯茶水提物對Ⅱ型糖尿病小鼠糖代謝紊亂的干預(yù)作用

黃頌1， 2，劉仲華1， 2， 3，黃建安1， 3，陽衡1， 2，李勤1， 2， 3*

1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部茶學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長沙 410128；2. 國家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410128；3. 湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 長沙 410128

摘要：采用高脂高糖飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)Ⅱ型糖尿病小鼠模型，研究茯磚茶水提物對Ⅱ型糖尿病小鼠的降糖功效。結(jié)果表明，茯茶水提取物干預(yù)能顯著改善糖尿病小鼠多食、多飲、多尿、消瘦癥狀，降低空腹血糖濃度，提高機(jī)體對糖負(fù)荷的耐受性，提升胰島素和胰島素敏感水平，降低胰島素抵抗水平。同時(shí)，qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，茯茶水提物通過增強(qiáng)PPAR-α、GLUT2和GLUT4基因表達(dá)，促進(jìn)了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝，從而改善糖尿病小鼠體內(nèi)糖代謝紊亂。綜上所述，茯茶能顯著改善Ⅱ型糖尿病小鼠糖代謝紊亂癥狀，其中中、高劑量茯茶效果最為顯著。

關(guān)鍵詞：茯茶水提物；Ⅱ型糖尿??；降糖；糖代謝

糖尿病（Diabetes，DM）是指以持續(xù)高血糖為基本生化特征的代謝性疾病，由胰島素分泌不足和（或）胰島素抵抗導(dǎo)致慢性血糖增高而引起組織、器官功能紊亂，以及其他特殊類型的疾?。?］，其中Ⅱ型糖尿病所占比例約為95%?，F(xiàn)已成為繼腫瘤、心血管疾病之后，威脅人類健康的第三大殺手。

我國與日本民間很早就有利用粗老茶葉治療Ⅱ型糖尿病的傳統(tǒng)。很多流行病學(xué)調(diào)查表明，喝茶能降低患Ⅱ型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)［2-4］。多項(xiàng)研究報(bào)道綠茶中茶多糖具有降血糖功效，綠茶可以降低糖尿病小鼠血糖水平，促進(jìn)健康人體葡萄糖代謝，同時(shí)也有發(fā)現(xiàn)，綠茶對糖尿病起到防治作用［5-6］。Polychronopoulos等［7］也指出，飲茶能有效降低血糖水平，應(yīng)該成為保障公眾健康的一個(gè)重要策略。茶葉界學(xué)者普遍認(rèn)為，茶葉中兒茶素類物質(zhì)與抗氧化相關(guān)，而多糖類物質(zhì)能起到調(diào)節(jié)血糖的作用［8-9］。近年來研究結(jié)果還表明，糖脂代謝與胰島素抵抗密切相關(guān)，脂質(zhì)分布和糖代謝的異常，可以導(dǎo)致機(jī)體更為顯著的胰島素抵抗和高胰島素血癥，進(jìn)而出現(xiàn)更嚴(yán)重的糖脂代謝紊亂［10-11］。

茯磚茶主產(chǎn)于中國湖南省，是西北邊疆人民的生活必需品，其特殊之處在于加工過程中獨(dú)有的“發(fā)花”工序產(chǎn)生大量金黃色微生物，俗稱“金花”［12］。近年來，茯磚茶由于其眾多的生理功能，特別是降脂減肥作用，而受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注［13］。經(jīng)前期研究發(fā)現(xiàn)，茯磚茶能顯著改善高脂高糖飲食所致的糖脂代謝紊亂、抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累從而達(dá)到降脂減肥的效果［14］。因此，本研究擬通過高脂高糖飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素（Streptozotocin， STZ）注射誘導(dǎo)建立Ⅱ型糖尿病動(dòng)物模型，用茯磚茶飼喂模型小鼠，探明茯磚茶改善Ⅱ型糖尿病的功效及其機(jī)理，以期為開發(fā)具有預(yù)防糖尿病功能性茶產(chǎn)品提供科學(xué)理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)條件

