祁文瑾，陳 卓，許妙玲

復發(fā)性假絲酵母菌外陰陰道病致病菌種分析

祁文瑾1，陳 卓1，許妙玲2

目的 對復發(fā)性假絲酵母菌性外陰陰道病（RVVC）患者不同發(fā)病時期致病菌種進行分析，為RVVC的有效治療提供病原學研究資料。方法 以科瑪嘉顯色培養(yǎng)基和VITEK 2酵母菌鑒定卡鑒定妊娠與非妊娠RVVC患者致病菌種差異，同期假絲酵母菌性外陰陰道?。╒VC）患者為對照。結果 非孕RVVC復發(fā)患者及妊娠VVC患者致病非白假絲酵母菌檢出率均顯著高于非孕VVC患者（P＜0.05）；妊娠RVVC復發(fā)患者中白假絲酵母菌比例雖較妊娠RVVC初發(fā)和妊娠VVC患者有所降低，但三組間白假絲酵母菌構成比差異無統(tǒng)計學意義。結論 假絲酵母菌的復發(fā)和再感染均在RVVC的發(fā)生中發(fā)揮作用，妊娠狀態(tài)可能增加陰道非白假絲酵母菌感染幾率。

假絲酵母菌病；外陰陰道；妊娠；病原學

網絡出版時間：2016-3-8 8：29：02 網絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160308.0829.044.htm l

假絲酵母菌性外陰陰道?。╲ulvovaginal candidiasis，VVC）是一種常見的婦產科感染性疾病，大約5%～8.5%的VVC會發(fā)展成為復發(fā)性假絲酵母菌性外陰陰道病（recurrent vulvovaginal candidiasis，RVVC），由于癥狀反復發(fā)作難以根治，RVVC對婦女身心健康有嚴重影響。妊娠婦女的陰道假絲酵母菌感染率高于非孕婦女且更易發(fā)展成為RVVC患者［1］。該研究對妊娠和非妊娠RVVC患者的陰道致病假絲酵母菌進行菌種分析，希望為有效治療RVVC提供新的依據。

1 材料與方法

1.1 病例資料 VVC致病假絲酵母菌311株（非妊娠致病菌194株，妊娠致病菌117株），RVVC致病菌株108株（分別屬于31例非妊娠患者及23例妊娠患者），均來自昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院婦產科門診?；颊呔淮嬖诿庖呦嚓P性疾病及糖尿病等合并癥，無長期抗生素使用史。標本收集前1周禁性交、盆浴、陰道檢查及局部上藥，采集時均以膀胱截石位于陰道后穹窿處收集白帶進行假絲酵母菌鏡檢和培養(yǎng)。

1.2 診斷標準 VVC：有外陰瘙癢、白帶異常呈豆渣樣等典型外陰陰道假絲酵母菌病癥狀，且假絲酵母菌鏡檢、培養(yǎng)陽性；RVVC：1年內有癥狀并經真菌學證實的VVC發(fā)作4次或以上。妊娠與非妊娠患者診斷標準相同。

1.3 研究方法 以生理鹽水法顯微鏡下查見典型假絲酵母菌菌絲為鏡檢陽性者，將其白帶接種于沙堡羅氯霉素培養(yǎng)基（法國生物梅里埃公司），37℃培養(yǎng)24～48 h，有乳酪狀假絲酵母菌菌落生長為培養(yǎng)陽性，挑取單菌落接種于斜面培養(yǎng)基保存，并以科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（法國科瑪嘉公司產，鄭州博賽公司分裝）和VITEK 2酵母菌鑒定卡（法國生物梅里埃公司）進行菌種鑒定。標準株為白假絲酵母菌ATCC90028（美國細胞典藏中心）。

