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      不同產(chǎn)地黃芩對發(fā)熱模型大鼠體溫及血清中IL-1β、PGE2的影響*

      2016-08-27 06:49:27楊志軍楊秀娟栗會靜甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅蘭州7300002蘭州石化總醫(yī)院
      西部中醫(yī)藥 2016年3期
      關(guān)鍵詞:渭源隴西生理鹽水

      楊志軍,郭 勝,楊秀娟,栗會靜甘肅中醫(yī)藥大學(xué),甘肅蘭州730000;2蘭州石化總醫(yī)院

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      不同產(chǎn)地黃芩對發(fā)熱模型大鼠體溫及血清中IL-1β、PGE2的影響*

      楊志軍1,郭勝2△,楊秀娟1,栗會靜1
      1甘肅中醫(yī)藥大學(xué),甘肅蘭州730000;2蘭州石化總醫(yī)院

      目的:研究不同產(chǎn)地黃芩水煎液對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的發(fā)熱模型大鼠的解熱作用及機制。方法:將篩選合格的80只大鼠隨機分為8組,即生理鹽水組、模型組及河北承德、隴西、渭源產(chǎn)黃芩的高、低劑量組。黃芩水煎液灌胃給藥2天后,LPS腹腔注射誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱模型,再灌胃給藥1天。檢測各組大鼠在不同時間點的升溫值及血清中IL-1β、PGE2的含量。結(jié)果:與生理鹽水組比較,模型組大鼠的升溫值、IL-1β、PGE2含量顯著升高(P<0.05);各給藥組大鼠在不同時間點的升溫值及IL-1β、PGE2含量顯著低于模型組(P<0.05);同一產(chǎn)地黃芩高劑量組大鼠在2、3、4小時的升溫值及血清中IL-1β、PGE2含量顯著低于低劑量組(P<0.05);不同產(chǎn)地高劑量組間比較,在3、4小時時河北承德組大鼠升溫值顯著低于隴西、渭源組,河北、渭源組IL-1β含量顯著低于隴西組,河北、隴西組PGE2含量顯著低于渭源組(P<0.05)。結(jié)論:不同產(chǎn)地黃芩水煎液均有顯著的解熱作用,河北承德黃芩水煎液的解熱效果優(yōu)于甘肅隴西、渭源黃芩,高劑量組解熱效果優(yōu)于低劑量組;抑制IL-1β、PGE2的釋放可能是黃芩發(fā)揮解熱作用的機制之一。

      黃芩;體溫;IL-1β;PGE2;道地藥材

      黃芩始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,被列為中品。本品性味苦寒,具有瀉火解毒、清熱燥濕、止血、安胎等功效,應(yīng)用于臨床已有二千多年歷史。近年來,黃芩在甘肅多地廣泛種植,且面積大、產(chǎn)量高、療效好,被確定為甘肅“十大隴藥”之一。本實驗通過研究不同產(chǎn)地黃芩對LPS誘導(dǎo)的發(fā)熱模型大鼠體溫及血清中IL-1β、PGE2含量的影響,比較甘肅產(chǎn)黃芩與道地產(chǎn)區(qū)黃芩在解熱作用方面的差異,為臨床用藥提供依據(jù)。

      1 材料與方法

      1.1實驗動物SPF級Wistar大鼠,雄性,體質(zhì)量(200±20)g,由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供,動物合格證號:SCXK(甘)2011-0001。

      1.2藥物與試劑河北承德產(chǎn)黃芩,購自河北安國藥市;甘肅隴西、渭源產(chǎn)黃芩,于10月底在當(dāng)?shù)夭杉?jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)杜弢教授鑒定均為兩年生唇形科植物黃芩S cutel laria baicalensis Georgi的根;脂多糖(LPS)(Sigma公司生產(chǎn),批號L2880);白細胞介素1-β(IL-1β)試劑盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn),批號20130402B);前列腺素E2(PGE2)試劑盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn),批號:20130402B)。

      1.3主要儀器80-2型離心沉淀器(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠提供);BS110S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司提供);T101電子體溫計(愛奧樂公司提供);恒溫水浴鍋(江蘇金壇大地儀器廠提供);eppendorf Research可調(diào)式微量移液器(No 5.531.131);MODEL680-酶標(biāo)儀(美國伯樂公司提供)。