Babl/c小鼠（SPF級(jí)），雄性50只，體質(zhì)量 13～14 g，3～5周齡，購自長沙斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：CXK（湘）2011-003。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)委員會(huì)批準(zhǔn)，飼養(yǎng)于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)茶葉研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。動(dòng)物房室溫23～25℃，濕度 40%～70%，光照時(shí)間 12 h晝夜交替，保證環(huán)境通風(fēng)，飲用水壺等均經(jīng)過消毒處理，定時(shí)添加飼料和水，每日更換1次墊料。

1.2 主要試劑和藥品

茯磚茶（2007年金湘益，每片800 g，益陽茶廠）、血糖試紙（活力Ⅱ型，羅氏公司）、鏈脲佐菌素（STZ，Sigma公司）；SYBR?Premix Ex Taq?試劑盒（日本TaKaRa公司）、Reverse transcription quantitative real-time PCR（qRT-PCR）引物（中國上海生物工程技術(shù)有限公司）。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

血糖儀（活力Ⅱ型，羅氏公司）冷凍干燥機(jī)（Modulyod-230型，美國熱電公司），旋轉(zhuǎn)濃縮儀（BUCHI R-200，瑞士BUCHI R公司），紫外分光光度計(jì)（日本 Shimadzu 公司，UV-2550），冷凍離心機(jī)（MIKRO 22R 型臺(tái)式，德 國Hettich公 司 ），Thermo Scientific Varioskan Flash酶標(biāo)儀（美國Thermo 公司），Leica DM2000生物顯微鏡（德國徠卡公司），熒光定量 PCR儀（德國 Qiagen公司，Rotor-Gene Q 6200）電子天平，F(xiàn)LUKOF6/10超細(xì)勻漿機(jī)，水浴鍋，解剖器械等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 茯磚茶水提物的制備

將茶磚粉碎，按1∶10茶水比沸水中浸提30 min，稍微冷卻，用雙層濾布過濾，離心，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至一定濃度，于-20℃預(yù)冷12 h后真空冷凍干燥24 h。收集干粉，密封包裝，-80℃保存待用。

1.4.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

小鼠于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)選擇分為基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)組（Pretreatment normal control， PNC，10只）和高脂高糖飼料喂養(yǎng)組（Pretreatment model control，PMC，40只），各飼喂4周后所有小鼠隔夜禁食不禁水，PMC組腹腔注射100 mg·kg-1STZ溶液，PNC組腹腔注射等體積緩沖液。72 h后，禁食不禁水，尾部靜脈取血，測定空腹血糖值（Fasting blood glucose， FBG）。FBG大于 11.1 mmol·L-1的小鼠，一周后再次測定FBG，若FBG大于11.1 mmol·L-1，則表明Ⅱ型糖尿病小鼠模型建立成功。FBG小于 11.1 mmol·L-1的小鼠補(bǔ)注100 mg·kg-1STZ溶液，一周后再次測定 FBG，直到 FBG大于 11.1 mmol·L-1。將 PNC組隨機(jī)選取 8只小鼠作為空白對照組（NC組），Ⅱ型糖尿病模型建立成功的小鼠隨機(jī)分為4組：模型組（MC組）、低劑量茯茶組（LFT組）、中劑量茯茶組（MFT組）、高劑量茯茶組（HFT組），每組 8只，繼續(xù)飼喂 4周并給予茯茶干預(yù)。每天灌胃 1次，具體條件見表1。

表1 分組及給藥劑量Table 1 Grouping and dosage

1.4.3 指標(biāo)測定

（1）日常觀察指標(biāo)：實(shí)驗(yàn)期間觀察動(dòng)物精神、活動(dòng)、毛色，及尿量糞便變化情況［15-16］；每天定時(shí)測定每組動(dòng)物攝食量和攝水量，每3 d測定體重。