1.4 結果判讀 顯色培養(yǎng)基上綠色、翠綠色菌落為白假絲酵母菌，紫色、淡紫色菌落為光滑假絲酵母菌，粉紅色菌落為克柔假絲酵母菌，藍色、藍灰色菌落為熱帶假絲酵母菌，余者為其它假絲酵母菌。VITEK 2酵母菌鑒定卡鑒定結果由VITEK 2系統(tǒng)自動分析得出，最終鑒定結果以此為準。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件進行分析，菌種數量差異采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 RVVC、VVC患者基本情況 本研究中，非孕患者年齡18～45（27.35±5.63）歲，其中VVC患者194例（致病菌194株），RVVC患者33例，均為首診及同一年內再次獲得復發(fā)期致病菌株者，所有患者年齡、體重等差異無統(tǒng)計學意義。妊娠患者年齡20～43（28.97±3.51）歲，妊娠周數10～40周，其中VVC患者陰道假絲酵母菌117株，RVVC患者21例，同樣為一年內獲得首診和復發(fā)致病菌株患者。因RVVC患者一年內獲得3次發(fā)病期白帶患者例數過少，故本研究只統(tǒng)計了首診和一次復診，共兩次發(fā)病期RVVC患者陰道致病假絲酵母菌的病原情況，分別以初發(fā)和復發(fā)描述。

2.2 RVVC、VVC致病假絲酵母菌菌種構成比分析 194株非孕VVC致病假絲酵母菌中，白假絲酵母菌163株，占84.02%，非白假絲酵母菌31株（15.98%）；妊娠VVC致病假絲酵母菌117株，其中白假絲酵母菌87株，占74.35%，非白假絲酵母菌30株，占25.64%。妊娠VVC患者非白假絲酵母菌構成比顯著高于非孕VVC患者（χ2=4.321，P= 0.04）。非孕RVVC患者33例，初發(fā)時白假絲酵母菌占78.79%、非白假絲酵母菌占21.21%；復發(fā)時白假絲酵母菌比例減少至63.64%，非白假絲酵母菌增加至36.36%，該白假絲酵母、非白假絲酵母菌構成比與非孕VVC患者比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.632，P=0.014）。雖然妊娠 RVVC復發(fā)病例中（21例）白假絲酵母菌比例僅為57.14%，較妊娠RVVC初發(fā)病例的71.43%和妊娠VVC患者74.35%的比例有所降低，但三組間白假絲酵母菌及非白假絲酵母菌構成比差異無統(tǒng)計學意義。不同RVVC、VVC患者陰道白假絲酵母菌與非白假絲酵母菌構成比見表1。

表1 RVVC、VVC患者陰道白假絲酵母菌、非白假絲酵母菌構成比［n（%）］

2.3 RVVC、VVC患者致病非白假絲酵母菌菌種分析 除白假絲酵母菌外，非孕VVC患者共檢出非白假絲酵母菌6種，其中光滑假絲酵母菌12株，占38.71%，其余還有熱帶假絲酵母菌（22.58%）、克柔假絲酵母菌（12.90%），近平滑假絲酵母菌（9.68%）等，RVVC患者初發(fā)時檢出非白假絲酵母菌4種，復發(fā)時檢出非白假絲酵母菌6種，均以光滑假絲酵母菌最為多見。妊娠VVC患者檢出非白假絲酵母菌7種，妊娠RVVC患者初發(fā)、復發(fā)時檢出非白假絲酵母菌種類分別為3種和5種，均以光滑假絲酵母菌最為多見，菌種構成狀況與非孕患者相似。對不同組別患者非白假絲酵母菌檢出菌種數進行統(tǒng)計學分析顯示：除妊娠RVVC復發(fā)患者顯著高于非孕VVC患者（P=0.047）外，其余各組間的非白假絲酵母菌檢出種類比較，差異無統(tǒng)計學意義。見表2。

表2 RVVC、VVC患者陰道非白假絲酵母菌鑒定結果［n（%）］

3 討論

本研究的主要研究對象為RVVC、VVC患者的陰道致病假絲酵母菌，每一類患者均包括妊娠和非妊娠婦女。結果顯示：非孕VVC患者陰道白假絲酵母菌的檢出比例最高，為84.02%，與國內何亮等［2］84.91%的報道接近，略高于國外76.3%的報道［3］，提示對于普通VVC患者，白假絲酵母菌仍為主要的致病菌種。妊娠VVC患者陰道白假絲酵母菌的檢出比例為74.35%，介于報道的60.0% ～80.2%之間［4-5］，提示妊娠期VVC患者同樣以白假絲酵母菌感染為主。由此可見，無論妊娠與否，RVVC和VVC患者的陰道致病假絲酵母菌仍均以白假絲酵母菌最為多見。