      1.4藥物制備分別將不同產(chǎn)地的黃芩除去雜質(zhì),洗凈。大小分檔,置蒸制容器內(nèi)隔水加熱,蒸至“圓氣”后半小時,等質(zhì)地軟化,取出,晾干,切制成片。稱取炮制后的黃芩,第1次加10倍量的水浸泡30分鐘,文火煎煮50分鐘,過濾,再加8倍量的水,文火煎煮40分鐘,過濾,合并兩次濾液。將濾液水浴濃縮為含生藥1g/m L的藥液,高壓滅菌,4℃以下儲存?zhèn)溆谩?/p>

      1.5試劑配制實驗前2小時取出冷藏的LPS,精密稱取4mg于100mL的容量瓶中,加生理鹽水使其溶解,定容,配成40μg/mL的溶液備用。

      1.6分組、造模SPF級Wistar大鼠,雄性,共100只,適應(yīng)性喂養(yǎng)3天。連續(xù)測肛溫3天,選取3天內(nèi)體溫變化不超過0.3℃的大鼠80只,隨機分為8組,即生理鹽水組、模型組及河北承德產(chǎn)黃芩高、低劑量組,隴西產(chǎn)黃芩高、低劑量組,渭源產(chǎn)黃芩高、低劑量組。生理鹽水組、模型組大鼠灌胃生理鹽水0.02mL/g,其余各組分別給予河北、隴西、渭源產(chǎn)黃芩水煎液,高劑量組每只按10g/kg灌胃,低劑量組每只按5g/kg給藥。連續(xù)給藥2天,1次/d。第3天造模前10小時禁食不禁水,每隔0.5小時測大鼠肛溫1次,連續(xù)測3次,取平均值作為基礎(chǔ)體溫。生理鹽水組大鼠腹腔注射0.9%氯化鈉注射液2.5mL/kg,其余各組大鼠均腹腔注射脂多糖(LPS)100μg/kg[1]。造模2小時后,各組大鼠灌胃黃芩水煎液,劑量同前。

      1.7體溫測定分別于灌胃給藥后1、2、3、4小時監(jiān)測記錄各組大鼠體溫,計算各組大鼠在各監(jiān)測點的升溫值(升溫值=實測體溫-基礎(chǔ)體溫)。

      1.8樣品的制備體溫測定后從大鼠股動脈取血,靜置半個小時后以3000 r/min離心10分鐘,吸取血清備用。

      1.9血清中IL-1β、PGE2的含量測定嚴格按照ELISA試劑盒說明書檢測血清中IL-1β、PGE2含量。

      1.10統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析,計量資料以(χ±s)表示,采用方差分析,組間多重比較采用LSD-t檢驗,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1各組藥物對發(fā)熱大鼠體溫的影響與生理鹽水組比較,模型組大鼠升溫值高于生理鹽水組(P<0.05)。與模型組比較,各給藥組大鼠在1、2、3、4小時升溫值低于模型組(P<0.05);同一產(chǎn)地組間比較,在2、3、4小時時黃芩高劑量組大鼠升溫值均低于低劑量組(P<0.05);不同產(chǎn)地高劑量組間比較,在3、4小時時河北產(chǎn)黃芩高劑量組大鼠升溫值低于隴西、渭源組(P<0.05),見表1。

      2.2各組藥物對血清中IL-1β含量的影響與生理鹽水組比較,模型組大鼠IL-1β、PGE2含量均升高(P<0.05);與模型組比較,各給藥組IL-1β、PGE2含量均降低(P<0.05);同一產(chǎn)地組間比較,高劑量組大鼠IL-1β、PGE2含量都低于低劑量組(P<0.05);高劑量組間比較,河北、渭源組IL-1β含量低于隴西組(P<0.05),河北、隴西組PGE2含量低于渭源組(P<0.05),見表2。