（2）空腹血糖值（Fasting blood glucose，F(xiàn)BG）測定：分組前及給藥后每7 d對各小鼠采取尾靜脈取血測FBG。所有動(dòng)物均禁食16 h（禁食不禁水），尾靜脈取血 10 μL，使用羅氏血糖試紙和羅氏血糖儀測定。

（3）糖耐量（Oral glucose tolerance test，OGTT）的測定：灌胃3周后，各組動(dòng)物禁食16 h（禁食不禁水），尾靜脈取血10 μL，測定給葡萄糖前（即 0 h）血糖值，然后各組動(dòng)物喂飼 2.5 g·kg-1葡萄糖，分別測定各組在給予葡萄糖后 0.5、1.0、1.5、2.0 h的血糖值，并計(jì)算血糖曲線下面積（Area under the curve of blood glucose， AUC）［17］。

（4）血糖曲線下面積：AUC=［0.5×（0 h血糖值+0.5 h血糖值）×0.5］+［0.5×（0.5 h血糖值+1.0 h血糖值）×0.5］+［0.5×（1.0 h血糖值+1.5 h血糖值）×0.5］+［0.5×（1.5 h血糖值+2.0 h血糖值）×0.5］

（5）胰島素及胰島素敏感指數(shù)（Insulin sensitivity index， ISI）測定：連續(xù)給藥28 d后，各組動(dòng)物禁食 16 h（禁食不禁水），摘取眼球取血，將血液靜置30 min后，3 500 r·min-1，離心10 min，取上清液。應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA），嚴(yán)格按照試劑盒說明書（武漢華美生物工程有限公司）步驟測定胰島素含量。根據(jù) HomaModel，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（IRI）及胰島素敏感指數(shù)（ISI）指標(biāo)，公式為：IRI=［空腹血清胰島素（FINS）×空腹血糖（FBG）］÷22.5，ISI=ln［1/（空腹血清胰島素（FINS）×空腹血糖（FBG））］［18-19］。

（6）胰腺組織病理切片：將小鼠處死解剖后，取小鼠胰腺組織置于4%中性福爾馬林液中固定，送至湖南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心進(jìn)行胰腺組織HE染色切片制作，通過脫水透明、浸蠟包埋、切片與貼片、脫蠟染色、脫水透明、封蠟等步驟，切片制作好后取回進(jìn)行病理學(xué)觀察［20-21］。

（7）實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測（qRT-PCR）：用 Trizol提取肝臟組織中總 RNA（按 Trizol說明書操作）。按試劑盒方法（SYBR?Premix Ex Taq?， Takara）進(jìn)行RT-PCR。分別檢測肝臟組織中AMPK-α、PPAR-α、PPAR-γ、GLUT2、GLUT4 mRNA變化情況。以β-actin為內(nèi)參，NC組為對照組。糖代謝相關(guān)基因引物設(shè)計(jì)采用Primers 5軟件及參考文獻(xiàn)進(jìn)行［22-26］，引物序列見表2。RT-PCR反應(yīng)條件：預(yù)變性95℃10 min，變性95℃ 10 s。退火58℃ 15 s，延伸72℃ 20 s，40個(gè)循環(huán)。計(jì)算每一樣品與內(nèi)參物的相對含量［27］。

1.4.4 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以±SD表示，One-Way ANOVA（單因素方差分析）檢驗(yàn)差異顯著性（與模型組比，*P＜0.05，**P＜0.01；與對照比，#P＜0.05，##P＜0.01，n=8）。

表2 糖脂代謝相關(guān)引物Table 2 Primers of glucose and lipid metabolism genes

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂高糖飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素誘導(dǎo)Ⅱ型

