胡珊蓮

(上海市靜安區(qū)江場西路上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司，上海靜安 200436)

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便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測牛O型口蹄疫抗體水平的效果試驗

胡珊蓮

(上海市靜安區(qū)江場西路上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司，上海靜安 200436)

采用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒和傳統(tǒng)液相阻斷試劑盒，同時對117份牛血清樣品進行口蹄疫O型抗體水平檢測，以探討其相關(guān)性和特點。結(jié)果表明：便捷式液相阻斷ELISA試劑盒與傳統(tǒng)液相阻斷試劑盒的檢測結(jié)果相比，kappa值為0.84，具有高度一致性；檢測時間，便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測為2 h，傳統(tǒng)式檢測則需時5.25 h。應(yīng)用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒對上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司下屬牧場檢測牛血清樣品8729份，O型口蹄疫免疫抗體合格率為96.9%。

O型口蹄疫；液相阻斷ELISA試劑盒；免疫抗體；荷斯坦牛

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄動物?？谔阋卟《?FMDV)屬小RNA病 毒科，口蹄疫病毒屬。完整的FMDV，無囊膜，僅由衣殼包裹。我國將口蹄疫與牛瘟、牛傳染性胸膜肺炎、牛海綿狀腦病等動物疫病列為一類動物疫病。

口蹄疫在世界多個地區(qū)廣泛流行，發(fā)病率高，給養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失(特別是養(yǎng)牛業(yè)和養(yǎng)豬業(yè))，我國每年投入大量人力、物力用于疫苗免疫。因此，采用科學(xué)合理的檢測方法對疫苗抗體水平進行檢測顯得十分重要。傳統(tǒng)液相阻斷ELISA試劑盒因其靈敏、準(zhǔn)確、可以半定量等優(yōu)點，在口蹄疫免疫抗體檢測中應(yīng)用廣泛，但步驟繁瑣、反應(yīng)時間較長等弊端給檢測工作帶來了不少麻煩。為進一步了解和評價便捷式液相阻斷ELISA試劑盒的應(yīng)用效果，試驗通過便捷式液相阻斷ELISA試劑盒和傳統(tǒng)式液相阻斷試劑盒對117份牛血清樣品進行牛O型口蹄疫抗體水平檢測，并結(jié)合便捷式液相阻斷試劑盒對上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司牧場8729份牛血清樣品進行牛O型口蹄疫抗體水平檢測，以考察其應(yīng)用效果。

1　材料與方法

1.1血清采樣隨機采集上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司下屬牧場荷斯坦牛血清樣品117份；另于2015年11月至2016年4月期間采集荷斯坦牛送檢血清樣品8729份，檢測牛O型口蹄疫抗體水平及免疫抗體合格率。所有樣品均為口蹄疫疫苗普免后21-23 d采集的新鮮血清樣品。

1.2檢測試劑盒便捷式液相阻斷ELISA檢測試劑盒由河南洛陽某信息科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：E151027。傳統(tǒng)式液相阻斷ELISA檢測試劑盒由中國農(nóng)科院某獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20150624101-2。

1.3檢測方法嚴(yán)格按兩種檢測試劑盒說明書操作。便捷式ELISA檢測試劑盒以病毒抗原阻斷50%反應(yīng)的450 nm處OD值為臨界值，待檢樣品OD值>臨界值,判為陰性；待檢樣品OD值≤臨界值，判為陽性。每份待檢樣品系列梯度稀釋中，陽性孔的最高稀釋倍數(shù)即為該待檢樣品的抗體效價。牛、羊：抗體效價≥1∶128，99%以上保護。傳統(tǒng)式ELISA檢測試劑盒以病毒抗原對照D492nm值的50%為臨界值，被檢血清稀釋孔D492nm值>臨界值，判為陰性；D492nm值≤臨界值，判為陽性，陽性孔的D492值等于臨界值時所對應(yīng)的稀釋度為該份血清樣品的抗體滴度。牛、羊抗體滴度≥1∶128，為保護。

2　結(jié)果與分析

2.1檢測步驟與時間詳見表1。

表1　兩種試劑盒檢測步驟與時間比較

由表1可見，便捷式液相阻斷ELISA檢測試劑盒操作簡便，檢測總試時間較短，僅為傳統(tǒng)式液相阻斷ELISA檢測試劑盒操作時間的1/3左右。且便捷式檢測試劑盒顯色液不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，避免了工作人員接觸OPD底物的隱患(有報道稱OPD具有致異變性)。

2.2檢測結(jié)果比對詳見表2。

由表2可見，兩種模式檢測血清樣品117份的合格率分別為76.92%和74.36%，兩者合格樣品的符合率為97.70%，不合格樣品符合率為83.33%。經(jīng)kappa值比較，兩種試劑盒檢測結(jié)果的kappa值大于0.8(Kappa判定： 大于0.8為高度一致， 0.6-

表2　兩種檢測試劑盒的檢測結(jié)果比對

0.8為一致，0.4-0.6為一般，小于0.4為差)。檢測結(jié)果表明，便捷式和傳統(tǒng)式液相阻斷ELISA試劑盒檢測牛血清O型口蹄疫抗體水平的符合率為高度一致。

2.3便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測牛O型口蹄疫免疫抗體水平結(jié)果2015年11月至2016年4月，經(jīng)對上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司所屬牧場牛群于口蹄疫疫苗普免后21～23 d采集血樣，采用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測血樣8729份。經(jīng)檢測，免疫合格樣品8462份，合格率為96.9%，檢測方法簡便、快速，并未發(fā)現(xiàn)便捷式液相阻斷ELISA試劑盒有何不穩(wěn)定現(xiàn)象。

3　小結(jié)與討論

根據(jù)本次檢測結(jié)果，便捷式液相阻斷ELISA試劑盒在加樣步驟和反應(yīng)時間方面進行了適當(dāng)改進，實驗原理仍為液相阻斷ELISA：血清中特異性抗體阻斷病毒抗原與包被抗體酶結(jié)合物結(jié)合。

檢測結(jié)果表明，便捷式液相阻斷ELISA試劑盒與傳統(tǒng)液相阻斷ELISA試劑盒檢測結(jié)果具有高度一致性，采用便捷式液相阻斷ELISA試劑盒檢測牛O型口蹄疫抗體水平，可提高工作效率，降低人工成本，未見任何不穩(wěn)定現(xiàn)象，值得推廣應(yīng)用。

2016-07-01

S858.23

A

1005-7307(2016)05-0004-003