冬棗多糖的分離純化及抗氧化活性研究

潘 瑩，許經(jīng)偉（.濱州職業(yè)學(xué)院生物工程系，山東 濱州 56603；.濱州學(xué)院資源環(huán)境系，山東 濱州 56603）

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冬棗多糖的分離純化及抗氧化活性研究

潘 瑩1，許經(jīng)偉2
（1.濱州職業(yè)學(xué)院生物工程系，山東 濱州 256603；2.濱州學(xué)院資源環(huán)境系，山東 濱州 256603）

摘 要：目的：分離純化冬棗多糖，并研究其組分、結(jié)構(gòu)特征和抗氧化活性。方法：采用水提醇沉、脫蛋白脫色、DEAE-52纖維素柱和Sephadex G-100凝膠色譜柱分離純化冬棗多糖；利用Sephadex G-100凝膠色譜柱進(jìn)行純度鑒定和分子質(zhì)量的測定；通過紫外光譜、紅外光譜、氣相色譜法進(jìn)行了初步結(jié)構(gòu)分析；采用鄰二氮菲法和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）體系對(duì)純化多糖進(jìn)行抗氧化活性的研究。結(jié)果：冬棗多糖經(jīng)DEAE-52分離和Sephadex G-100純化得到2 個(gè)組分DPA和DPB，經(jīng)Sephadex G-100鑒定均為均一組分，DPA和DPB分子質(zhì)量分別為1.04×104、3.02×105D，不含蛋白質(zhì)和核酸，為吡喃型糖苷環(huán)骨架，DPA的單糖組成為阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其物質(zhì)的量比為6.66∶1.00∶6.75∶2.09；DPB的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其物質(zhì)的量比為4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78；DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性，隨著多糖質(zhì)量濃度的增加，其抗氧化活性增強(qiáng)，在質(zhì)量濃度為8 mg/mL時(shí)對(duì)羥自由基清除率分別為28.52%、78.79%，在質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基清除率分別為9.97%、24.54%。結(jié)論：DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性。

關(guān)鍵詞：冬棗；多糖；分離純化；結(jié)構(gòu)鑒定；抗氧化活性

引文格式：

潘瑩， 許經(jīng)偉.冬棗多糖的分離純化及抗氧化活性研究［J］.食品科學(xué)， 2016， 37（13）: 89-94.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613016. http://www.spkx.net.cn

PAN Ying， XU Jingwei.Isolation， purification and antioxidant activity of polysaccharides from Zizyphus jujube cv.Dongzao［J］.Food Science， 2016， 37（13）: 89-94.（in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613016. http://www.spkx.net.cn

冬棗（Zizyphus jujube cv.Dongzao）為鼠李科棗屬植物，為我國特有的一種晚熟鮮食棗。由于冬棗果肉脆嫩多汁，富含人體所需的氨基酸、維生素和微量元素，備受人們喜愛［1］。

近年來植物多糖成了人們研究的熱點(diǎn)，關(guān)于多糖的分離純化［2-4］及活性如抗腫瘤、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等［5］研究較多，有文獻(xiàn)報(bào)道冬棗中糖分含量很高，且隨著成熟度的增加，多糖含量也有所增加［1］，冬棗多糖物質(zhì)已逐漸引起了人們的關(guān)注。

目前國內(nèi)外有關(guān)冬棗的研究報(bào)道，主要集中在棗樹的栽培管理、果實(shí)的貯藏與加工、病蟲害防治等方面［6-7］，本研究在前期提取工藝［8］和脫蛋白工藝［9］優(yōu)化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)冬棗多糖進(jìn)行脫色，采用DEAE-52分離和Sephadex G-100純化得到2 個(gè)組分，并對(duì)其采用凝膠色譜法、紫外光譜法、紅外光譜法、氣相色譜法進(jìn)行了純度鑒定、分子質(zhì)量測定、光譜特征、單糖組成等基本特征研究，還測定純化多糖的抗氧化活性，以期為開發(fā)天然抗氧劑和冬棗多糖的綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