糖尿病小鼠模型的建立

如圖1所示，腹腔注射100 mg·kg-1STZ溶液72 h后，PNC組FBG相對穩(wěn)定，PMC 組 FBG則明顯升高，且超過造模閾值 11.1 mmol·L-1。注射7 d后用相同方法測定兩組小鼠空腹血糖值，發(fā)現(xiàn)PNC組FBG無明顯變化，PMC組FBG略有下降且趨于穩(wěn)定，并超過造模閾值11.1 mmol·L-1，說明Ⅱ型糖尿病小鼠模型造模成功。

2.2 對小鼠生活狀態(tài)的影響

造模成功后，各處理組與NC組相比，小鼠體毛稀疏無光澤且不柔順，行動(dòng)遲緩，排尿量大，墊料濕潤，且腿部和尾部出現(xiàn)了不同程度潰爛，體重也在逐步減輕。經(jīng)4周茯茶干預(yù)后，MFT組、HFT組與灌胃初期相比，體毛慢慢變茂密柔順，腿部和尾部潰爛程度也較MC組有所改善，排尿量減少，墊料開始變干燥。如圖2所示，MC組、LFT組、MFT組、HFT組和NC組間攝食量無明顯變化。但MC組、LFT組、MFT組、HFT組飲水量顯著高于NC組（P＜0.01），且經(jīng)茯茶干預(yù)后，與MC組相比，LFT組、MFT組飲水量顯著降低（P＜0.05），HFT組飲水量極顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，Ⅱ型糖尿病“三多一少”典型癥狀有一定程度的好轉(zhuǎn)。

圖1 糖尿病小鼠造模期間空腹血糖值的變化Fig. 1 Changes in the fasting blood glucose in diabetic mice

圖2 茯磚茶對糖尿病小鼠攝食量及飲水量的影響Fig. 2 Effects of Fuzhuan brick tea water extract on food intake and drinking amount of diabetic mice

2.3 對小鼠體重和肝體比的影響

表3顯示，經(jīng)4周飼養(yǎng)，NC組小鼠體重略有增加，MC組、LFT組、MFT組和HFT組體重逐漸降低。但經(jīng)茯茶干預(yù)的LFT組、MFT組和HFT組與MC組比較，小鼠從第2周開始體重降幅度逐漸減小，但無顯著性差異（P＞0.05），表明茯茶處理對Ⅱ型糖尿病所致體重降低有一定抑制作用。小鼠肝體比是指肝臟質(zhì)量與體質(zhì)量的比值，是判斷小鼠肝臟是否病變的重要指標(biāo)。如圖3所示，MC組、LFT組、MFT組、HFT組肝體比顯著高于NC組（P＜0.05）。經(jīng)茯茶干預(yù)后，LFT組、MFT組、HFT組肝體比與MC組相比有一定程度降低，但均無顯著性差異（P＞0.05）。

表3 茯磚茶對糖尿病小鼠體質(zhì)量的影響Table 3 Effects of Fuzhuan brick tea water extract on weight body of diabetic mice

注：同一列中，與空白對照組比較，##：P＜0.01。

Note: In the same column， ##: P＜0.01， compared with basic control group.

圖3 茯磚茶對糖尿病小鼠肝體比的影響Fig. 3 Effects of Fuzhuan brick tea water extract on the ratios of liver to body weight in diabetic mice

2.4 對小鼠FBG和OGTT的影響

如圖4所示，經(jīng)高脂高糖和STZ誘導(dǎo)后，MC組、LFT組、MFT組和HFT組的FBG遠(yuǎn)高于NC組。茯茶干預(yù)2周（14 d）后，MFT組和HFT組FBG與MC組相比呈下降趨勢，但無顯著性差異（P＞0.05）；茯茶干預(yù)4周（28 d）后，MFT組和HFT組FBG與MC組相比顯著降低（P＜0.01），且呈一定量效關(guān)系。此結(jié)果表明，中高劑量茯茶水提物對FBG升高有著顯著抑制作用。

