胡楚楚　鄭國(guó)鋼（浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江 杭州310052）

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復(fù)方左炔諾孕酮片溶出度測(cè)定方法研究

胡楚楚鄭國(guó)鋼
（浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江 杭州310052）

【摘要】目的：建立復(fù)方左炔諾孕酮片的溶出度測(cè)定方法。方法：采用槳法，以0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶液500 mL為溶劑，轉(zhuǎn)速為75 r/min，30 min時(shí)取樣。采用高效液相色譜法測(cè)定，C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）為固定相，以乙腈-水（60∶40）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min。左炔諾孕酮采用紫外檢測(cè)器檢測(cè)，波長(zhǎng)為247 nm；炔雌醇采用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)為285 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 310 nm。結(jié)果：左炔諾孕酮在 0.059 88～0.359 3 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；炔雌醇在0.012 19～ 0.073 15 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。左炔諾孕酮平均回收率為99.2%，炔雌醇平均回收率為99.0%。結(jié)論：建立了測(cè)定復(fù)方左炔諾孕酮片溶出度的新方法，此法方法重復(fù)性好，所得結(jié)果穩(wěn)定可靠，可有效控制藥品的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；復(fù)方左炔諾孕酮片；溶出度

復(fù)方左炔諾孕酮片為左炔諾孕酮和炔雌醇組成的復(fù)方制劑，為第2代口服避孕藥，目前在育齡婦女中應(yīng)用廣泛。已有文獻(xiàn)表明復(fù)方中兩種成分配伍，既增強(qiáng)避孕作用，又減少了藥品不良反應(yīng)［1］。該品種現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收錄于《中國(guó)藥典》（2010年版）二部［2］，溶出度是其質(zhì)量控制的一個(gè)重要指標(biāo)［3-4］。在溶出度方法中，溶出介質(zhì)用到的聚山梨酯80溶液質(zhì)量很不穩(wěn)定，進(jìn)而嚴(yán)重影響測(cè)定結(jié)果。在起草世界衛(wèi)生組織（WHO）的《國(guó)際藥典》過(guò)程中，根據(jù)專家意見(jiàn)，對(duì)溶出介質(zhì)進(jìn)行了重新考察，并對(duì)整個(gè)溶出度方法學(xué)進(jìn)行了重新研究。本研究建立了測(cè)定復(fù)方左炔諾孕酮片溶出度的新方法，此方法重復(fù)性好，所得結(jié)果穩(wěn)定可靠，可有效地控制藥品的質(zhì)量。

1　儀器與試藥

RCZ-8B溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；高效液相色譜儀（島津 LC-20AT液相色譜儀）；C18色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）（Agilent公司）；復(fù)方左炔諾孕酮片（2個(gè)廠家共6批樣品）；左炔諾孕酮對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100076-201205）和炔雌醇對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100052-200609）；乙腈（色譜純，Merck公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1溶出介質(zhì)的選擇

取本品6片，采用槳法，轉(zhuǎn)速75 r/min，取溶劑①：0.000 5%聚山梨酯 80溶液；溶劑②：0.1% SDS的0.1 mol/L HCl溶液，分別在5，10，20，30，45，60 min取樣并及時(shí)補(bǔ)樣，考察溶出曲線，溶出介質(zhì)體積為 500 mL，依法操作，取溶液適量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2溶出度對(duì)照品溶液的制備

精密稱取左炔諾孕酮對(duì)照品和炔雌醇對(duì)照品適量，加乙腈-溶出介質(zhì)（1∶1）溶解并稀釋至每1 mL含左炔諾孕酮0.3 μg和炔雌醇0.06 μg的溶液。

2.3溶出度樣品測(cè)定方法

采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定。C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）為固定相，以乙腈-水（60∶40）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min。左炔諾孕酮采用紫外檢測(cè)器測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)為247 nm；炔雌醇采用熒光檢測(cè)器測(cè)定，激發(fā)波長(zhǎng)為285 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為310 nm。檢測(cè)器串聯(lián)。取上述供試品溶液和對(duì)照品溶液各100 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.4溶出曲線測(cè)定結(jié)果

