朱肖杰,朱小敏,馬麗霞,王傳棟,夏毅然,孟建文
(山東省藥學(xué)科學(xué)院,山東省醫(yī)用高分子材料重點實驗室,濟南 250101)
介入栓塞術(shù)是介入治療中的一項重要技術(shù),它是將栓塞材料有控制的注入到病變器官的供血血管內(nèi)或病變血管內(nèi),使之發(fā)生閉塞,中斷血供,以達(dá)到控制出血,控制血管性病變,治療腫瘤,消除病變器官功能的目的。PHEMA液體栓塞材料是一種新型的血管內(nèi)非粘附性液體栓塞材料,由聚合物和顯影劑溶于乙醇水溶液配制而成,其栓塞原理與Onyx栓塞材料類似[1-2],但卻避免了二甲亞礬的毒性[3]。
PHEMA液體栓塞材料屬于三類植入醫(yī)療器械,用于病變部位的血管栓塞,對材料的安全性要求較高,其參與聚合的主要單體為甲基丙烯酸-β-羥乙酯,對殘留單體的控制是保證材料安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié),因此,建立共聚物中殘留單體的檢測方法是非常必要的。目前的文獻(xiàn)報道中,對丙烯酸類[4-6]和甲基丙烯酸甲酯[7-8]含量的檢測多采用氣相色譜法,因丙烯酸和甲基丙烯酸類沸點多在150℃以下,而甲基丙烯酸-β-羥乙酯沸點為205~208℃,不適合氣相色譜法。高效液相色譜法對超痕量甲基丙烯酸-β-羥乙酯單體進行定量分析,國內(nèi)外未見公開報道。本研究主要建立了高效液相色譜法對殘留單體甲基丙烯酸-β-羥乙酯的檢測方法,并對線性方程進行了驗證。
自制聚合物PHEMA;乙腈,天津賽孚瑞科技有限公司;甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)品,上海士鋒生物科技有限公司。
Waters515型高效液相色譜儀,配Waters 2489紫外/可見檢測器;DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器,鞏義市予華儀器有限公司;電子天平,d=0.1 mg,賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;101FXB-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱,上海樹立儀器儀表有限公司。
色譜柱:AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流動相:乙腈-水(30∶70);流速:1.0 ml/min;檢測波長:220 nm;進樣量:20 μL
2.4.1甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液 準(zhǔn)確稱取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)品0.0100 g于250 ml燒杯中,加入150 ml去離子水?dāng)嚢枞芙?,之后? 000 ml容量瓶定容,得0.01 g/L的儲備液,備用。
2.4.2供試品溶液的制備 取聚合物PHEMA 0.2 g,分別加入20 ml去離子水,于37℃水浴中恒溫浸提,浸提時間為24 h,連續(xù)浸提三次,取浸提液過濾并檢測,取三次數(shù)值之和做為單體的殘留量。
2.4.3測定方法 取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液20 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖,外標(biāo)法計算含量。
取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液,用去離子水稀釋并分別配制0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的HEMA標(biāo)準(zhǔn)溶液,在2.3項色譜條件下進行分析,以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)(x),峰面積為縱坐標(biāo)(y)作線性回歸分析[9],得線性回歸曲線見圖1,線性回歸方程為:y=41622x+6877,R2=0.9992,由此可見,單體甲基丙烯酸-β-羥乙酯在質(zhì)量濃度為0.1~4.0 mg/L的范圍內(nèi)線性良好。
圖1 峰面積對單體濃度的關(guān)系
取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液,依次稀釋并測定,以3倍信噪比的計算方法得檢測下限為0.01 mg/L。
取2.0 mg/L濃度的甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照2.3項下的色譜條件連續(xù)進樣5次,測得峰面積RSD為1.07%,精密度良好。
已知含量分別為0.41、1.56、3.07 mg/L 的供試品,各取3份,并分別加入相當(dāng)于最終濃度的0.5、2.0、4.0 mg/L的甲基丙烯酸-β-羥乙酯標(biāo)準(zhǔn)液,將9份樣品按照2.3項下的色譜條件進樣分析,得平均加標(biāo)回收率(%)和RSD(%)見表1,計算得加標(biāo)回收率為99.5%~102.0%,RSD≤2%。
表1 殘留單體的加標(biāo)回收率
按照2.4方法對PHEMA聚合物進行處理并浸提,浸提液過濾并按2.3色譜條件進行分析,按照外標(biāo)法以峰面積對單體濃度計算,三個批次的樣品測得的峰面積和單體濃度見表2。由表2可以看出,三個批次浸提液測得的殘留單體之和分別為0.4443、0.4589、0.4413 mg/L,計算得聚合物中的單體含量為4.443×10-3%,4.589×10-3%,4.413×10-3%。圖2為1號樣品第一次浸提液的液相色譜圖。
表2 樣品單體殘留量
圖2 樣品浸提液的色譜圖
本研究建立了一種對PHEMA液體栓塞材料中單體殘留的超痕量分析方法,檢測下限可達(dá)0.01 mg/L,精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.07%,回收率在99.5%~102.0%之間,回收率相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2%,單體濃度在0.1~4.0 mg/L的范圍內(nèi),與峰面積成良好的線性關(guān)系。本方法具有檢測限低,操作簡單,靈敏度高等特點。