冬棗 山東省沾化縣市售。

DEAE-52、葡聚糖T10、T20、T40、T70、T500、藍(lán)色葡聚糖2000 瑞典Phamacia公司；木瓜蛋白酶（3×107U/g）、L-阿拉伯糖 美國Sigma公司；Sephadex G-100、L-鼠李糖、葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、透析袋（截留分子質(zhì)量3 500 D） 上海藍(lán)季生物科技有限公司；D-半乳糖醛酸 上海源葉生物科技有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH） 上海伊卡生物技術(shù)有限公司；粉末狀活性炭 鞏義市元亨凈水材料廠；LS-850樹脂 陜西藍(lán)深特種樹脂有限公司；AB-8型樹脂、D-101型樹脂 安徽三星樹脂科技有限公司；無水乙醇、丙酮、濃硫酸、苯酚、氯化鈉、氫氧化鈉、鹽酸、三氟乙酸、鹽酸羥胺、乙酸酐、肌醇、磷酸二氫鉀、抗壞血酸（VC）、鄰二氮菲、硫酸亞鐵、過氧化氫（H2O2）均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

FR224CN 電子分析天平 奧豪斯儀器有限公司；ZD-85氣浴恒溫振蕩器 金壇市國旺實(shí)驗(yàn)儀器廠；TH-500A梯度混合器、BT1-100恒流泵、SBS-100-LCD數(shù)控計(jì)滴自動(dòng)部分收集器 上海琪特分析儀器有限公司；TU-1810紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司；RE-52AAA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海嘉鵬科技有限公司；FL9720氣相色譜儀 浙江福立分析儀器有限公司；Nicolet 380傅里葉紅外光譜儀 美國Nicolet公司；MD200氮吹儀 金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 冬棗多糖的提取和脫蛋白

冬棗60 ℃烘干后粉碎過60 目篩，在100 ℃按料液比1∶25（m/V）提取4 h，離心后減壓濃縮，并用無水乙醇于4 ℃靜置過夜，所得沉淀依次用無水乙醇和丙酮洗滌，并經(jīng)真空干燥得冬棗粗多糖。

將冬棗粗多糖配成1 g/100 mL溶液，先在40 ℃條件下用450 U/mL木瓜蛋白酶酶解1.5 h后，采用9 g/100 mL三氯乙酸脫蛋白，再用1 g/100 mL氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0，得脫蛋白冬棗多糖。

1.3.2 冬棗多糖的脫色

脫蛋白冬棗多糖液為橙黃色，在400～780 nm波長范圍內(nèi)掃描發(fā)現(xiàn)其無最大吸收峰，根據(jù)溶液的互補(bǔ)色，選擇在420 nm波長處測定其吸光度，并按公式（1）計(jì)算脫色率。多糖含量采用苯酚-硫酸法［15］測定，其多糖保留率的計(jì)算見公式（2）。

1.3.2.1 活性炭脫色［10］

取步驟1.3.1節(jié)中脫蛋白冬棗多糖液，按照1 g/100 mL的量向其中加入活性炭，于40 ℃、125 r/min條件下恒溫振蕩40 min，過濾，取濾液稀釋后測定多糖脫色率和多糖保留率。

1.3.2.2 樹脂脫色［11］

采用靜態(tài)吸附法，將預(yù)處理好的AB-8、D-101、LS-850樹脂，樹脂與脫蛋白多糖液按0.75∶10（m/V）的比例在125 r/min常溫條件下振蕩2.5 h，過濾后取濾液稀釋定容到25 mL后測定多糖脫色率和多糖保留率。

1.3.3 冬棗多糖的分離和純化

將脫蛋白脫色多糖液配成100 mg/3 mL的溶液，取3 mL上樣于預(yù)先平衡好的DEAE-52纖維素柱（2.6 cm×30 cm），依次用蒸餾水、0.2、0.3、0.5、1 mol/L的NaCl溶液洗脫［12-13］，流速為1 mL/min，以每管5 mL收集洗脫液，用苯酚-硫酸法［14］于490 nm波長處隔管檢測，合并各吸收的洗脫液，經(jīng)減壓濃縮裝入透析袋，在流動(dòng)水和蒸餾水中分別透析48 h和24 h后上樣于Sephadex G-100凝膠色譜柱（1.6 cm×40 cm），用蒸餾水洗脫，以每管1.5 mL收集洗脫液，用苯酚-硫酸法逐管檢測，合并各吸收的洗脫液，經(jīng)減壓濃縮和真空干燥得2 種冬棗純化后多糖，分別記為DPA和DPB。

