段作文，韓 笑，陳麗靜，李浩戈，張 麗，張 良，范文麗，李天來，林景衛(wèi)*

（1．沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽 110866；2．沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，遼寧 沈陽 110866）

真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白（Fungal immunomodulatory protein，F(xiàn)IP）是近年在高等真菌中發(fā)現(xiàn)的一類與植物凝集素和免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)和免疫功能相似的小分子蛋白質(zhì)。1989年，Kino等[1]在靈芝（Ganoderma lucidum）菌絲體提取物中分離得到第一個真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白LZ-8（FIP-glu）后，人們又陸續(xù)在松杉靈芝（G. tsugae）、金針菇（Flammulina veltipes）、草菇（Volvariella volvacea）、紫靈芝（G. japoncium）、小孢子靈芝（G. microsporum）、紫芝（G. sinense）、樟芝（Antrodia camphorate）、茯苓（Poria cocos）、云芝（Trametes versicolor）、樹舌靈芝（Ganoderma applanatum；Gene Bank：AEP68179）、黑靈芝（Ganoderma astum）、血紅叢赤殼（Nectria haematococca）中發(fā)現(xiàn)了真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白，分別命名為FIP-fve，F(xiàn)IP-gts，F(xiàn)IP-vvo，F(xiàn)IP-gja，F(xiàn)IP-gmi，F(xiàn)IP-gsi，F(xiàn)IP-aca，F(xiàn)IP-pcp，F(xiàn)IP-tvc，F(xiàn)IP-gap，F(xiàn)IP-gas，F(xiàn)IP-nha[2-10]。

目前已知的FIPs的基因編碼區(qū)大小約為330～360 bp、分子量為13 kDa左右，由110～114個氨基酸殘基組成。富含天門冬氨酸和纈氨酸，缺乏組氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸。其N端氨基酸均為乙?；钄喟被醄11]。在目前所發(fā)現(xiàn)的FIPs中只有LZ-8中含有糖，含量約為1.3%，其他種類的FIPs都不含有糖。不同F(xiàn)IPs在一級結(jié)構(gòu)上非常相似，進(jìn)化上比較保守，氨基酸序列之間的同源性比較高，可達(dá)到60%～100%（圖1）。

圖1 不同F(xiàn)IP的系統(tǒng)進(jìn)化樹

臺灣Lin等人利用酵母雙雜交和定點突變的方法，發(fā)現(xiàn)天然有活性的FIPs為同源二聚體，其N端大約10個氨基酸形成α-螺旋，該結(jié)構(gòu)對于FIPs二聚體的形成具有重要作用[12]。還發(fā)現(xiàn)FIPs的二級結(jié)構(gòu)中富含β結(jié)構(gòu)，包括2個α-螺旋，7個β-折疊和1個β-轉(zhuǎn)角[13]。該結(jié)構(gòu)特點與免疫球蛋白重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)非常相似[14]。

2003年，Seow等使用懸滴法獲得了FIP-fve晶體。同年，Paaventhan等利用NaBr滲透對FIP-fve晶體進(jìn)行單向不規(guī)則晶體衍射，發(fā)現(xiàn)FIP-fve的N端緊接著α-螺旋有一個纖連蛋白折疊結(jié)構(gòu)——FNⅢ折疊，該結(jié)構(gòu)是7個β-折疊S型和8個β-折疊h形中間過渡構(gòu)型，也稱為假-h-型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。另外，安敏等利用滴氣象擴(kuò)散法得到了LZ-8的晶體結(jié)構(gòu)，與金針菇的晶體結(jié)構(gòu)非常相似[15]。因此表明，各種FIPs在一級結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)上都有一定的相似性，并且在高級結(jié)構(gòu)上與免疫球蛋白有著相似性。

1 真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的生物學(xué)功能

研究證實FIPs具有重要的生物學(xué)功能。具體包括以下幾個方面。

1.1 血細(xì)胞凝集活性

目前已知的幾種FIPs都被發(fā)現(xiàn)具有血細(xì)胞凝集活性，可以凝集不同哺乳動物的血紅細(xì)胞，對血紅細(xì)胞的凝集無種屬特異性和專一性。

