楊興變 李洪慶

摘要[目的]利用色譜指紋圖譜技術(shù)建立銀杏葉膠囊質(zhì)量監(jiān)控方法。[方法]采用 RPHPLCDAD方法和中藥色譜指紋圖譜相似度軟件對銀杏葉膠囊進行了質(zhì)量監(jiān)控研究。色譜柱為InertsilRODS3 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為0.4%磷酸水（A）-乙腈（B）系統(tǒng)，梯度洗脫；流速為1.00 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為360 nm。[結(jié)果]銀杏葉膠囊與對照品全峰匹配，其相似度為0.901～0.933。[結(jié)論]該方法操作簡便、穩(wěn)定、重復(fù)性好，為銀杏葉膠囊質(zhì)量控制提供實踐依據(jù)及有效方法。

關(guān)鍵詞銀杏膠囊；質(zhì)量監(jiān)控；色譜指紋圖譜

中圖分類號S789.4；R917文獻標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2016）04-197-02

Study on Quality Control for the Ginkgo Leaf Capsule by RPHPLCDAD Method

YANG Xingbian， LI Hongqing*（Center of Biochemical Engineering in Guizhou Province， Guizhou University， Guiyang， Guizhou 550025）

Abstract[Objective] To establish the quality control method for the ginkgo leaf capsules by chromatographic fingerprint. [Method] RPHPLCDAD method and the similarity evaluation system of traditional Chinese medicine chromatographic fingerprint were used to analyze the qualities of the ginkgo leaf capsules. A InertsilR ODS3 C18 （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used as analysis column and 0.4% phosphoric acid solution （A） / acetonitrile （B） as mobile phase at the flow rate of 1.00 mL/min with gradient elution. The column temperature was 30 ℃ and detecting wavelength was 360 nm. [Result] Compared with the reference substance， the similarities of the ginkgo leaf capsules were from 0.901 to 0.933. [Conclusion] The method is proved convenient， stable and repeatable， the study can provide practical basis and effective method for the quality control of the ginkgo leaf capsule.

Key wordsGinkgo leaf capsules； Quality control； Chromatographic fingerprint

2015年版《中國藥典》記載銀杏葉膠囊有3種規(guī)格：①每粒含總黃酮苷9.6 mg，萜類內(nèi)酯2.4 mg；②每粒含總黃酮苷19.2 mg，萜類內(nèi)酯4.8 mg；③每粒裝0.25 g（含總黃酮醇苷40 mg、萜類內(nèi)酯10 mg）[1]。這3種規(guī)格均僅規(guī)定了銀杏葉膠囊有效成分總量，利用這種僅規(guī)定總含量的西藥化學(xué)藥品質(zhì)量控制方式來對其進行質(zhì)量評價，難以避免個別廠商人為地在產(chǎn)品中摻入槲皮素、山奈素等以提高總黃酮含量的不良行為，而此類劣質(zhì)產(chǎn)品利用這種質(zhì)量控制方式進行質(zhì)量評價，是難以判定其優(yōu)劣的。

目前，中藥指紋圖譜已成為國際上公認(rèn)的中藥質(zhì)量控制最有效的模式[2-3]，其具有整體性、模糊性等特點，可以鑒別產(chǎn)品真?zhèn)危u判制備工藝的合理性，能有效地對中藥進行整體性描述，達到控制產(chǎn)品質(zhì)量的目的[4-5]。經(jīng)文獻查閱，關(guān)于銀杏葉、銀杏葉提取物及銀杏注射液指紋圖譜研究的報道很多[6-9]，但銀杏葉膠囊及其相關(guān)的指紋圖譜的研究未見報道。因此，筆者利用色譜指紋圖譜技術(shù)對以注射劑用銀杏葉提取物為原料制成的銀杏葉膠囊進行了質(zhì)量監(jiān)控研究，為銀杏葉膠囊質(zhì)量控制提供實踐依據(jù)，也為有力地打擊個別廠商人為添加的不良行為提供行之有效的方法。

1材料與方法

1.1主要儀器島津高效液相色譜儀（LC20AT二元泵、手動進樣器、SPDM20A二極管陣列檢測器、CTO10AS柱溫箱、LC solution工作站，日本島津公司）；InertsilRODS3C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；超聲儀（SG1200HE，上海冠特超聲儀器有限公司）；電子天平（AL204IC，上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；SZ93自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）；一次性針頭濾器（0.45 μm）；一次性使用無菌注射器等。