1.3.4 冬棗多糖組分的純度及分子質(zhì)量

采用凝膠色譜法測定冬棗多糖的純度及分子質(zhì)量［15］。將標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖T10、T20、T40、T70、T500、冬棗多糖DPA和DPB分別上樣于Sephadex G-100凝膠色譜柱，用蒸餾水洗脫，流速為0.3 mL/min，以每管1.5 mL收集洗脫液，用苯酚-硫酸法逐管檢測，記錄不同相對(duì)分子質(zhì)量的多糖經(jīng)過凝膠柱的洗脫體積（Ve）和用藍(lán)色葡聚糖-2000上柱求得柱的外水體積（V0），以Ve/V0為縱坐標(biāo)，lgMw為橫坐標(biāo)，計(jì)算曲線方程，并繪制冬棗多糖洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線判斷多糖純度是否均一。

1.3.5 光譜分析

1.3.5.1 紫外光譜分析

將冬棗多糖DPA和DPB粉末分別配制成1 mg/mL的溶液，在200～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，觀察其在260、280 nm波長處有無吸收峰。

1.3.5.2 紅外光譜分析［16］

將1 mg干燥的冬棗多糖DPA和DPB粉末分別與100 mg KBr固體粉末在瑪瑙研缽中研磨均勻，用壓片機(jī)壓成薄片，在4 000～400 cm－1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描。

1.3.6 理化性質(zhì)分析

1.3.6.1 顯色反應(yīng)［16］

將2 種冬棗多糖分別配制成1 mg/mL溶液，分別進(jìn)行苯酚-硫酸反應(yīng)、茚三酮反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)、碘-碘化鉀反應(yīng)、斐林試劑反應(yīng)、三氯化鐵反應(yīng)。

1.3.6.2 比旋度測定

將2 種冬棗多糖分別配制成10 mg/mL溶液，20 ℃條件下用1 dm的旋光管測定其旋光度。

1.3.6.3 糖醛酸含量測定

將冬棗多糖DPB配制成1 mg/mL溶液，以半乳糖醛酸為對(duì)照，采用硫酸-咔唑法［17］，在523 nm波長處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算多糖DPB中糖醛酸的含量。

1.3.7 單糖組成分析

參照文獻(xiàn)［15］的方法，分別稱取10 mg多糖樣品DPA、DPB和標(biāo)準(zhǔn)單糖（鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、葡萄糖、D-半乳糖）各加入3 mL 2 mol/L的三氟乙酸，封管后110 ℃條件下水解4 h，待水解產(chǎn)物冷卻至室溫，加入3 mL甲醇，50 ℃氮吹濃縮至干，重復(fù)3 次，盡量除盡三氟乙酸，得多糖水解產(chǎn)物。水解產(chǎn)物中分別加入10 mg鹽酸羥胺、5 mg肌醇、0.5 mL無水吡啶，混勻后，90 ℃水浴加熱30 min，取出，冷卻至室溫，加入0.5 mL無水乙酐，90 ℃水浴加熱30 min，制得多糖樣品糖腈乙酸化產(chǎn)物。產(chǎn)物在氮吹儀上濃縮至干，加入1.0 mL氯仿復(fù)溶，溶液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后進(jìn)氣相色譜（gas chromatography，GC）儀分析。氣相色譜條件為：SE-30毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），氫火焰離子化檢測器（hydrogen flame ionization detector，F(xiàn)ID）檢測器；氫氣、空氣、氮?dú)怏w積流量分別為16、150、20 mL/min；進(jìn)樣口溫度230 ℃，檢測器溫度240 ℃；色譜柱采用程序升溫，起始溫度130 ℃，以5 ℃/min速率升至180 ℃/min，保持2 min，再以5 ℃/min速率升至220 ℃，保持10 min。