LZ-8和LZ-9能夠凝集兔、鼠和綿羊血紅細(xì)胞，但是它們都不能凝集人類四種類型的血紅細(xì)胞（A、B、AB和O血型）[10]。而FIP-fve可以凝集人血紅細(xì)胞（A、B、AB和O血型）。FIP-vvo能凝集Wistar大鼠和綿羊血紅細(xì)胞[16]，但它也不能凝集人血紅細(xì)胞。FIP-tvc可凝集鼠血紅細(xì)胞[8]。另外，研究發(fā)現(xiàn)FIP-nha可以凝集綿羊、家兔、小鼠以及人O型血紅細(xì)胞[17]。

1.2 抗腫瘤活性

FIPs都具有抗腫瘤活性。重組表達(dá)的靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白（rLZ-8）可以誘導(dǎo)K562細(xì)胞、HL60細(xì)胞和白血病NB4細(xì)胞凋亡[18-19]。rFIP-fve和rFIP-gts都可以抑制A549腫瘤細(xì)胞的生長[20-23]。又發(fā)現(xiàn)FIP-gts還可抑制腫瘤細(xì)胞的移動，而人23-1型基因可以與其協(xié)同作用增強(qiáng)FIP-gts對癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的抑制作用[24]。

1.3 抗過敏反應(yīng)活性

FIPs具有抗過敏反應(yīng)活性。研究發(fā)現(xiàn)，LZ-8，F(xiàn)IP-vvo和FIP-fve都可以明顯地抑制小鼠足墊水腫反應(yīng)（Arthus反應(yīng)）和小鼠系統(tǒng)過敏性反應(yīng)。LZ-8還可以預(yù)防自主免疫性糖尿病，并且可以提高兔胰腺移植和小鼠皮膚移植的移植率，而且沒有任何副作用[25]。另外，還發(fā)現(xiàn)FIP-fve可以抑制嗜酸性粒細(xì)胞活性，這表明可能對與嗜酸性粒細(xì)胞有關(guān)的過敏癥如支氣管哮喘、過敏性鼻炎等具有療效[26]。FIP-fve還可以抑制卵清蛋白（OVA）引起的食物過敏反應(yīng)和治療羽刺皮癬螨2型抗原（Dp-2）引起的呼吸道炎癥[27]。

1.4 促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖活性

FIPs可促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞和人類外周血淋巴細(xì)胞增殖，并且呈現(xiàn)出與植物凝集素相似的劑量效應(yīng)曲線。LZ-8，F(xiàn)IP-fve和FIP-vvo能夠刺激淋巴細(xì)胞的增殖[28-30]。同時，F(xiàn)IPs在促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖過程中與植物凝集素具有協(xié)同作用，LZ-8，F(xiàn)IP-fve和FIP-vvo可分別與ConA，PHA和PHA共同促進(jìn)淋巴細(xì)胞的分裂。

1.5 誘導(dǎo)細(xì)胞因子表達(dá)

研究發(fā)現(xiàn)LZ-8可以增強(qiáng)白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2），IFN-γ，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α），IL-β等細(xì)胞因子的分泌[31]。FIP-fve可顯著地增強(qiáng)IL-2和IFN-γ的分泌[29]。而FIP-vvo可以顯著增強(qiáng)IL-2，IL-4，IFN-γ，TNF-α，淋巴毒素（LT）和IL-2的分泌。FIP-gsi也可以增強(qiáng)鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子（IL）-2，IL-3，IL-4，IFN-γ，TNF-α和IL-2受體（IL-2R）[32]。

雖然FIPs具有重要的生物學(xué)功能，但是關(guān)于它們臨床試驗應(yīng)用的報道不是很多，主要是因為不能大量穩(wěn)定地獲取這些蛋白。天然提取這些蛋白既耗時又費力，而且獲得的產(chǎn)品率很低，活性也不高，因此，怎樣高效率地表達(dá)這些FIPs，對于今后的實踐應(yīng)用至關(guān)重要。因此，目前人們廣泛利用基因工程的手段構(gòu)建一些表達(dá)載體使它們高效、穩(wěn)定地表達(dá)，以期為將來的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

2 FIPs的重組表達(dá)

目前，人們用于體外蛋白重組表達(dá)的系統(tǒng)主要有原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)兩種，原核表達(dá)系統(tǒng)主要是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，而真核表達(dá)系統(tǒng)主要包括酵母表達(dá)系統(tǒng)、植物表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（見表1）。

2.1 LZ-8的重組表達(dá)

2.1.1 LZ-8在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

采用CTAB法提取靈芝DNA，通過PCR擴(kuò)增LZ-8基因，擴(kuò)增產(chǎn)物可分別與載體pET21a，pET28b，pET30a連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞大腸桿菌BL21（DE3）中，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)，檢測出rLZ-8的產(chǎn)量分別是占菌體總蛋白的36.52%，70 mg/L，34.46 mg/L。

