陳永傳,崔亞利，李　艷，任颯爽

(1.北京善方醫(yī)院檢驗(yàn)科　100027；2.北京豐臺醫(yī)院檢驗(yàn)科　100071)

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Roche Cobas 501生化分析儀血清肌酐分析測量范圍的驗(yàn)證

陳永傳1,崔亞利2△，李艷1，任颯爽1

(1.北京善方醫(yī)院檢驗(yàn)科100027；2.北京豐臺醫(yī)院檢驗(yàn)科100071)

目的通過對血清肌酐分析測量范圍(AMR)的驗(yàn)證，探討臨床實(shí)驗(yàn)室如何按照國際標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行生化分析儀定量檢測項(xiàng)目分析測量范圍的驗(yàn)證，保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。方法采用酶法在Roche Cobas 501生化分析儀上檢測7個(gè)濃度水平美國病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)線性范圍能力測試樣品，這7個(gè)樣品靶值涵蓋廠家說明書標(biāo)示肌酐分析測量范圍低、中、高值，每個(gè)樣品檢測兩次取其均值，計(jì)算其與靶值的偏倚。另外參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI )指南文件 EP6-P 的要求，收集含高值肌酐的新鮮患者血清，按一定比例混合、離心，計(jì)算混合物的濃度并將之作為高值樣品(H)，與經(jīng)同樣處理獲得的低值樣品(L)分別按 5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的關(guān)系配制，形成系列樣品，在Roche Cobas 501 生化分析儀上對各樣品的肌酐進(jìn)行檢測，每個(gè)樣品檢測4次，數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析。結(jié)果7個(gè)水平的CAP樣品與靶值的偏倚均小于北京善方醫(yī)院檢驗(yàn)科設(shè)定的允許誤差±7.5%[(1/2×TE)%]。新鮮患者混合血清樣品回歸方程為Y=0.988 6X+16.614，b=0.988 6，介于0.97～1.03，截距a與0經(jīng)t檢驗(yàn)，ta0.05，說明截距與 0 無明顯差異，回歸直線事實(shí)上通過0點(diǎn)。結(jié)論廠家說明書標(biāo)示的血清肌酐分析測量范圍驗(yàn)證通過，實(shí)驗(yàn)室可以采用。

肌酐；定量檢測；分析測量范圍；驗(yàn)證

分析測量范圍(AMR)是指一種方法不需要經(jīng)過任何稀釋、濃縮或者其他非常規(guī)檢測步驟的預(yù)處理，直接測量標(biāo)本得到分析值的范圍[1]。AMR在試劑說明書上一般都會(huì)標(biāo)示，但由于溫、濕度等實(shí)驗(yàn)條件不同，每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)該對廠家說明書標(biāo)示的AMR進(jìn)行驗(yàn)證，如有不符，應(yīng)及時(shí)調(diào)整[2]。美國《臨床實(shí)驗(yàn)室修正法案最終法規(guī)》、 ISO 15189 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)、美國病理學(xué)家協(xié)會(huì)(CAP)的認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)[1-4]，均要求實(shí)驗(yàn)室對引進(jìn)或改變的檢測系統(tǒng)做性能驗(yàn)證后方可應(yīng)用于常規(guī)工作，而性能驗(yàn)證中的一個(gè)重要指標(biāo)就是對定量檢測系統(tǒng)的AMR進(jìn)行驗(yàn)證[5]。本文以血清肌酐為例，報(bào)告北京善方醫(yī)院檢驗(yàn)科對在Roche Cobas 501生化分析儀上定量檢測項(xiàng)目進(jìn)行的AMR驗(yàn)證。

1　材料與方法

1.1AMR驗(yàn)證材料CAP線性范圍能力測試樣品LN2-B 2013，共7個(gè)水平(LN-28、LN-29、LN-30、LN-31、LN-32、LN-33、LN-34)。另外，收集高濃度肌酐的患者新鮮血清，要求外觀澄清，無溶血、脂血，濃度接近或超過廠家提供的分析測量范圍上限，將幾份血清混和離心，形成高值樣品(H)；另外收集低濃度肌酐的患者新鮮血清，同上處理形成低值樣品(L)。

1.2儀器與試劑Roche Cobas 501生化分析儀。校準(zhǔn)品：Roche原裝配套CFAS。質(zhì)控品：Roche原裝配套生化多項(xiàng)質(zhì)控品，兩個(gè)水平。試劑：Roche原裝配套肌酐試劑，試劑盒標(biāo)明其分析測量范圍為5～2 700 μmol/L。