1.3.8 抗氧化活性研究

1.3.8.1 羥自由基（·OH）清除率的測定

將純化后DPA和DPB分別配制成0.2、0.4、0.8、1.2、2.4、3.2、4、4.8、6.4、8.0 mg/mL的溶液，按照文獻(xiàn)［18］，采用鄰二氮菲法進(jìn)行·OH清除率的測定，以VC為對(duì)照。

1.3.8.2 DPPH自由基清除率的測定

采用DPPH體系［19］測定純化后DPA和DPB質(zhì)量濃度分別為0.005、0.01、0.02、0.04、0.05、0.1、0.2、0.4 mg/mL時(shí)的DPPH自由基清除率，并以VC為對(duì)照。

2 結(jié)果與分析

2.1 冬棗多糖的提取和脫蛋白

冬棗多糖經(jīng)水提醇沉，無水乙醇和丙酮洗滌，真空干燥后得冬棗粗多糖；再將粗多糖用木瓜蛋白酶-三氯乙酸法脫蛋白，得脫蛋白冬棗多糖。

2.2 冬棗多糖的脫色

以多糖脫色率和多糖保留率為指標(biāo)，比較幾種脫色工藝，結(jié)果見表1，活性炭脫色效果最好，其多糖脫色率為78.71%，多糖保留率為90.22%。之后將脫蛋白多糖用活性炭脫色后經(jīng)減壓濃縮、真空干燥得冬棗多糖DPI。

表 1 冬棗多糖不同脫色方法的結(jié)果Table 1 Pigment removal and polysaccharide retention with differentsorbents指標(biāo) 活性炭 樹脂LS-850 樹脂AB-8 樹脂D-101多糖脫色率/% 78.71 20.77 14.75 46.08多糖保留率/% 90.22 80.05 90.12 83.00

2.3 冬棗多糖的分離和純化

DPI經(jīng)洗脫，并用苯酚-硫酸法隔管檢測后，由圖1可知，用蒸餾水和0.2 mol/L NaCl洗脫時(shí)，各出現(xiàn)1 個(gè)洗脫峰，再經(jīng)減壓濃縮、透析后分別上Sephadex G-100凝膠色譜柱，由圖2可知，用蒸餾水洗脫，均為單一洗脫峰。收集洗脫峰，經(jīng)減壓濃縮和真空干燥后獲得2 種冬棗多糖DPA和DPB，其總糖含量分別為92.47%、84.99%，其得率分別為脫蛋白脫色多糖的11.49%、10.41%。

2.4 冬棗多糖組分的純度及分子質(zhì)量

由標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖的洗脫體積（Ve）和藍(lán)色葡聚糖2000外水體積（V0）及其分子質(zhì)量，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Ve/V0=－0.597 8 lgMw+6.901 2（R2=0.997 3），DPA和DPB的分子質(zhì)量分別為1.04×104、3.02×105D。由圖2可知，DPA和DPB峰形尖銳，對(duì)稱性好，說明其純度較高，分子質(zhì)量分布較為均一。

2.5 光譜分析

2.5.1 紫外光譜分析

由圖3可知，將DPA和DPB分別在200～700 nm波長范圍內(nèi)掃描后，發(fā)現(xiàn)在波長200 nm附近有一個(gè)較強(qiáng)的吸收峰，而在260、280 nm波長處均無吸收，表明其不含核酸和蛋白質(zhì)［20］。

2.5.2 紅外光譜分析

由圖4可知，DPA和DPB的紅外光譜在3 400 cm－1附近均有1 個(gè)強(qiáng)的吸收峰，是多糖分子間或分子內(nèi)的O—H的伸縮振動(dòng)引起的；在1 638.03、1 637.41 cm－1處有強(qiáng)的吸收峰，為C=O不對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰；在1 410 cm－1附近的峰是糖類C—H變角振動(dòng)吸收峰；在1 150～1 050 cm－1的峰是吡喃型糖苷環(huán)骨架C—O變角振動(dòng)吸收峰，說明分子中存在C—O—H和糖環(huán)C—O—C結(jié)構(gòu)［21］；2 種多糖中分別在864.63、868.59 cm－1處有吸收峰，說明其可能含有β-D-葡萄吡喃糖吸收峰［16］，其他結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步研究確證。