OGTT是檢查集體血糖調(diào)節(jié)機(jī)能的方法。如圖5所示，MC組、LFT組、MFT組、HFT組小鼠AUC值均有大幅度升高，且與NC組有極顯著差異（P＜0.01）。LFT組AUC值略低于MC組，兩組間無顯著差異（P＞0.05），MFT組、HFT組AUC值與MC組相比顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果表明中高劑量茯茶水提物可以顯著抑制葡萄糖負(fù)荷后血糖值的升高。

圖4 茯磚茶對糖尿病小鼠試驗(yàn)期間空腹血糖值的影響Fig. 4 Effect of Fuzhuan brick tea water extract on the fasting blood glucose in diabetic mice

圖5 各組糖耐量實(shí)驗(yàn)AUC值比較Fig. 5 The AUC results of each group in tolerance test

2.5 對小鼠胰島素敏感指數(shù)的影響

茯磚茶對糖尿病小鼠胰島素抵抗指數(shù)（IRI）及胰島素敏感指數(shù)（ISI）的影響如表4所示。經(jīng)高脂高糖飼料聯(lián)合STZ誘導(dǎo)后，MC組與NC組相比，IRI水平極顯著升高（P＜0.01），而ISI水平極顯著降低（P＜0.01）。經(jīng)茯茶干預(yù)后，MFT組、HFT組與MC組相比，IRI水平權(quán)顯著降低（P＜0.01），而ISI水平極顯著升高（P＜0.01）。

表4 茯磚茶對糖尿病小鼠IRI及ISI的影響Table 4 Effects of Fuzhuan brick tea water extract on IRI and ISI in diabetic mice

2.6 對小鼠胰腺組織形態(tài)的影響

形態(tài)學(xué)觀察表明，NC組（圖 6-1）胰島顯示正常組織學(xué)特性，胰島以圓形或橢圓形細(xì)胞團(tuán)居多，分散在胰腺腺泡之間，界限清楚，數(shù)量較多；胰島內(nèi)胰腺細(xì)胞數(shù)量多，排列緊密，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核多為圓形，核分布和大小比較均勻。MC組（圖 6-2）胰島數(shù)量明顯減少，分布比較稀疏且形態(tài)不規(guī)則，體積相應(yīng)減小，胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)量不均勻，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，有的細(xì)胞數(shù)量過于緊密，并呈各種不規(guī)則形狀，染色過深。LFT組（圖6-3）與模型組類似，MFT組（圖6-4）和HFT組（圖6-5、6-6）胰島形狀有初步好轉(zhuǎn)，呈有一定規(guī)則圖形，且胰腺細(xì)胞分布較為均勻緊密。說明MFT、HFT可以一定程度上修復(fù)胰腺細(xì)胞損傷，恢復(fù)其組織形態(tài)，由于是運(yùn)用STZ造模，化學(xué)損了試驗(yàn)小鼠胰腺組織，茯茶水提物還沒有起到明顯修復(fù)或者治愈胰腺損傷的作用。

圖6 茯磚茶對糖尿病小鼠胰腺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Fig. 6 Effect of Fuzhuan brick tea water extract on the pancreatic tissue morphology in diabetic mice

圖7 茯磚茶對糖尿病小鼠肝臟中糖代謝相關(guān)基因相對表達(dá)量的影響Fig. 7 Effect of relative expressions of the genes involved in glucose metabolism in the livers of diabetic mice

