濰坊地區(qū)自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)病因研究

陶華娟，蔡緒英，路興軍，李　艷，孫立寧

(山東省濰坊市婦幼保健院遺傳科，山東 濰坊 261011)

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濰坊地區(qū)自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)病因研究

陶華娟，蔡緒英，路興軍，李艷，孫立寧

(山東省濰坊市婦幼保健院遺傳科，山東 濰坊 261011)

目的探討濰坊地區(qū)自然流產(chǎn)的主要遺傳學(xué)因素。方法選取2011年8月至2014年8月在濰坊市婦幼保健院自愿接受檢查的812對自然流產(chǎn)夫婦及其清宮術(shù)后的812例流產(chǎn)胚胎進(jìn)行染色體檢查，同時選取100對至少生育過1胎且生育史正常的夫婦作為對照組，分析流產(chǎn)胚胎染色體異常與雙親染色體、孕婦年齡、自然流產(chǎn)次數(shù)和孕周的關(guān)系。結(jié)果①自然流產(chǎn)胚胎組織812例，其中染色體異常397例，異常率為48.89%；②812對(1 624例)自然流產(chǎn)夫婦存在染色體異常者61例，異常率為3.76%；對照組100對(200例)夫婦存在染色體異常者2例，異常率為1.00%，兩者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.056，P<0.05)；③61對雙方之一存在染色體異常的夫婦，其流產(chǎn)胚胎存在染色體異常者45例(73.77%)，751對雙方染色體均正常的自然流產(chǎn)夫婦，其流產(chǎn)胚胎染色體異常352例(46.87%)，兩者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=16.337，P<0.05)；流產(chǎn)胚胎染色體異常與雙親染色體異常具有相關(guān)性(c=0.140，P<0.05)；④812例自然流產(chǎn)胚胎根據(jù)孕婦年齡、自然流產(chǎn)發(fā)生次數(shù)及流產(chǎn)發(fā)生的孕周不同分組，其異常率與孕婦年齡、流產(chǎn)發(fā)生孕周有關(guān)，經(jīng)比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為19.044和8.827，P<0.05)。結(jié)論①胚胎染色體異常是導(dǎo)致濰坊地區(qū)自然流產(chǎn)發(fā)生的主要因素；②自然流產(chǎn)夫婦染色體異常率高于正常人群；③胚胎染色體異常與雙親染色體異常有相關(guān)性。

濰坊地區(qū)；自然流產(chǎn)；染色體異常；熒光原位雜交；核型分析

[Abstract]Objective To investigate the major genetic factors of spontaneous abortion in Weifang area. Methods From August 2011 to August 2014 in WeiFang Maternal and Child Health Hospital 812 couples and their spontaneous abortion tissues were collected for chromosome examination. At the same period 100 normal couples with at least one gravity were collected in control group. The relationship between chromosomal abnormality of spontaneous abortion tissues and their parents’ chromosome, maternal age, times of spontaneous abortion and gestational weeks was analyzed. Results The abnormal rate of chromosome of spontaneous abortion tissues was 48.89% (397/812). That of couples with spontaneous abortion and the controls was 3.76% (61/1624) and 1.00% (2/200), respectively, and the difference was significant (χ2=4.056,P<0.05). Of 61 couples with abnormal chromosome in one part, 45 embryos had abnormal chromosome (73.77%), while 352 (46.87%) abnormal embryos were found in 751 normal couples. The difference between them was significant (χ2=16.377,P<0.05). There was correlation between parents’ chromosomal abnormality and embryos’ chromosomal abnormality (c=0.140,P<0.05). The chromosomal abnormality rate of abortion embryo was correlated with maternal age and miscarriage week based on grouping according to maternal age, loss times and miscarriage weeks (χ2value was 19.044 and 8.827, respectively, bothP<0.05). Conclusion Embryo chromosomal abnormality is the main reason of spontaneous abortion in Weifang area, and it is correlated with parents’ chromosomal abnormality. Chromosome abnormality rate is higher in population suffering spontaneous abortion than in normal people.