生物活性測定表明，rLZ-8蛋白在一定程度上可以延遲小鼠的免疫排斥過程，延長移植體存活時間，具有一定的免疫抑制活性，還可以凝集羊血紅細(xì)胞[32-35]。

2.1.2 LZ-8在酵母表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

克隆LZ-8基因，克隆后的LZ-8基因可與載體pPIC9p和PICZαA連接，通過電擊轉(zhuǎn)化法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS115中，經(jīng)甲醇連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，rLZ-8的表達(dá)效率分別為191.2 mg/L和350 mg/L[36-37]。

生物活性分析表明，rLZ-8可以刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖、增強(qiáng)鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-2，也可以抑制人白血病-NB4細(xì)胞的增殖。

LZ-8基因還可與載體pPICZαA連接、轉(zhuǎn)化到畢赤酵母X-33中，經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率可達(dá)34.4 mg/L。

表1 各種重組表達(dá)系統(tǒng)的比較

生物活性測定表明，rLZ-8可以凝集兔、鼠、綿羊和人血紅細(xì)胞[10]。

2.1.3 LZ-8植物表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

擴(kuò)增LZ-8基因，與載體p3300GB連接，構(gòu)成植物雙元表達(dá)載體pCAMLz8，將該載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌LBA4404中，最后通過葉盤轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)到煙草中。經(jīng)測定，rLZ-8在煙草中的表達(dá)量占煙草可溶性蛋白的0.18%，即每克新鮮葉片約含149.82 μg的rLZ-8[38]。

2.1.4 LZ-8在枯草芽孢桿菌和乳酸乳球菌中的重組表達(dá)

采用OE-PCR法擴(kuò)增LZ-8基因，擴(kuò)增后的LZ-8基因分別與載體pOA和pOAS連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到芽孢桿菌WB800細(xì)胞中，經(jīng)測定，rLZ-8表達(dá)效率分別是17.5 mg/L和13.2 mg/L。而在乳酸菌中的表達(dá)，LZ-8基因與載體pNZSLZ連接，轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞乳酸菌NZ9000細(xì)胞中，表達(dá)效率為1.24 mg/L。

生物活性測定表明，不同表達(dá)載體表達(dá)的rLZ-8具有不同的生物活性?？莶菅挎邨U菌WB800（pOA-LZ8）中表達(dá)的rLZ-8可以促進(jìn)hPBMC的增殖，而在乳酸乳球菌中表達(dá)的NZ9000（pNZSLZ）雖然可以促進(jìn)hPBMC的增殖，但是不顯著。枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的rLZ-8也可以促進(jìn)TNF-α的產(chǎn)生，而在NZ9000（pNZSLZ）產(chǎn)生的rLZ-8沒有此活性。三種來源的rLZ-8都可以顯著地增加IL-2/IL-4的比率[39]。

2.2 FIP-fve的重組表達(dá)

2.2.1 FIP-fve在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

構(gòu)建重組表達(dá)載體PET30a-FIP-fve，該載體可分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DE3和M15中，經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率分別為29.1 mg/L[40]和得到的可溶性蛋白占M15總可溶性蛋白的7.4%[30]。同時，F(xiàn)IP-fve基因也可與載體pGEX4t連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DE3細(xì)胞中。經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率為5.8 mg/L[41]。FIP-fve基因還可以連接到pET-28（+）載體上，通過熱轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21細(xì)胞中。經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率可達(dá)30 mg/L。

生物活性分析表明，rFIP-fve可以增強(qiáng)鼠血清中細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ的分泌[42]，也具有刺激細(xì)胞分裂的作用。

2.2.2 FIP-fve在酵母表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

金針菇可以在酵母中進(jìn)行誘導(dǎo)型和組成型表達(dá)。擴(kuò)增金針菇和酵母三磷酸甘油醛脫氫酶啟動子Pgap基因，然后構(gòu)建畢赤酵母誘導(dǎo)型表達(dá)載體pPIC9-FIP-fve和組成型表達(dá)載體pPIC9-PGAp-FIP-fve，最后，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS115細(xì)胞中。經(jīng)培養(yǎng)，誘導(dǎo)型表達(dá)rFIP-fve的表達(dá)效率是158.2 mg/L，組成型表達(dá)rFIP-fve的表達(dá)效率為46.3 mg/L[43]。