2.7 對小鼠肝臟糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，MC組與NC組相比，PPAR-γ和 PPAR-α基因均顯著下調(diào)表達(dá)（PPAR-γ：0.433，P＜0.01；PPAR-α：0.434，P＜0.01），AMPK-α、GLUT2和GLUT4基因也有一定程度下調(diào)表達(dá)（AMPK-α：0.971，GLUT2：0.822，GLUT4：0.790），但無顯著性差異（P＞0.05）。經(jīng)茯茶干預(yù)后，分析組間各基因表達(dá)比值，LFT組與 MC組相比，AMPK-α、PPAR-α、GLUT2和GLUT4基因均有一定程度上調(diào)表達(dá)（AMPK-α：1.438，PPAR-α：1.365，GLUT2：1.105，GLUT4：1.380），但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；PPAR-γ基因有一定程度下調(diào)表達(dá)（0.882），但無顯著性差異（P＞0.05）。MFT組與MC組相比，PPAR-α和GLUT2基因顯著上調(diào)表達(dá)（PPAR-α：1.877，P＜0.05；GLUT2：1.929，P＜0.01），AMPK-α、PPAR-γ和GLUT4基因也有一定程度上調(diào)表達(dá)（AMPK-α：1.667， PPAR-γ：1.016，GLUT4：1.785），但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。HFT組與MC組相比，PPAR-α、GLUT2和 GLUT4基因顯著上調(diào)表達(dá)（PPAR-α：1.886，P＜0.05；GLUT2：1.678，P＜0.05；GLUT4：2.430，P＜0.05），而AMPK-α和PPAR-γ基因有一定程度上調(diào)表達(dá)（AMPK-α：1.586，PPAR-γ：1.583），但無顯著性差異（P＞0.05）（圖7）。

3 討論

茶葉中茶多酚、茶多糖、茶色素等是抑制血糖升高的主要活性成分［28-30］。茯磚茶是經(jīng)過復(fù)雜發(fā)酵工藝而制成的后發(fā)酵茶，發(fā)酵后茯磚茶茶褐素含量增加。與其他茶類相比，茯茶有特殊的“發(fā)花”工序，金花是成就茯磚茶獨(dú)特品質(zhì)的主要因子，因此它具有獨(dú)特品質(zhì)特征及功效，但其相關(guān)功能研究目前報(bào)道尚少［13， 31］。降血糖、降血脂是茯磚茶最為突出的功效之一，其作用機(jī)制也是眾多學(xué)者的研究重點(diǎn)。

腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是細(xì)胞重要的能量感受器，在調(diào)節(jié)細(xì)胞和機(jī)體水平能量平衡中具有重要作用。AMPK在調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝平衡方面起總開關(guān)作用，AMPK活化能增強(qiáng)葡萄糖攝取、脂肪酸氧化作用和胰島素敏感性，從而減少葡萄糖、膽固醇、甘油三酯產(chǎn)生［32］。AMPK促使周緣組織葡萄糖攝取，有兩種方式：一是誘導(dǎo)GLUT4向漿膜轉(zhuǎn)移，二是通過磷酸化轉(zhuǎn)錄因子，開啟GLUT4基因表達(dá)。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（GLUs）是細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖的載體，其中GLUT2和GLUT4尤為重要。GLUT2是胰島β細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在血糖濃度升高時(shí)，促進(jìn)GLUT2對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)功能，繼而刺激胰島素釋放。胰島素刺激GLUT4表達(dá)及GLUT4分子轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜上，促進(jìn)葡萄糖分子轉(zhuǎn)運(yùn)過程［33］。PPAR-γ是一類核激素受體，在調(diào)節(jié)糖脂代謝，減輕炎癥進(jìn)而改善胰島素抵抗方面起著重要作用。在體內(nèi)各組織中有著不同程度表達(dá)，在體內(nèi)與配體結(jié)合后被激活，通過與目的基因啟動(dòng)子內(nèi)PPRE作用，激活或抑制下游基因轉(zhuǎn)錄［34］。PPAR-γ活化后能促進(jìn)GLUT2、GLUT4表達(dá)，PPAR-γ被激活后能夠促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化，增加小脂肪細(xì)胞數(shù)量，小脂肪細(xì)胞對胰島素敏感性更強(qiáng)，因此增強(qiáng)脂肪組織對胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗，同時(shí)PPAR激動(dòng)劑也能夠刺激脂肪組織和骨骼肌中游離脂肪酸和葡萄糖代謝。本研究中，茯茶處理后GLUT2和GLUT4基因顯著上調(diào)表達(dá)，而AMPK-α和PPAR-γ基因雖有一定程度上調(diào)表達(dá)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明茯茶可能是通過增強(qiáng)GLUs類基因表達(dá)，從而促進(jìn)葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)及胰島素信號(hào)傳遞。PPAR-α主要存在脂代謝密切相關(guān)組織中，可以促進(jìn)肝臟脂代謝［35］。茯茶處理后MFT組和HFT組小鼠肝臟PPAR-α基因顯著上調(diào)表達(dá)，通過促進(jìn)肝臟內(nèi)脂代謝，改善由于脂中毒引起的胰島素抵抗，提高周緣組織對胰島素的敏感性。因此我們認(rèn)為茯茶水提物通過增強(qiáng) PPAR相關(guān)基因的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)胰島素抵抗及促進(jìn)體內(nèi)能量消耗和脂肪分解。