[Key words]Weifang area；spontaneous abortion；chromosomal abnormality；fluorescence in situ hybridization (FISH)；karyotype analysis

自然流產(chǎn)是婦產(chǎn)科的一種常見病，胚胎著床后31%發(fā)生自然流產(chǎn)，其中80%為早期流產(chǎn)(妊娠在12周前終止者)[1]。導(dǎo)致自然流產(chǎn)的原因眾多，包括遺傳因素、解剖因素、內(nèi)分泌因素、免疫因素、感染因素、血栓形成傾向、環(huán)境因素以及其他未知因素，但約50%及以上的自然流產(chǎn)與胚胎染色體異常有關(guān)[2]，包括數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常。

本研究對濰坊地區(qū)812對自然流產(chǎn)夫婦及其812例流產(chǎn)胚胎進(jìn)行染色體檢查，同時選取100對至少生育過1胎且生育史正常的夫婦作為對照組，檢測濰坊地區(qū)自然流產(chǎn)胚胎和流產(chǎn)夫婦的染色體異常率，并分析流產(chǎn)胚胎染色體異常與雙親染色體、孕婦年齡、自然流產(chǎn)次數(shù)和孕周的關(guān)系，為自然流產(chǎn)夫婦提供生育指導(dǎo)，豐富遺傳咨詢臨床資料。

1資料與方法

1.1研究對象

選擇2011年8月至2014年8月在濰坊市婦幼保健院自愿接受染色體檢查的812對自然流產(chǎn)夫婦及其清宮術(shù)后的812例流產(chǎn)胚胎進(jìn)行染色體檢查。孕婦年齡21～40歲，妊娠5～27+6周；同時要求滿足以下條件：①圍孕期夫婦雙方無明顯服藥史及有害物質(zhì)接觸史；②排除與自然流產(chǎn)相關(guān)的男女雙方疾病，且表型及智力正常；③B超提示單胎，胚胎停止發(fā)育。同時選擇100對至少生育過1胎且生育史正常的夫婦作為對照組，同時滿足以上條件①和②。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

無菌條件下抽取每對自然流產(chǎn)夫婦外周靜脈血2mL，每瓶25滴接種于人體外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)收獲、制片、顯帶后進(jìn)行染色體核型分析。核型命名按照人類細(xì)胞遺傳學(xué)命名國際體制(ISCN2013)執(zhí)行。

對患者行清宮術(shù)后，在無菌條件下，選取生長狀態(tài)良好的胚胎組織用無菌生理鹽水清洗2～3遍后剪碎，制成組織懸液，取其中0.3～0.5mL用于細(xì)胞培養(yǎng)，0.2mL用于熒光原位雜交(FISH)檢測。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，染色體結(jié)果等定性資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1自然流產(chǎn)胚胎組織染色體檢測情況

2011年8月至2014年8月共收集自然流產(chǎn)胚胎組織812例，全部經(jīng)FISH檢測成功，成功率為100%；細(xì)胞培養(yǎng)成功后行染色體核型分析476例，檢測成功率為58.62%。經(jīng)兩種方法檢測共發(fā)現(xiàn)染色體正常者415例，異常者397例，異常率為48.89%。流產(chǎn)胚胎的染色體異常類型分類見表1。

2.2自然流產(chǎn)夫婦染色體核型檢測情況

在812對(1 624例)自然流產(chǎn)夫婦中，經(jīng)染色體檢查發(fā)現(xiàn)存在染色體異常者61例(平衡易位29例，羅伯遜易位7例，倒位4例，性染色體異常17例，其他異常4例)，染色體異常率為3.76%；在200例正常對照組夫婦中發(fā)現(xiàn)染色體平衡易位2例，染色體異常率為1.00%，兩者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3雙親染色體異常與胚胎染色體異常的關(guān)聯(lián)性情況

實(shí)際工作中，可以通過多種途徑完成會計核算工作，比如建立賬本，對各類支出收益進(jìn)行統(tǒng)一記錄和整理；還可以通過填制和審核憑證、成本預(yù)估和計算、財產(chǎn)清點(diǎn)以及編寫會計報表等等，都是非常有效的方法。