生物活性分析表明，rFIP-fve可以凝集人血紅細(xì)胞、刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，還可顯著地刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌白介素IL-2。

此外，F(xiàn)IP-fve還可與載體pPICZαA連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到畢赤酵母X-33細(xì)胞中，經(jīng)甲醇連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，表達(dá)效率為18.9 mg/L。

生物活性分析表明rFIP-fve可以凝集兔的血紅細(xì)胞[10]。

2.2.3 FIP-fve在昆蟲表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

采用PCR法擴(kuò)增FIP-fve基因，PCR產(chǎn)物與轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒pAcUW21結(jié)合形成質(zhì)粒pAcP10Fve，然后，該質(zhì)粒pAcP10Fve與事先合成的SPbbx（單肽）片段結(jié)合，形成重組質(zhì)粒pAcP10SPbbxFve，再與AcMNPV一起合成重組病毒vAcP10SPbbxFve，最后感染昆蟲Sf21細(xì)胞。經(jīng)培養(yǎng)，F(xiàn)IP-fve表達(dá)效率為6.25 mg/L。

生物活性測定表明rFIP-fve可以顯著地刺激鼠脾細(xì)胞分泌IL-2[44]。

2.3 FIP-gts的重組表達(dá)

2.3.1 FIP-gts在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

擴(kuò)增FIP-gts基因，擴(kuò)增產(chǎn)物與載體pET-30a（+）連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TG1細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)，測定其表達(dá)效率為20 mg/L[2]。

2.3.2 FIP-gts在昆蟲表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

擴(kuò)增FIP-gts基因，從轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒pAcUW21中構(gòu)建重組質(zhì)粒pAcP10Fve，然后該重組質(zhì)粒與AcRP23.LacZ DNA共轉(zhuǎn)染Sf21細(xì)胞，產(chǎn)生重組桿狀病毒vAcP10Fve。最后將vAcP10Fve轉(zhuǎn)化到Sf21細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)，測定3×106受感染的細(xì)胞rFIP-gts表達(dá)效率是47.2 μg。

生物活性測定表明，rFIP-gts可以增強(qiáng)鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-2[45]。

2.4 FIP-vvo的重組表達(dá)

擴(kuò)增FIP-vvo基因，然后與載體pPICZaA連接。通過電轉(zhuǎn)化法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到畢赤酵母X-33細(xì)胞中。經(jīng)甲醇連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，表達(dá)效率達(dá)到了410 mg/L。

生物活性測定表明rFIP-vvo可以凝集鼠和綿羊的血紅細(xì)胞、刺激鼠脾細(xì)胞的增殖、增強(qiáng)鼠脾細(xì)胞中細(xì)胞因子IFN-γ的分泌[16]。

2.5 FIP-gja的重組表達(dá)

2.5.1 FIP-gja在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

采用PCR法擴(kuò)增FIP-gja基因。擴(kuò)增產(chǎn)物與載體pET-30a（+）連接，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率為36.46 mg/L[46]。

2.5.2 FIP-gja在植物表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

采用PCR法擴(kuò)增FIP-gja基因。PCR產(chǎn)物先后與載體pBluecsriPt和p3300GB連接，得到FIP-gja植物雙元表達(dá)載體pcAMGJA。并將該載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌LBA4404中，通過葉盤轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入煙草。經(jīng)鑒定，其表達(dá)效率為可溶性總蛋白的0.31%。

生物學(xué)功能分析表明，rFIP-gja可增強(qiáng)TNF-α的表達(dá)水平[46]。

2.6 FIP-gsi的重組表達(dá)

2.6.1 FIP-gsi在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

FIP-gsi基因與載體pET-30a（+）連接，連接產(chǎn)物可分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21和M15細(xì)胞中，通過IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)，表達(dá)的rFIP-gsi分別約占大腸桿菌總蛋白的46.1%和得到的可溶性蛋白占M15總可溶性蛋白的25%[47-48]。

生物活性測定表明，rFIP-gsi能夠誘導(dǎo)細(xì)胞因子IL-2，IL-3，IL-4，IFN-γ，TNF-α，LT及IL-2R（IL-2 receptor）表達(dá)。

2.6.2 FIP-gsi在擔(dān)子菌類灰蓋鬼傘中的重組表達(dá)

構(gòu)建重組質(zhì)粒pBFIP-gsi，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到灰蓋鬼傘菌株LT2細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率為每千克新鮮的菌絲體中可以提取314 mg的rFIP-gsi。