2.6 理化性質(zhì)分析

2.6.1 顯色反應(yīng)

DPA和DPB進(jìn)行苯酚-硫酸反應(yīng)為陽性，茚三酮反應(yīng)為陰性，雙縮脲反應(yīng)為陰性，碘-碘化鉀反應(yīng)為陰性，三氯化鐵反應(yīng)為陰性，DPA、DPB斐林試劑反應(yīng)分別為陽性和陰性，說明2 種多糖都為糖類化合物，不含氨基酸、蛋白質(zhì)、淀粉，無酚羥基，其中DPA為還原多糖。

2.6.2 比旋度

DPA和DPB在20 ℃條件下測得的比旋度分別為+20.55?、+68.01?。

2.6.3 糖醛酸含量

一系列糖醛酸含量按照硫酸-咔唑法所繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線為A523 nm=0.005 8ρ+0.03，式中A523 nm為吸光度，ρ為糖醛酸質(zhì)量濃度。說明在糖醛酸10.7～107 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系保持良好（R2=0.993），DPB中糖醛酸的含量分別為5.56%。

2.7 單糖組成分析

將5 種標(biāo)準(zhǔn)單糖、混合標(biāo)準(zhǔn)品及待測的2 種冬棗多糖樣品分別進(jìn)GC，根據(jù)保留時(shí)間確定單糖組成，根據(jù)峰面積確定單糖組成物質(zhì)的量比。由圖5可知，DPA的單糖組成為阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其物質(zhì)的量比為6.66∶1.00∶6.75∶2.09；DPB的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其物質(zhì)的量比為4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78。DPA的組成主要為阿拉伯糖和葡萄糖，DPB主要組成為阿拉伯糖、半乳糖和鼠李糖。

2.8 抗氧化活性

2.8.1 ·OH清除能力

由圖6可知，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著多糖質(zhì)量濃度的增加，·OH清除率逐漸增加，DPA、DPB 的·OH清除率均低于VC。DPA質(zhì)量濃度從0.2 mg/mL上升至8 mg/mL，其·OH清除率幅度變化較小，在8 mg/mL時(shí)，其·OH清除率為28.52%；DPB質(zhì)量濃度從3.2 mg/mL上升至8 mg/mL，其·OH清除率幅度增加較大，在8 mg/mL時(shí)，其·OH清除率為78.79%。

2.8.2 DPPH自由基清除能力

由圖7可知，隨著DPA、DPB質(zhì)量濃度的增加，DPPH自由基清除率逐漸增加，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時(shí)，VC、DPA、DPB的DPPH自由基清除率分別為96.21%、9.97%、24.54%，在質(zhì)量濃度在0.005～0.4 mg/mL間，DPA和DPB的DPPH自由基清除率增加緩慢，其DPPH自由基清除率均不高。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)以冬棗為原材料，經(jīng)過水提醇沉干燥得冬棗粗多糖，再經(jīng)木瓜蛋白酶-三氯乙酸法脫蛋白，以多糖脫色率和多糖保留率為指標(biāo)，比較了活性炭和3 種樹脂脫色效果，結(jié)果表明活性炭脫色效果最好，其脫色工藝條件為向脫蛋白多糖液中加入1%活性炭在40 ℃、125 r/min條件下室溫振蕩40 min，其多糖脫色率為78.71%，多糖保留率為90.22%。

將脫蛋白脫色多糖液經(jīng)干燥，配成一定溶液上DEAE-52纖維素柱和Sephadex G-100純化得到2 個(gè)組分DPA和DPB，采用凝膠色譜法分別對(duì)DPA和DPB進(jìn)行了純度鑒定和分子質(zhì)量測定，結(jié)果表明峰形尖銳，對(duì)稱性好，純度高，其分子質(zhì)量分別為1.04×104、3.02×105D。