      3 討論

      黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根[2],主要分布于河北、內(nèi)蒙古、甘肅等地,河北承德為本品道地產(chǎn)區(qū),其所產(chǎn)黃芩俗稱熱河黃芩。《千金翼方》云:“黃芩……產(chǎn)于寧州(今甘肅寧縣)、涇州(今甘肅涇川縣)”[3],指出甘肅亦為黃芩的主要產(chǎn)區(qū)之一。甘肅省自2003年開始擴種黃芩,種植面積逐年遞增[4],甘肅渭源、隴西兩縣成為黃芩主要產(chǎn)區(qū)。本實驗主要研究河北承德、甘肅隴西和渭源3個不同產(chǎn)地的黃芩水煎液的解熱作用及機制。

      脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性桿菌的內(nèi)毒素的活性成分,是效應(yīng)較強的桿菌致熱源,是經(jīng)典的炎性發(fā)熱模型,常用于篩選解熱藥物并探討炎性發(fā)熱機制。由于該模型具有自限性和耐受性,因此在用于起效較慢的中藥解熱藥效研究時,應(yīng)在誘導(dǎo)發(fā)熱模型前即開始給予中藥[5]。外源性致熱原進入機體,作用于巨噬細胞、淋巴細胞、單核細胞等免疫活性細胞,產(chǎn)生大量致熱性細胞因子,這些細胞因子直接或間接通過中樞介質(zhì)作用于體溫調(diào)節(jié)中樞,使體溫調(diào)定點上移,產(chǎn)熱增加,散熱減少,使體溫在一個新的調(diào)定點達到平衡[6]。IL-1β是目前較為公認的參與多種致熱原性發(fā)熱的重要細胞因子,與其他細胞因子一起經(jīng)不同途徑刺激中樞介質(zhì)PGE2的釋放,進一步刺激體溫調(diào)節(jié)中樞,引起發(fā)熱[7]。

      本實驗證實,不同產(chǎn)地黃芩水煎液對LPS誘導(dǎo)的發(fā)熱大鼠均有顯著的解熱作用,高劑量黃芩水煎液解熱效果優(yōu)于低劑量,而河北承德產(chǎn)黃芩解熱效果略優(yōu)于甘肅隴西、渭源產(chǎn)黃芩。黃芩水煎液可能通過抑制炎性細胞因子IL-1β的釋放,減少體溫正調(diào)節(jié)介質(zhì)PGE2的生成,從而發(fā)揮解熱作用。

      表1 各組藥物對發(fā)熱大鼠體溫的影響(s)

      表1 各組藥物對發(fā)熱大鼠體溫的影響(s)

      注:與生理鹽水組比較,#表示P<0.05;與模型組比較,*表示P<0.05。

      組別例數(shù)給藥量/(g·kg-1)不同時間點升溫值/℃1h 2h 3h 4h生理鹽水組10-0.18±0.08*0.20±0.05*0.15±0.12*0.16±0.09*模型組10-0.60±0.09#1.27±0.08#1.73±0.06#1.80±0.08#河北產(chǎn)黃芩低劑量組10 5 0.33±0.09*0.73±0.08*1.01±0.11*1.16±0.15*河北產(chǎn)黃芩高劑量組10 10 0.27±0.16*0.42±0.09*0.71±0.03*0.68±0.06*隴西產(chǎn)黃芩低劑量組10 5 0.45±0.01*0.90±0.14*1.25±0.10*1.23±0.11*隴西產(chǎn)黃芩高劑量組10 10 0.30±0.05*0.48±0.10*0.96±0.10*0.92±0.13*渭源產(chǎn)黃芩低劑量組10 5 0.40±0.10*0.82±0.10*1.24±0.09*1.19±0.11*渭源產(chǎn)黃芩高劑量組10 10 0.25±0.08*0.45±0.07*0.91±0.11*0.79±0.12*

      表2 各組大鼠血清中IL-1β、PGE2的含量(s)

      表2 各組大鼠血清中IL-1β、PGE2的含量(s)

      注:與生理鹽水組比較,#表示P<0.05;與模型組比較,*表示P<0.05;“-”表示該組大鼠灌胃生理鹽水0.02mL/g。

      組別例數(shù)給藥量/(g·kg-1)IL-1β/(pg·mL-1)PGE2/(pg·mL-1)生理鹽水組10-17.29±0.28 165.84±5.49模型組10-31.69±1.59#213.57±6.52#河北黃芩低劑量組10 5 24.17±0.31*188.77±10.74*河北黃芩高劑量組10 10 17.35±0.27*174.81±6.88*隴西黃芩低劑量組10 5 26.46±0.34*190.35±8.97*隴西黃芩高劑量組10 10 22.80±0.68*175.84±3.15*渭源黃芩低劑量組10 5 26.13±0.23*202.59±7.72*渭源黃芩高劑量組10 10 17.74±0.44*187.81±15.84*

      [1]左澤平,王志斌,高陽,等.柴胡注射液對LPS發(fā)熱大鼠解熱機制的研究[J].中藥藥理與臨床,2012,28(4):57-60.