1.2主要試劑色譜純乙腈（TEDIA company）；分析純磷酸（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；雙蒸水（自制）。

1.3原材料制備

1.3.1對照品溶液的制備。精密稱取0.020 0 g銀杏葉提取物（中國藥品生物制品鑒定所提供，編號110866-200202），10 mL 15%乙腈溶解，超聲3 min，靜置10 min，0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

1.3.2供試品溶液的制備。注射劑用銀杏葉提取物，其制備同“1.3.1”。銀杏葉膠囊，精密稱取銀杏葉膠囊內(nèi)容物，稱取量按其內(nèi)容物所含注射劑用銀杏葉提取物0.020 0 g換算，其制備同“1.3.1”。

1.4試驗方法

1.4.1色譜條件。色譜柱為InertsilRODS-3C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長360 nm；流動相為0.4%磷酸水（A）-乙腈（B）；進樣量10 μL；柱溫30 ℃；流速1.00 mL/min；梯度洗脫[10-11]，即流動相B的變化為0～4 min，15%～17%；4～20 min，17%；20～25 min，17%～21%；25～33 min，21%～22%；33～35 min，22%～26%；35～40 min，26%～30%；40～55 min，30%～35%；55～58 min，35%。

1.4.2方法學(xué)考察。

1.4.2.1精密度試驗。取對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄各色譜圖，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度計算軟件，進行相似度分析。

1.4.2.2重現(xiàn)性試驗。精密稱取對照品6份，按“1.3.1”方法制備及“1.4.1”色譜條件分析，記錄各色譜圖，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度計算軟件，進行相似度分析。

1.4.2.3穩(wěn)定性試驗。取對照品溶液，分別于配制后0、4、8、16、24、48 h進樣，記錄各色譜圖，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度計算軟件，進行相似度分析。

1.4.3樣品測定。將供試品按“1.3.2”方法制備，按“1.4.1”色譜條件分析，記錄0～58 min色譜圖，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度計算軟件，進行相似度分析。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察

2.1.1精密度試驗。測得各色譜圖全峰匹配相似度均為1.000，表明儀器精密度較好。

2.1.2重現(xiàn)性試驗。測得各色譜圖全峰匹配相似度的RSD=0.19%，說明該法重現(xiàn)性較好。

2.1.3穩(wěn)定性試驗。測得各時間點色譜圖全峰匹配相似度的RSD=0.21%，說明對照品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4對照品指紋圖譜。由圖1可知，在“1.4.1”色譜條件下，分析時間為58 min，基線平穩(wěn)，分離度良好。

2.2銀杏葉膠囊測試由表1可知，注射劑用銀杏葉提取物及銀杏葉膠囊與對照品全峰匹配，其相似度分別為0.906～圖1對照品銀杏葉提取物指紋圖譜（S1）

Fig.1Fingerprint of reference ginkgo leaf extracts（S1）0.940、0.901～0.933。與對照品相比，注射劑用銀杏葉提取物總峰面積大，非共有峰面積比例小，這是注射劑用銀杏葉提取物是由銀杏葉提取物精制而成的結(jié)果；注射劑用銀杏葉提取物制成膠囊以后，相似度、總峰面積及非共有峰比例均有略微的下降，這可能是添加輔料的緣故。由圖2可知，注射劑用銀杏葉提取物和銀杏葉膠囊與對照品相比較，主要差別在于0～15 min，此時段出峰多，且峰面積相對較大，而50～55 min峰面積相對較小，這可能是它們水溶性更好的原因。

3結(jié)論與討論

在供試品總黃酮苷、萜類內(nèi)酯及總銀杏酸含量等均符合2015年版《中國藥典》銀杏葉提取物要求的基礎(chǔ)上[1]，該研究利用色譜指紋圖譜技術(shù)對以注射劑用銀杏葉提取物為原料制成的銀杏葉膠囊進行了質(zhì)量監(jiān)控研究，建立了一個以銀杏葉提取物為對照，對原料及其產(chǎn)品進行監(jiān)控的指紋圖譜質(zhì)量控制方法，該方法操作簡便、穩(wěn)定、重復(fù)性好，能很好地表征銀杏葉膠囊的內(nèi)在質(zhì)量。研究結(jié)果可顯示出原料到產(chǎn)品在成分、組成比例上是否一致，可以有效地避免人為添加的弊端，并能實時掌握生產(chǎn)過程動態(tài)變化，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定，為其質(zhì)量控制提供實踐依據(jù)。

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