本研究顯示：無論妊娠與否，RVVC患者初診病例的陰道白假絲酵母菌檢出比例與VVC患者沒有顯著差異，但當患者陰道假絲酵母菌感染復發(fā)時，白假絲酵母菌感染的比例會明顯下降，非白假絲酵母菌感染的比例會相應增加，提示RVVC復發(fā)時存在新致病假絲酵母菌菌種即非白假絲酵母菌的再感染，而某些非白假絲酵母菌如克柔假絲酵母菌對唑類藥物具有先天的抗性，這可能正是臨床上RVVC患者治療困難的原因之一。本研究中雖然妊娠RVVC復發(fā)患者的陰道白假絲酵母菌檢出比例僅為57.14%，但與妊娠VVC患者、RVVC初發(fā)病例致病菌種構成比差異無統(tǒng)計學意義，因此可以推測：臨床工作中妊娠期RVVC患者治療困難的主要原因可能并不是該類患者對抗真菌藥物的敏感性較低，而是由于妊娠期用藥的限制和妊娠期RVVC更易復發(fā)。但該推論還需更多研究證實。

本研究還顯示：無論妊娠與否，RVVC和VVC患者的陰道致病假絲酵母菌均具有顯著的菌種多樣性，除占絕對多數的白假絲酵母菌外，光滑假絲酵母菌為非白假絲酵母菌中的最常見菌種，與國內外報道［6-7］一致。本研究雖然在30株妊娠VVC致病菌株中共檢出白假絲酵母菌7種，是所有患者組中檢出菌種最多的，但統(tǒng)計學分析僅在妊娠RVVC復發(fā)患者和非孕VVC患者中檢出非白假絲酵母菌菌種數的顯著差異，并未檢出與RVVC患者（無論妊娠與否）、VVC非孕患者的致病菌種多樣性差異，該結果提示：①VVC患者檢出更多致病非白假絲酵母菌菌種的原因主要與本身的樣本量較大有關，VVC和RVVC患者可能并不存在致病非白假絲酵母菌菌種多樣性的差異；②妊娠狀態(tài)可能在一定程度上對RVVC、VVC致病非白假絲酵母菌的菌種多樣性存在影響，這種菌種多樣性可能影響了臨床上妊娠期RVVC的有效治療。

綜上所述，致病假絲酵母菌的復發(fā)和再感染均在RVVC的發(fā)生中發(fā)揮作用，RVVC再感染時非白假絲酵母菌致病幾率增加，且復發(fā)感染的非白假絲酵母菌可能具有更為顯著的菌種多樣性；妊娠狀態(tài)除增加非白假絲酵母菌感染幾率外，還增加了RVVC復發(fā)時不同菌種非白假絲酵母菌感染的幾率，這可能正是臨床上RVVC患者治療困難的重要原因。

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Species analysis of candida isolates came from recurrent vulvovaginal candidiasis patients

QiWenjin1，Chen Zhuo1，Xu Miaoling2
（1Dept of Obstetrics，2Dept of Gynecology，The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming 650032）

Objective To identify the Candida species isolated from recurrent vulvovaginal candidiasis（RVVC）patients，and provide etiologic datum of RVVC.Methods All Candida isolates，including those from vulvovaginal candidiasis（VVC）and RVVC patients，were identified by using CHROMagar chromogenic medium and VITEK2 yeast identification kits.Results The proportions of nonalbicans species from nonpregnant RVVC relapse patients and pregnant VVC patients were both significantly higher than those from nonpregnant VVC patients（P＜0.05）. Among pregnant patients，the percentage of C.albicans isolated from RVVC relapse was couer，but there was no significant difference of C.albicans species percentage between RVVC and VVC patients.Conclusion RVVC may be related to the recurrence of same Candia species and the reinfection of different Candia species.Pregnant women may bemore inclinable to suffer from disorder caused by nonalbicans species.

Candidiasis；vulvovaginal；pregnancy；etiology

R 711.72

A

1000-1492（2016）04-0555-03

2015-12-21接收

國家自然科學基金（編號：81160076）；云南省中青年學術技術帶頭人后備人才培養(yǎng)項目（編號：2012HB029）；云南省醫(yī)學學科帶頭人培養(yǎng)項目（編號：D-201225）

昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院1產科、2婦科，昆明 650032

祁文瑾，女，副教授，碩士生導師，責任作者，E-mail：wenjincookie@163.com