      [2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:中國醫(yī)藥出版社,2010:282-283.

      [3]孫思邈.千金翼方(影印本)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:51.

      [4]崔璐,路俊仙,林慧彬,等.我國黃芩資源及生產(chǎn)現(xiàn)狀調(diào)查研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(9):2279-2280.

      [5]高琳,謝鳴,孫明瑜,等.柴芩合煎液與分煎液對LPS誘導(dǎo)的大鼠發(fā)熱模型的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2003,9(6): 22-25.

      [6]李楚杰.發(fā)熱時體溫的正調(diào)節(jié)和負調(diào)節(jié)[J].中國病理生理雜志,1994,10(5):553-557.

      [7]湯毅珊,王寧生,張銀卿.雄黃及含雄黃復(fù)方對炎癥介質(zhì)IL-1β,IL-6,TNF-α和NO的影響[J].中藥藥理與臨床,2007,23(5): 107-110.

      Effectsof HuangQin from Different Producing Areason Body Temperature,the Levelsof IL-1βand PGE2of Rats with Fever

      YANG Zhijun1,GUO Sheng2△,YANG Xiujuan1,LIHuijing1
      1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2 General Hospital of Lanzhou Petrochemical Company

      Objective:To study antipyretic effectsand themechanism of the decoction of HuangQin(Scutellaria baicalensis Georgi)from different producing areas on lipopolysaccharide(LPS)-induced ratmodelwith fever. Methods:Eighty ratswere randomized into eightgroups:physiologicalsalinegroup,themodel group,high and low dosesgroupsof HuangQin from Chengde,Longxi and Weiyuan.A fter intragastric adm inistration of HuangQin decoction for two days,the ratmodelw ith feverw as induced by peritoneal injection of LPS,and they received intragastric adm inistration for one day.The contents of IL-1βand PGE2and the tem perature rise atdifferent timesof the rats in different groupsw ere detected.Results:Com pared w ith physiological saline group,the contents of IL-1βand PGE2and the temperature risenotably raised in themodelgroup(P<0.05);these indexesatdifferent times in themedication groupswere lower than theseof themodel group significantly(P<0.05);the contents of IL-1βand PGE2and the temperature rise in two hours,threehoursand fourhours in thehigh dosegroup of HuangQin from the same producing areawere lower than these of the low dose group apparently(P<0.05);the comparison among high doses groups of HuangQin from different producing areas showed that the temperature rises at three and four hours in Chengde group were notably lower than these of the Longxi group and Weiyuan group,the contents of IL-1βin Chengde group and Weiyuan group were low er than these of Longxi group notably,the contentsof PGE2in Chengde group and Longxi group were lower than these of Weiyuan group significantly(P<0.05).Conclusion:The decoction of HuangQin from different producing areas presents notable antipyretic effects,antipyretic effects of HuangQin from Chengde are superior to these of HuangQin from Longxi and Weiyuan,the effectsof high dose group are superior to these of low dose groups;inhibiting the release of IL-1βand PGE2m ight be one of the mechanisms of HuangQin bringing antipyretic effects into play.

      HuangQin;body temperature;IL-1β;PGE2;genuineherbs

      R285.5

      A

      1004-6852(2016)03-0005-03

      2015-10-20

      甘肅省高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費項目(編號BH2012-020)。

      楊志軍(1971—),女,在讀博士研究生,副教授。研究方向:中藥及復(fù)方的藥效及不良反應(yīng)。

      △郭勝(1971—),男,副主任醫(yī)師。研究方向:消化系統(tǒng)疾病的中西醫(yī)結(jié)合診治。

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