綜上所述，茯茶水提取物干預(yù)能顯著改善糖尿病小鼠多食、多飲、多尿、消瘦癥狀，降低空腹血糖濃度，提高機(jī)體對糖負(fù)荷的耐受性，提升胰島素和胰島素敏感水平，降低胰島素抵抗水平。同時(shí)，qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，茯茶水提物通過增強(qiáng)PPAR-α、GLUT2和GLUT4基因表達(dá)，促進(jìn)了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝，促進(jìn)胰島素釋放，提高對胰島素的敏感性，從而改善糖尿病小鼠體內(nèi)糖代謝紊亂。

參考文獻(xiàn)

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中圖分類號(hào)：TS272.5+4；R587.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-369X（2016）03-250-11

收稿日期：2015-11-17

修訂日期：2016-01-25

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（31471706）、湖南省自然科學(xué)基金（13JJ4067）、湖南省科技項(xiàng)目（15C0670）、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才科學(xué)基金（13YJ13）。

作者簡介：黃頌，男，碩士研究生，主要從事茶葉功能成分化學(xué)研究。*通訊作者：liqinvip@126.com

Intervention Effects of Fuzhuan Brick Tea Water Extract on Glucose Metabolism Disorder in a Mouse Model of Type Ⅱ Diabetes Mellitus

HUANG Song1， 2， LIU Zhonghua1， 2， 3， HUANG Jian′an1， 3， YANG Heng1， 2， LI Qin1， 2， 3*
1. Key Laboratory of Tea Science of Ministry of Education， Hunan Agricultural University， Changsha 410128， China；2. National Research Center of Engineering Technology for Utilization of Functional Ingredients from Botanicals， Changsha 410128， China；3. Hunan Co-Innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients， Changsha 410128， China

Abstract:In this study， streptozotocin （STZ） combined with a high-fat and high-sugar diet was used to generate a mouse model of type 2 diabetes mellitus. The aim of this study was to investigate the hypoglycemic effects of Fuzhuan brick tea water extract （FTEs） on T2DM-Mice. Results showed that FTEs could obviously alleviate weight loss， polyuria， polydipsia， and polyphagia， reduce fasting plasma glucose， increase sugar tolerance， enhance insulin concentrations and insulin sensitivity and decrease insulin resistance in the diabetic mice. Moreover， RT-qPCR analysis showed that FTEs promoted glucose transport and liver lipid metabolism， and improved the glucose metabolism in the diabetic mice by increasing the expression of PPAR-α， GLUT2， and GLUT4. Therefore， it can be concluded that FTEs could significantly improve glucose metabolism disorder symptom of T2DM-Mice by a dose-dependent manner.

Keywords:Fuzhuan brick tea water extract， type 2 diabetes mellitus， hypoglycemic， glucose metabolism