高效液相色譜法測(cè)定亞麻籽中木酚素的含量

馮小慧 ，李國(guó)銀 ，宋 潔 ，邵 海

［1.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（呼和浩特），內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院資源環(huán)境與檢測(cè)技術(shù)研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；3.赤峰市農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全管理站，內(nèi)蒙古 赤峰 024000］

高效液相色譜法測(cè)定亞麻籽中木酚素的含量

馮小慧1，2，李國(guó)銀1，2，宋 潔1，2，邵 海3

［1.農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（呼和浩特），內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院資源環(huán)境與檢測(cè)技術(shù)研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；3.赤峰市農(nóng)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全管理站，內(nèi)蒙古 赤峰 024000］

［目的］建立高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定亞麻籽中木酚素的含量。［方法］采用液—液萃取法提取樣品，以木酚素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定量，利用Agilent C18Sym 250 mm×4.6 mm色譜柱，以甲醇水溶液（甲醇∶水=4∶6）為流動(dòng)相，采用紫外檢測(cè)器（波長(zhǎng)為290 nm）檢測(cè)。通過(guò)加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn)，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。［結(jié)果］亞麻籽中木酚素回收率為95%～108%，精密度RSD為7.43%。不同實(shí)驗(yàn)室復(fù)核檢測(cè)木酚素含量接近，重復(fù)性好。［結(jié)論］該方法可用于測(cè)定亞麻籽中木酚素的含量，為木酚素的工業(yè)化提純提供了可靠的試驗(yàn)基礎(chǔ)。

亞麻籽；木酚素；高效液相色譜；測(cè)定

亞麻籽中含有豐富的木酚素，木酚素具有非常高的抗氧化活性，是公認(rèn)的抗癌物質(zhì)［1］，具有抗癌［2］、抗真菌和抗過(guò)敏性疾病的功能。木酚素是一種植物雌激素［3］，可以延緩女性的更年期，也可以緩解更年期癥狀，可以預(yù)防乳腺癌、前列腺癌［4］和結(jié)腸癌［5］。亞麻是地球上木酚素含量最高的植物，其木酚素含量是其他植物的800倍，號(hào)稱木酚素之王。木酚素主要存在于亞麻的種皮中［6-8］，提純木酚素可以提高亞麻籽的附加值。為了實(shí)現(xiàn)亞麻籽中木酚素含量的準(zhǔn)確檢測(cè)，該試驗(yàn)建立了亞麻籽中木酚素含量測(cè)定的高效液相色譜法，優(yōu)選了液相色譜條件。

1 儀器、材料和試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器（波長(zhǎng)為 290 nm）；電子天平：感量 0.1 mg和 0.01 g；高速離心機(jī)：配50 mL離心管；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：配250 mL茄型瓶；樣品研磨機(jī)；加熱回流提取裝置：配250 mL三角瓶；恒溫水浴振蕩器；自然對(duì)流烘箱；備有變色硅膠的干燥器；索氏提取器。

1.2 材料 樣品：亞麻籽，由農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心實(shí)驗(yàn)室保存。標(biāo)準(zhǔn)品：上海源葉生物科技有限公司生產(chǎn)，純度≥98%，色譜級(jí)。

1.3 試劑 無(wú)水乙醚。無(wú)水乙醇。60%乙醇溶液。1.8 mol/L氫氧化鈉溶液。鹽酸溶液。甲醇，色譜純。去離子水。 甲醇水溶液∶甲醇∶水=4∶6。

2 方法

2.1 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取樣品1.00 g（精確至0.01 g）于濾紙筒（直徑 2 cm，高約 7.5 cm）內(nèi)，置于索氏提取器中，用無(wú)水乙醚浸泡12 h后，再用索氏提取器加熱回流提取8 h，取出樣品（連同濾紙筒），在室溫通風(fēng)條件下放置5 h，在（105±5）℃下烘2 h，取出，放入干燥器中，冷卻至室溫。打開濾紙筒，將樣品置于250 mL三角瓶中，加入15 mL 60%乙醇溶液，在50℃條件下回流提取4 h。將提取液和殘?jiān)D(zhuǎn)入離心管中，以6 000 r/min離心10 min，取上清液，向殘?jiān)屑尤?5 mL 60%乙醇溶液；重復(fù)上述操作1次，合并上清液，待凈化處理。

圖1 木酚素標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 木酚素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖3 測(cè)定樣品色譜圖

表1 回收率和精密度檢測(cè)（n=6）

表2 不同實(shí)驗(yàn)室HPLC檢測(cè)木酚素的含量 g/100 g

向提取液中加入10 mL 1.8 mol/L氫氧化鈉溶液，在40℃條件下振蕩堿解40 min。用鹽酸溶液調(diào)pH值至4～6，過(guò)濾，將濾液移入茄型瓶中，45℃真空濃縮至近干。用甲醇水溶液溶解并定容至200 mL，搖勻，過(guò)膜，待上機(jī)分析。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 準(zhǔn)確稱取木酚素標(biāo)準(zhǔn)品15.0 mg，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度為1 500.0 μg/mL的木酚素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20℃條件下儲(chǔ)存，備用。

木酚素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：使用前，將儲(chǔ)備液用甲醇水溶液稀釋， 工作曲線溶度為 10、25、50、75、100、120 μg/mL，上機(jī)備用。