凝血實驗表明，rFIP-gsi可以凝集小鼠血紅細(xì)胞，但不能凝集人的血紅細(xì)胞[49]。

2.7 FIP-tvc重組表達(dá)

2.7.1 FIP-tvc在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

將擴(kuò)增后的FIP-tvc基因與載體pET21a（+）連接，轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞大腸桿菌BL21細(xì)胞中。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)，重組表達(dá)的蛋白有20%是以可溶性蛋白的形式存在[8]。

生物學(xué)活性分析表明，rFIP-tvc可以凝集大鼠和小鼠血紅細(xì)胞，可以有選擇性地增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素（IL）-1α，IL-2，IL-5，IL-6，TNF-α，LT[8]。

2.7.2 FIP-tvc在酵母表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

PCR法擴(kuò)增FIP-tvc基因，然后與載體pPIC9連接，最后將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS115細(xì)胞中，經(jīng)甲醇連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)，其表達(dá)效率可達(dá)41.06 mg/mL[50]。

2.8 LZ-9的重組表達(dá)

擴(kuò)增LZ-9基因，與載體pPICZα-A連接，轉(zhuǎn)化到畢赤酵母菌株X-33細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率為6.7 mg/L。

血凝試驗分析表明，rLZ-9可以凝集兔、鼠和綿羊血紅細(xì)胞[10]。

表2 已知的FIPs重組表達(dá)現(xiàn)狀

2.9 FIP-nha的重組表達(dá)

2.9.1 FIP-nha在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

擴(kuò)增FIP-nha基因，擴(kuò)增產(chǎn)物與GST融合載體pGEX-4T-1連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta細(xì)胞中。經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率為42.7 mg/L[17]。

生物活性分析表明，rFIP-nha可以凝集人類和兔血紅細(xì)胞、顯著地刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖，且不具有協(xié)同效應(yīng)，有增強(qiáng)鼠脾細(xì)胞分泌IL-2的能力，還可以誘導(dǎo)HL60，HepG2，MGC823癌癥細(xì)胞的凋亡，抑制MGC-823和HepG2細(xì)胞的增殖[17]。

2.9.2 FIP-nha在酵母表達(dá)系統(tǒng)中的重組表達(dá)

從血紅叢赤殼中獲得FIP-nha基因，然后與載體pPICZα-A連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到畢赤酵母菌株X-33細(xì)胞中，經(jīng)培養(yǎng)，表達(dá)效率為18.9 mg/L。

生物活性測定表明rFIP-nha可以凝集鼠、兔、綿羊和胰蛋白酶處理過的人血紅細(xì)胞[10]。

2.1 0 FIP-SN15的重組表達(dá)

FIP-SN15是通過基因改組技術(shù)，從LZ-8和FIP-gsi兩種真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白的基因中合成的重組DNA序列[51]。

擴(kuò)增FIP-SN15基因，然后與載體pET-30a連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21細(xì)胞中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)，表達(dá)效率為35.95 mg/L[40]。

生物活性分析表明，rFIP-SN15可以凝集鼠血紅細(xì)胞、顯著地增強(qiáng)細(xì)胞因子IL-2，IL-4，IFN-γ，IL-2R和LT分泌[52]，也可以誘導(dǎo)人類膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U-251 MG的凋亡。

以上關(guān)于已知的FIPs重組表達(dá)現(xiàn)狀的總結(jié)見表2。

續(xù)表2

3 前景

真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白是一種與植物凝集素和免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)和免疫功能相似的小分子蛋白質(zhì)，具有抗腫瘤、抗過敏、刺激淋巴細(xì)胞增殖等免疫活性，同時研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)它們具有副作用，因此，F(xiàn)IPs的研究具有廣泛的應(yīng)用發(fā)展空間。但是，天然提取的FIPs的產(chǎn)出率很低，費時耗力且成本較高，所以，尋求一個可以高效重組表達(dá)這些FIPs的技術(shù)是今后研究的主要方向。近年來，隨著分子生物學(xué)和生物工程技術(shù)的發(fā)展，人們可以利用基因工程菌株工業(yè)生產(chǎn)藥用蛋白質(zhì)，這就為人們后續(xù)進(jìn)一步研究FIPs應(yīng)用于實踐提供了重要的手段?？傊P(guān)于FIPs的研究將會越來越受到重視，尤其作為新型免疫調(diào)節(jié)劑，或者食品添加劑方面具有重大應(yīng)用潛力。