在61對雙方之一存在染色體異常的自然流產(chǎn)夫婦中，其流產(chǎn)胚胎染色體異常率為73.77%；751對雙方染色體均正常的自然流產(chǎn)夫婦其流產(chǎn)胚胎染色體異常率為46.87%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；采用Pearsonχ2獨(dú)立性檢驗(yàn)，結(jié)果表明，流產(chǎn)胚胎的染色體異常與雙親染色體異常之間存在相關(guān)性，見表3。

表1397例自然流產(chǎn)胚胎染色體異常結(jié)果分布

Table 1 Abnormal chromosome of 397 cases of spontaneous abortion

表21 624例自然流產(chǎn)夫婦與200例對照病例染色體比較的結(jié)果(n)

Table 2　Comparison of chromosome between 1 624 cases of spontaneous abortion and 200 cases of controls(n)

表3流產(chǎn)胚胎染色體異常與雙親染色體異常的關(guān)系

Table 3Correlation between miscarried embryos' chromosomal abnormality and parents’ chromosomal abnormality

雙親染色體結(jié)果 流產(chǎn)胚胎染色體結(jié)果 正常(n)異常(n)異常率(%)χ2PcP正常(751對)39935246.8716.3370.0000.1400.000異常(61對)164573.77合計(812對)41539748.89

2.4不同年齡組和不同流產(chǎn)次數(shù)及不同孕周流產(chǎn)胚胎染色體情況

對812例自然流產(chǎn)組織根據(jù)孕婦的年齡分組，<35歲者其流產(chǎn)胚胎染色體異常率為46.29%(337/728)，≥35歲者為71.43%(60/84)，兩者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=19.044，P<0.05)，見表4。

根據(jù)孕婦曾發(fā)生的自然流產(chǎn)次數(shù)分組，其中流產(chǎn)≤2次者677例，流產(chǎn)>2次者135例，流產(chǎn)胚胎的染色體異常率分別為49.63%(336/677)和45.18%(61/135)，兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.890，P>0.05)。

根據(jù)自然流產(chǎn)發(fā)生的孕周不同分組，早期流產(chǎn)(<12周)與晚期流產(chǎn)(≥12周)染色體異常率分別為50.54%和32.43%，兩者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.827，P<0.05)，見表5。

表4不同年齡組孕婦流產(chǎn)胚胎染色體異常率比較的結(jié)果[n(%)]

Table 4　Comparison of chromosomal abnormality rate between groups of different maternal age [n(%)]

表5不同時期流產(chǎn)胚胎的染色體異常率(n)

Table 5 Chromosomal abnormality rate of early and late abortion tissues(n)

3討論

染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)的異常改變稱之為染色體畸變，是引起染色體病的原因。具有染色體異常的胚胎，除少數(shù)可存活但伴有先天性多發(fā)畸形外，大部分發(fā)生流產(chǎn)或死亡。

3.1自然流產(chǎn)夫婦及流產(chǎn)胚胎染色體異常結(jié)果的分析

2004年Stephenson等報道顯示50%～70%自然流產(chǎn)與胚胎染色體異常有關(guān)，染色體異常中約86%為數(shù)目異常，結(jié)構(gòu)異常僅占6%，包括嵌合型在內(nèi)的其他異常占8%。在導(dǎo)致自然流產(chǎn)的三體型中，16三體對人類胚胎發(fā)育的影響幾乎是致死性的，主要表現(xiàn)為妊娠流產(chǎn)，是早期自然流產(chǎn)中最常見的染色體異常類型，其次為22三體，迄今國外報道22三體患兒最長存活時間為3年[5]。

3.2自然流產(chǎn)胚胎染色體與雙親染色體相關(guān)性分析

夫婦任何一方的染色體易位或倒位、缺失等都可使下一代的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，致使胎兒染色體為部分三體或缺失，發(fā)生流產(chǎn)、死胎。