1.3驗(yàn)證方法定標(biāo)通過，檢測質(zhì)控在控后，進(jìn)行AMR驗(yàn)證品的檢測，將7個(gè)水平的CAP驗(yàn)證品各檢測兩次，取其均值，計(jì)算其與靶值的偏倚[6]。將收集的患者新鮮血清混合樣品 H 和 L分別按 5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的關(guān)系各自配制，形成系列樣品。將系列樣品1 d內(nèi)做2次測定，第1次從低濃度到高濃度，每個(gè)樣品做2次重復(fù)測定；第2次從高濃度到低濃度，每個(gè)樣品做2次重復(fù)測定。每個(gè)樣品共檢測4次。記錄結(jié)果，將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。具體計(jì)算方法參照 EP6-P文件[7]。采用平均斜率來確定高值樣品應(yīng)含有的待測物的值，然后依照試驗(yàn)樣品配制稀釋關(guān)系，推算出不同樣品中應(yīng)具有的待測物的值[8]。這些值成為分析測量范圍的預(yù)期值(X)，每一樣品的檢測均值減去低值樣品的檢測均值為實(shí)測值(Y)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析、線性回歸分析以及t檢驗(yàn)，計(jì)量資料用Duncan檢驗(yàn)判定組間差異。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1CAP AMR驗(yàn)證物檢測結(jié)果選取CAP 7個(gè)驗(yàn)證物對肌酐的測量范圍進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如表1。每個(gè)驗(yàn)證物測量的均值與已知的靶值間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1　　CAP 樣品AMR驗(yàn)證物檢測結(jié)果

2.2CAP驗(yàn)證物的均值與靶值間相關(guān)性分析驗(yàn)證物的均值與靶值間相關(guān)性顯著，這反映兩者的測量具有較好的一致性(圖1)。

7個(gè)水平的CAP AMR驗(yàn)證物的檢測值與靶值的偏倚均在可接受范圍±7.5%[(1/2×TE)%]，驗(yàn)證物濃度范圍覆蓋廠家說明書標(biāo)示的血清肌酐分析測量范圍(5～2 700 μmol/L)，驗(yàn)證通過，廠家說明書標(biāo)示的AMR本實(shí)驗(yàn)室可以采用(圖2)。

2.3患者新鮮血清混合樣品驗(yàn)證物結(jié)果以X表示各樣品的預(yù)期值，Y表示各樣品的實(shí)測值，利用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件得出回歸方程Y=0.988 6X+16.614，r2=0.999 7(圖3)。斜率b=0.988 6，接近1(介于0.97～1.03)；截距a與0經(jīng)t檢驗(yàn)，ta=1.250 3，t0.05=1.734，ta0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明截距與0無明顯差異，回歸直線事實(shí)上通過0點(diǎn)。 據(jù)此，可以計(jì)算得出Roche Cobas 501生化分析儀肌酐分析測量范圍為4.25～2 739.18 μmol/L，覆蓋廠家提供的分析測量范圍5～2 700 μmol/L，驗(yàn)證通過，廠家說明書標(biāo)示的AMR本實(shí)驗(yàn)室可以采用。

圖1　　CAP樣品均值與靶值的相關(guān)性分析

圖2　　CAP樣品AMR驗(yàn)證物檢測偏倚圖(%)

圖3　　　　　患者新鮮血清混合樣品肌酐分析測量范圍驗(yàn)證散點(diǎn)圖

3　討　　論

AMR驗(yàn)證是臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理中的重要環(huán)節(jié)，每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)對廠家聲明的AMR進(jìn)行驗(yàn)證，如有不符，應(yīng)及時(shí)調(diào)整。因?yàn)楫?dāng)檢測值超出AMR，被測物質(zhì)的檢測值與實(shí)際濃度可能不存在線性關(guān)系，測量結(jié)果不可靠。對于患者標(biāo)本而言，只有當(dāng)檢測值落在AMR(或者可以通過稀釋、濃縮標(biāo)本使檢測值落在AMR)時(shí)，其結(jié)果才能報(bào)告。當(dāng)檢測值在AMR之外，其結(jié)果應(yīng)報(bào)告為“小于”或者“大于”AMR限制閾[1]。用于AMR驗(yàn)證的物質(zhì)應(yīng)具有合適的基質(zhì)，北京善方醫(yī)院檢驗(yàn)科選用CAP線性范圍能力測試樣品和患者新鮮血清混合樣品，盡量減少基質(zhì)效應(yīng)影響。用于AMR驗(yàn)證的物質(zhì)必須覆蓋低、中、高各濃度，至少需要4個(gè)以上驗(yàn)證品，驗(yàn)證過程應(yīng)形成文件[9-11]。