取一批樣品（廠家A，批號(hào)：102A），分別在兩種溶出介質(zhì)中測(cè)定，以每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6個(gè)溶出杯平均溶出量為總坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制溶出曲線。見(jiàn)圖1～2。

圖1　溶出曲線（0.1%SDS的0.1mol/L HCl為溶出介質(zhì)，廠家A，批號(hào)102A）

圖2　溶出曲線（0.000 5%聚山梨酯 80溶液）

從圖中可以看到，采用0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶出介質(zhì)，在30 min時(shí)左炔諾孕酮溶出量已有94%，炔雌醇溶出量達(dá)到最高；溶出曲線的趨勢(shì)與采用《中國(guó)藥典》方法規(guī)定的溶出介質(zhì)（0.000 5%聚山梨酯 80溶液相比更加平穩(wěn)上升，溶出量比《中國(guó)藥典》方法略高，因此可以采用 0.1%SDS 的0.1 mol/L HCl溶出介質(zhì)，可以避免使用質(zhì)量均一性不好的聚山梨酯80溶液。溶出曲線上升平緩，對(duì)不同質(zhì)量樣品的區(qū)分度較好。取樣時(shí)間設(shè)置在拐點(diǎn)后10 min，即30 min較合理。

采用0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶出介質(zhì)，另取廠家B一批樣品進(jìn)行溶出曲線試驗(yàn)，溶出曲線上升平緩，趨勢(shì)與圖1較接近。樣品在20 min時(shí)達(dá)到平臺(tái)期。見(jiàn)圖3。

圖3　溶出曲線（0.1%SDS的0.1 mol/L HCl為溶出介質(zhì)，廠家B，批號(hào)LEE100401）

2.5溶出度方法的確定

因此制定溶出度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)為“照溶出度測(cè)定法槳法，轉(zhuǎn)速75 r/min，以0.1%SDS的0.1 mol/L HCl為溶出介質(zhì)，體積為500 mL，依法操作，經(jīng)30 min時(shí)，取溶液適量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液”。

3　溶出度方法學(xué)試驗(yàn)

3.1線性關(guān)系試驗(yàn)

分別精密稱取左炔諾孕酮對(duì)照品和炔雌醇對(duì)照品，用乙腈溶解制成每1 mL含左炔諾孕酮0.748 5 mg和炔雌醇0.152 4 mg的溶液，作為儲(chǔ)備對(duì)照品溶液，用乙腈-溶出介質(zhì)（1∶1）稀釋至不同濃度，照“2.3”方法測(cè)定。以面積（A）和對(duì)照品濃度（C）線性回歸，左炔諾孕酮回歸方程為：

A=305 263C＋ 589（r=0.999 5），

線性范圍濃度為：0.05 988～ 0.3 593 μg/mL，線性關(guān)系良好。炔雌醇回歸方程為：

A=33 855 264C＋ 1 458（r=0.999 2），

線性范圍濃度為：0.01 219～0.07 315 μg/mL，線性關(guān)系良好。

3.2回收率試驗(yàn)

取“3.1”項(xiàng)下左炔諾孕酮對(duì)照品和炔雌醇儲(chǔ)備對(duì)照品溶液稀釋5倍，作為回收率對(duì)照品溶液，按處方量的80%，100%，120%加入回收率對(duì)照品溶液，并按處方加入輔料，按照“2.5”項(xiàng)下方法進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，取樣后照“2.3”測(cè)定溶出度，計(jì)算回收率。測(cè)得左炔諾孕酮平均回收率為99.2%，炔雌醇平均回收率為99.0%。

3.3輔料干擾試驗(yàn)

處方量加入輔料，按照“2.5項(xiàng)”下方法進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，取樣后照“2.3”測(cè)定，輔料不出峰，不干擾測(cè)定。

3.4樣品測(cè)定

取兩個(gè)廠家6批樣品，測(cè)定。典型色譜圖如圖4～ 5，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