染色體易位是引起自然流產(chǎn)的常見病因之一，包括平衡易位和羅伯遜易位。根據(jù)同源染色體相互配對、分離和交換的規(guī)律，平衡易位攜帶者可以形成18種類型的配子，僅1種正常，1種為平衡易位型，其余均為異常配子，分別與正常配子結(jié)合成合子時，多因染色體不平衡發(fā)生流產(chǎn)、死胎等。羅伯遜易位分非同源染色體和同源染色體之間的易位。同源羅伯遜易位攜帶者不能產(chǎn)生正常配子，只能形成三體型或單體型個體，除13三體和21三體可能出現(xiàn)異?；町a(chǎn)兒外，其他妊娠都會以自然流產(chǎn)告終。非同源染色體羅伯遜易位攜帶者與正常染色體配對時，可形成6種不同合子：1/6為正常個體，1/6與親代相同的易位染色體，其余4/6為異常染色體，這些異常染色體主要表現(xiàn)為自然流產(chǎn)。在具有自然流產(chǎn)史的夫婦中，約60%的易位是互換易位，40%是羅伯遜易位。女性平衡易位的發(fā)生率是男性的2倍多[6]。

染色體倒位分為臂間倒位和臂內(nèi)倒位兩種，一般而言，其倒位片段越短則重復(fù)和缺失的部分越長，形成正常配子的可能性越小，患者在生育下一代中，導(dǎo)致自然流產(chǎn)、不孕、畸胎或死胎的比例可能越高。

本文研究結(jié)果提示流產(chǎn)胚胎的染色體異常與雙親染色體異常之間存在相關(guān)性。

3.3胚胎染色體異常與孕婦年齡關(guān)系的分析

多數(shù)染色體三體與孕婦的年齡有關(guān)，但是孕婦高齡對每一對染色體的影響卻未必一致，從細(xì)胞學(xué)、遺傳學(xué)的角度看，常染色體三體更容易受到母親來源細(xì)胞減數(shù)分裂的影響。目前孕婦年齡與Down氏綜合征的關(guān)系已被肯定，發(fā)病風(fēng)險隨孕婦年齡增大而升高。Zimmermann等(1996年)研究報道，孕婦預(yù)產(chǎn)期年齡≥30歲，Down氏綜合癥發(fā)生率為2‰；預(yù)產(chǎn)期年齡≥35歲為6‰；預(yù)產(chǎn)期年齡≥40歲為15‰；預(yù)產(chǎn)期年齡≥45歲為5%。

然而，孕婦年齡對常染色體三體發(fā)生的影響機(jī)制還不清楚，可能與生殖細(xì)胞老化及合子早期所處的宮內(nèi)環(huán)境有關(guān)。卵子老化，在以后的減數(shù)分裂過程中容易產(chǎn)生染色體不分離而導(dǎo)致染色體異常，所以高齡是引起流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常的一個重要原因[7]。

3.4流產(chǎn)次數(shù)與異常染色體核型關(guān)系的分析

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指不足20周孕齡的連續(xù)>2次的自然流產(chǎn)。在RSA已知病因中，遺傳學(xué)因素約占5%。RSA具有顯著的家族聚積性，具有RSA夫婦遺傳關(guān)聯(lián)的親屬發(fā)生流產(chǎn)的幾率明顯高于普通人群[8]。國內(nèi)陳雪(2004年)有文獻(xiàn)報道，第1次流產(chǎn)染色體異常率更高，隨著流產(chǎn)次數(shù)的增加，染色體異常的頻率呈下降趨勢，與本研究一致，在本研究中有135例反復(fù)自然流產(chǎn)病例，其中染色體異常者61例，與<3次自然流產(chǎn)比較染色體異常率略低，但兩者間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：李春芳]

Genetic etiological analysis of spontaneous abortion in Weifang

TAO Hua-juan, CAI Xu-ying, LU Xing-jun, LI Yan, SUN Li-ning

(Department of Genetics, WeiFang Maternal and Child Health Hospital, Shandong Weifang 261011, China)

2014-12-15

陶華娟(1975-)，女，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事產(chǎn)前診斷與遺傳咨詢工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.02.035

R714.21

A

1673-5293(2016)02-0249-03