2.3 高效液相色譜定量色譜條件 色譜柱：C18Sym Agilent 250 mm×4.6 mm；流動(dòng)相：甲醇∶水=4∶6；流速：1.0 mL/min；波長(zhǎng)：290 nm；柱箱溫度：35℃；進(jìn)樣量：20 μL。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 配制不同濃度的木酚素標(biāo)準(zhǔn)溶液，以HPLC測(cè)定其峰面積。木酚素濃度與峰面積的關(guān)系為y=3.53x-1.96，相關(guān)系數(shù)r=0.9999（見圖1）。 結(jié)果表明木酚素在1.54～308.00 μg/mL范圍內(nèi)線性良好。

3.2 試驗(yàn)方法的加標(biāo)回收和精密度試驗(yàn) 在樣本中添加不同濃度的木酚素標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)。結(jié)果顯示（見表1），不同水平的木酚素各組分的平均回收率為95%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為7.43%。

3.3 樣品含量測(cè)定 按照2.1中的方法對(duì)輪選3號(hào)、Y-0310、9925-7-4-3-2、9910-10、2000-16、同亞12號(hào)和99-42共6種亞麻籽進(jìn)行樣品前處理，采用HPLC法檢測(cè)6種亞麻籽中木酚素含量的測(cè)定。結(jié)果見圖2、圖3和表2、表3。由圖2和圖3可知，檢測(cè)樣本與木酚素標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間一致，峰形較好。

表3 HPLC檢測(cè)6種亞麻籽中木酚素的含量 g/100 g

將該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)樣本送至4家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行方法復(fù)核檢測(cè)。由表2可知，復(fù)核實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)木酚素含量（平均值）與該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)參考值接近，說(shuō)明檢測(cè)方法在不同的實(shí)驗(yàn)室重復(fù)性較好。

由表3可知，6種亞麻籽提取物木酚素含量與上海復(fù)核單位檢測(cè)結(jié)果接近，說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)室建立的HPLC檢測(cè)6種亞麻籽中木酚素含量的方法準(zhǔn)確、有效。

4 結(jié)論與討論

該研究通過(guò)無(wú)水乙醚脫脂、無(wú)水乙醇提取、C18色譜柱分離、HPLC法檢測(cè)亞麻籽中木酚素，檢測(cè)方法準(zhǔn)確、快速，回收率高，線性好。該試驗(yàn)建立的利用高效液相色譜法 （high performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定亞麻籽中木酚素的含量的方法便于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品檢測(cè)，為木酚素的工業(yè)化提供了可靠的依據(jù)。

［1］邵文捷，馮小慧，姚一萍，等.亞麻木酚素提取方法的初步研究［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2013（1）：36-37.

［2］孫偉潔，楊宏志，李佩毅，等.溶劑法提取亞麻木酚素的工藝研究［J］.糧油加工，2009（2）：58-61.

［3］馮小慧，張福金，邵文捷，等.亞麻木酚素實(shí)驗(yàn)室提取的關(guān)鍵影響因子研究［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2013（5）：35-36.

［4］馮小慧，邵文捷，李國(guó)銀，等.亞麻木酚素提取方法研究［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2014（1）：30-31.

［5］陳志強(qiáng)，高嵐，鄭躍，等.正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選亞麻籽餅粕中亞麻木酚素的提取工藝 ［J］.天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，14（2）：1-3.

［6］胡曉軍.亞麻木酚素的營(yíng)養(yǎng)保健作用［J］.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2005（8）：36-37.

［7］楊宏志.亞麻籽中木脂素提取工藝的研究［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2005（4）：18-20，23.

［8］趙利，黨占海，李毅.亞麻木酚素研究進(jìn)展［J］.食品科學(xué)，2006，22（4）：88-93.

Determination of Lignan in Flaxseed by HPLC

FENG Xiao-hui1，2，LI Guo-yin1，2，SONG Jie1，2，SHAO Hai3
（1.Supervision，Inspection and Testing Centre of Agricultural Products Quality and Security （Hohhot），Ministry of Agriculture，Hohhot 010031，China；2.Institute of Resources，Environment and Detection Technology，Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences，Hohhot 010031，China；3.Management Station for Agricultural and Livestock Products Quality and Security of Chifeng City，Chifeng 024000，China）

［Objective］To establish a HPLC method for determination of lignan in flaxseed.［Methods］The samples were treated with liquid-liquid extraction;the standard substance of lignan was used to conduct quantitative analysis;Agilent C18Sym chromatographic column （250 mm×4.6 mm） was used to isolate;aqueous solution of methanol（methanol∶water=4∶6） was used as mobile phase;lignan were detected by UV detector with wavelength of 290 nm;methodology validation were conducted by using standard addition recovery test and precision test.［Results］The recovery of lignan in flaxseed ranged from 95%to 108%,and the RSD of precision was 7.43%.The rechecked results of determination of lignan in flaxseed by the established HPLC method from different laboratories were similar,which proved the good repeatability of the method.［Conclusion］The established HPLC method could be used for determination of lignan in flaxseed and provided reliable experimental basis for the industrial lignan purification.

flaxseed；lignan；HPLC；determination

TS201.2

A文章順序編號(hào)：1672-5190（2016）12-0017-02

2016-11-11

項(xiàng)目來(lái)源：內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院青年創(chuàng)新基金（2014 QNJJN05）。

馮小慧（1979—），女，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)工作。

（責(zé)任編輯：錢英紅）