圖4　左炔諾孕酮溶出度圖譜（UV 247 nm）

圖5　炔雌醇溶出度圖譜（FLD）

表1　樣品溶出度測(cè)定結(jié)果

4　討論

4.1溶劑的選擇

在選擇溶劑種類的時(shí)候，之所以采用 0.1% SDS的0.1 mol/L HCl溶液，是因?yàn)樽笕仓Z孕酮和炔雌醇水溶性均較差，因此需要加入適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┲?。且《?guó)際藥典》中左炔諾孕酮片的溶出介質(zhì)是0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶液，為了保持系列品種方法的一致性，本文優(yōu)先考察了SDS 的0.1 mol/L HCl溶液。比較選擇了0.1%SDS和0.2%SDS兩個(gè)濃度，由于采用0.2%SDS的0.1 mol/L HCl溶液時(shí)，在10 min就到達(dá)溶出平臺(tái)，時(shí)間太快，因此最終確定了0.1%SDS的0.1 mol/L HCl溶液。

4.2進(jìn)樣量選擇

液相色譜測(cè)定溶出度樣品時(shí)，采用 20，50，100 μL進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣100 μL峰面積較大，且峰無(wú)展寬，因此進(jìn)樣量確定為100 μL。

4.3色譜柱選擇

考察 Agilent、Dikma、菲羅門三個(gè)品牌的 C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），均適用。

4.4藥品選擇

復(fù)方左炔諾孕酮片溶出度測(cè)定時(shí)，發(fā)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)藥品和原研藥品溶出度無(wú)明顯差異，一定程度上說(shuō)明了國(guó)產(chǎn)藥品質(zhì)量的可靠性。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Endrikat J，Hite R，Bannemerschult R，et al.Multicenter，comparative study of cycle control，efficacy and tolerability of two low-dose oral contraceptives containing 20 μg ethinylestradiol/ 100 μg levonorgestrel and 20 μg ethinylestradiol/500 μg norethisterone［J］.Contraception，2001，64（1）：3-10.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：576-577.

［3］ 李芳，李瑛，劉建平，等.復(fù)方左炔諾孕酮片的體外溶出度比較［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2006，6（6）：417-420.

［4］施捷，車寶泉，周立春，等.左炔諾孕酮片溶出度方法研究及制劑學(xué)評(píng)價(jià)［J］.藥物分析雜志，2013，33（4）：689-705.

doi：10.3969/j.issn.1672-5433.2016.02.005

收稿日期：（2015-09-02）

作者簡(jiǎn)介：胡楚楚，女，碩士，主管藥師。研究方向：化學(xué)藥品檢測(cè)、藥物標(biāo)準(zhǔn)制定。通訊作者E-mail:chuchuhu615@ 163.com

Research on Determination Method for Dissolution of Compound Levonorgestrel Tablets

Hu Chuchu，Zheng Guogang（Zhejiang Institute for Food and Drug Control，Zhejiang Hangzhou 310052，China）

ABSTRACTObjective:To develop a method for determination of the dissolution of compound levonorgestrel tablets.Methods:The 0.1 mol/L hydrochloric acid solution containing 0.1%sodium dodecyl sulfate was used as a solvent，and the paddle was rotated at a rate of 75 r/min for 30 min，afterwards samples were taken and determined by HPLC using C18colume（4.6 mm ×250 mm，5 μm）as a stationary phase and acetonitrile-water （60∶40）as a mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min.An ultraviolet spectrophotometer set at a wavelength of 247 nm was used for levonorgestrel analysis，and a spectrofluorometric detector was used for ethinylestradiol analysis at an excitation wavelength of 285 nm and an emission wavelength of 310 nm.Results:The linear ranges of levonorgestrel and ethinylestradiol concentrations were 0.059 88～0.359 3 and 0.012 19～ 0.073 15 μg/mL，while the average recovery rates were 99.2%and 99.0%，respectively.Conclusion:A novel method for determination of dissolution of compound levonorgestrel tablets was developed，which was reproducible，stable and reliable，and might be used for quality control of drugs.

KEY WORDSHPLC；Compound Levonorgestrel Tablets；Dissolution