當(dāng)開始應(yīng)用一種新方法時(shí)，就有必要對該方法進(jìn)行AMR驗(yàn)證，如果某種方法是全點(diǎn)定標(biāo)(3點(diǎn)以上)，則之后無需再進(jìn)行AMR驗(yàn)證，但如果是一點(diǎn)或者兩點(diǎn)定標(biāo)，則此后至少每6個(gè)月應(yīng)再驗(yàn)證一次[1]。當(dāng)不可獲得CAP或其他權(quán)威機(jī)構(gòu)驗(yàn)證標(biāo)本時(shí)，實(shí)驗(yàn)室可使用患者新鮮血清混合樣品進(jìn)行AMR驗(yàn)證，如上文所述，所使用驗(yàn)證品不同時(shí)驗(yàn)證過程也不盡相同。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)規(guī)定可接受的質(zhì)量指標(biāo)，對于CAP標(biāo)本 AMR驗(yàn)證的可接受偏倚，參照CAP能力驗(yàn)證線性評估的允許偏倚，本室采用1/2×美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案規(guī)定的允許總誤差。對于患者新鮮血清混合樣品AMR驗(yàn)證的可接受質(zhì)量指標(biāo)，可參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)定[12]。

本研究中CAP驗(yàn)證品以及患者新鮮血清混合驗(yàn)證品測量值與靶值(或預(yù)期值)間無明顯差異，具有較好的相關(guān)性，且偏倚范圍、差異都在可接受范圍內(nèi)。這反映廠家說明書標(biāo)示的血清肌酐在Roche Cobas 501生化分析儀上的分析測量范圍驗(yàn)證通過，廠家說明書標(biāo)示的AMR本實(shí)驗(yàn)室可以采用。

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Verification of analytical measurement range of serum creatinine detected by Roche Cobas 501 Biochemistry Analyzer

CHENYongchuan1,CUIYali2△,LIYan1,RENSashuang1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingSanfineHospital,Beijing100027,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingFengtaiHospital,Beijing100071,China)

ObjectiveTo investigate how the clinical laboratory conducting the verification of analytical measurement range(AMR) of quantitative items detected by the biochemical analyzer according to the requirements of the international standards by verifying the serum creatinine AMR for ensuring the accuracy and reliability of detection results.MethodsThe enzyme method was adopted to detect the 7-concentration levels test specimens of CAP linear range proficiency test on the Roche Cobas 501 biochemical analyzer.These 7 specimens target values covered the low,middle and high values of creatinine AMR marked by the manufacturer′s instructions.Each specimen was detected twice and the mean value was taken,then the bias between the mean value and target value was calculated.In addition,referring to the requirements of CLSI guiding document EP6-P,the patients′ fresh serum containing high value creatinine was collected,then mixed with certain proportion and centrifuged.The mixture concentration was calculated and served as the high value specimen(H),and the low value specimen was obtained by the same treatment.Then the high and low value specimens were dispensed with the relations of 5L,4L+1H,3L+2H,2L+3H,1L+4H and 5H and formed the series specimens.The creatinine levels in each specimen was detected on the Roche Cobas 501 biochemical analyzer,each specimen was detected 4 times.The obtained data were performed the regression analysis.ResultsThe bias of 7-level CAP specimen and target value was less than the allowable error ±7.5%[(1/2×TE)%] set by the clinical laboratory of the Beijing Sanfine Hopsital.The regression equation of fresh mixed serums from patients wasY=0.988 6X+16.614,b=0.988 6,between 0.97-1.03,intercept a and 0,ta0.05,which showed no significant difference between intercept and 0,the regression line was through 0 point in fact.ConclusionThe verification of creatinine AMR marked by the manufacturer′ s instructions is passed,which can be adopted by the clinical laboratory.

creatinine;quantitative measurement;analytical measurement range;verification

陳永傳，男，主管技師，主要從事臨床生化研究?！?/p>

，E-mail:chenyc717@126.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.027

A

1673-4130(2016)16-2275-03

2016-04-01

2016-06-18)