光譜分析表明DPA和DPB不含核酸和蛋白質(zhì)，具有多糖特征吸收，理化實(shí)驗(yàn)表明2 種多糖不含氨基酸和蛋白質(zhì)，不含淀粉，無酚羥基，其中DPA為還原糖。DPA和DPB的比旋度分別為+20.55 ?、+68.01 ?；DPB中糖醛酸含量為5.56%。

采用糖腈乙酸酯化衍生法對(duì)DPA、DPB進(jìn)行單糖組成分析，結(jié)果表明DPA的單糖組成為阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其物質(zhì)的量比為6.66∶1.00∶6.75∶2.09；DPB的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，其物質(zhì)的量比為4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78。

多糖的抗氧化活性與多糖的結(jié)構(gòu)、分子質(zhì)量及單糖的種類和連接方式有關(guān)［22］。對(duì)純化的DPA和DPB進(jìn)行·OH清除率和DPPH自由基清除率的測定，結(jié)果表明DPA和DPB兩種多糖都具有一定的抗氧化活性，隨著多糖質(zhì)量濃度增加，其抗氧化活性逐漸增強(qiáng)，DPB具有較高的·OH清除率，而DPA和DPB的DPPH自由基清除率均不高。在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，DPB的·OH清除率和DPPH自由基清除率均高于DPA，可能與DPB為酸性多糖含帶負(fù)電荷的糖醛酸或分子質(zhì)量大小有關(guān)，究其原因有待進(jìn)一步研究。

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DOI:10.7506/spkx1002-6630-201613016

中圖分類號(hào)：TS201.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-6630（2016）13-0089-06

收稿日期：2015-07-27

基金項(xiàng)目：山東省高校科研計(jì)劃項(xiàng)目（J13LE61）

作者簡介：潘瑩（1982—），女，講師，碩士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物活性。E-mail：panying111@163.com

Isolation， Purification and Antioxidant Activity of Polysaccharides from Zizyphus jujube cv.Dongzao

PAN Ying1， XU Jingwei2
（1.Department of Biological Engineering， Binzhou Vocational College， Binzhou 256603， China；2.Department of Resources and Environment， Binzhou University， Binzhou 256603， China）

Abstract:Objective: To study the monosaccharide composition， structure and antioxidant activity of polysaccharide fractions isolated and purified from Zizyphus jujube cv.Dongzao.Methods: The extraction of polysaccharides was performed by water extraction and subsequent ethanol precipitation， and after removal of proteins and pigments， the polysaccharides were purified by successive DEAE-52 cellulose column and Sephadex G-100 gel column chromatography.The purity and molecular weights of the purified polysaccharides were determined by Sephadex G-100 column chromatography.Preliminary structural characterization was carried out by ultraviolet-visible （UV-VIS） spectroscopy， infrared （IR）spectroscopy and gas chromatography （GC）.The antioxidant activity of the crude and purified polysaccharides was evaluated using the phenanthroline method and 1， 1-diphenyl-2-picrylhydroxyl （DPPH） radical scavenging activity assay.Results: Two polysaccharide fractions （DPA and DPB） were purified to homogeneity from the crude polysaccharides as identified by Sephadex G-100.The molecular weight of DPA and DPB was 1.04 × 104and 3.02 × 105D， respectively.DPA and DPB did not contain protein or nucleic acid， but contained the pyranose ring skeleton glucoside.The monosaccharide composition of DPA consisted of arabinose， mannose， glucose and galactose with a molar ratio of 6.66:1.00:6.75:2.09， whereas that of DPB consisted of rhamnose， arabinose， mannose， glucose and galactose with a molar ratio of 4.33:10.90:1.00:3.25:4.78.The crude polysaccharides， DPA and DPB all had antioxidant activity in a concentration dependent manner.The scavenging percentages of DPA and DPB at 8 mg/mL for hydroxyl radical were 28.52% and 78.79% respectively， which were 9.97% and 24.54% at 0.4 mg/mL， respectively.Conclusion: Both DPA and DPB had antioxidant activity.

Key words:Zizyphus jujube cv.Dongzao； polysaccharide； isolation and purification； structure identification； antioxidant activity