抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的輔助診斷作用

魏　萍，王艷俠，王　敏，石書梅

抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的輔助診斷作用

魏萍，王艷俠＊，王敏，石書梅

目的通過與抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體、類風(fēng)濕因子（RF）比較，評(píng)估抗突變型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗體檢測(cè)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)222例研究對(duì)象，包括132例RA患者，42例非RA的風(fēng)濕性疾病患者及48名健康對(duì)照組，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中的抗MCV抗體水平，并同時(shí)檢測(cè)血清中抗CCP抗體、RF水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)。結(jié)果132例RA中抗MCV抗體陽(yáng)性97例，對(duì)RA診斷的敏感性為73.5%，特異性為94.4%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為95.1%和70.8%。結(jié)論抗MCV抗體在RA中具有較高的敏感性和特異性，可作為RA診斷的輔助指標(biāo)，建議抗MCV抗體和抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)，可提高對(duì)RA診斷的特異性，提高早期診斷率。

關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕；抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；類風(fēng)濕因子

DOI:10.14172/j.issn1671-4008.2016.10.005

［Key words］Arthritis，rheumatoid；Anti-mutated citrullinated vimentin antibody（anti-MCV）；Anti-cyclic citrullinated peptide antibody；Rheumatoid factor

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種致關(guān)節(jié)畸形的自身免疫性疾病，以慢性滑膜炎為特征，最終導(dǎo)致骨吸收，骨破壞和骨纖維化。只有早期治療才能有效阻止病情發(fā)展，防止骨關(guān)節(jié)侵蝕，避免殘疾，而早期診斷是早期治療的關(guān)鍵，類風(fēng)濕因子（RF）是目前RA診斷標(biāo)準(zhǔn)中唯一的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，但RF對(duì)RA早期的診斷特異性較低［1］，近年來相繼發(fā)現(xiàn)的具有相同抗原決定簇的抗核周因子（APF）、抗角蛋白抗體 （AKA）、抗纖聚蛋白抗體（AFA）和抗環(huán)瓜氨酸酞（CCP）抗體對(duì)RA都有較高的特異性，并可在疾病的早期出現(xiàn)［2］，但因敏感性不高限制了臨床普遍應(yīng)用。目前，臨床最常用的是抗CCP抗體的檢測(cè)。在最近的相關(guān)研究［3］中發(fā)現(xiàn)，較多的RA患者，其血清中抗CCP抗體陰性但抗突變型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗體卻陽(yáng)性。MCV來自人類的天然蛋白，具有多個(gè)潛在的抗原決定簇，其相對(duì)分子質(zhì)量比抗CCP抗體小，與抗CCP抗體相比，抗MCV抗體具有較高的敏感性和特異性［4］。該文通過分析222例患者血清中抗MCV抗體、抗CCP抗體和RF水平，評(píng)價(jià)聯(lián)合檢測(cè)在早期RA診斷中的應(yīng)用價(jià)值，為臨床提供有價(jià)值的輔助檢查。

1　資料與方法

1.1對(duì)象筆者所在院2013年3月—2016年1月收集該院風(fēng)濕免疫科、骨科等門診及住院患者血清標(biāo)本222例。其中132例確診為RA，其中男34例，女98例；年齡15～70歲，平均33歲。非RA組包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡 （SLE）18例，原發(fā)性干燥綜合征（Pss）13例，未分化結(jié)締組織?。║CTD）3例，強(qiáng)直性脊柱炎（AS）8例。其余48例為健康對(duì)照組，來自筆者所在院體檢中心進(jìn)行健康查體的健康人群。

1.2儀器與試劑檢測(cè)用酶標(biāo)儀為DNM-9606，選用的抗MCV抗體試劑盒由德國(guó)ORGENTEC提供，抗CCP抗體試劑盒由上?？菩律锛夹g(shù)公司提供。

1.3方法用普通真空采血管采集受試者空腹靜脈血3 ml，置于-80℃冰箱保存至化驗(yàn)分析，采用酶聯(lián)免疫吸附法，同時(shí)檢測(cè)222例血清中抗MCV抗體和抗CCP抗體水平，其中抗MCV抗體＞20 U/ml為陽(yáng)性，抗CCP抗體＞25 U/ml為陽(yáng)性，操作按說明書。RF采用散射比濁法測(cè)定，，RF＞20 U/ml為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，采用χ2檢驗(yàn)比較RA組、非RA疾病對(duì)照組、健康對(duì)照組中抗MCV抗體、抗CCP抗體和RF的陽(yáng)性率。組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。采用四格表計(jì)算敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）、陰性預(yù)測(cè)值（NPV）。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1222例病例組抗MCV抗體、抗CCP抗體和RF的檢測(cè)結(jié)果抗MCV抗體、抗CCP抗體和RF三種檢測(cè)指標(biāo)分別在RA組、非RA疾病對(duì)照組、健康對(duì)照組3組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001），見表1。

表 1　222例病例組抗MCV抗體、抗CCP抗體和RF的檢測(cè)結(jié)果

2.2聯(lián)合檢測(cè)的比較三種檢測(cè)項(xiàng)目分別交叉聯(lián)合檢測(cè)，見表2。結(jié)果顯示，抗MCV抗體/抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)，能得到較高的敏感性（77.3%）和特異度（93.3%），因此為RA診斷的有效方法。

表2 抗MCV抗體、抗CCP抗體和RF單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度（%）

3　討論

波形蛋白（vimentin）是一種非常重要的細(xì)胞骨架蛋白，屬中間纖維的波形纖維蛋白類，由10個(gè)氨基酸殘基組成，相對(duì)分子量為58000，主要在起源于中胚層的細(xì)胞中表達(dá)，如成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞等［5］。在細(xì)胞內(nèi)，波形蛋白纖維與微管、微絲等形成了一個(gè)完整的細(xì)胞支撐網(wǎng)絡(luò)體系?？筂CV是一種自身抗體，于1994年由Despres［6］發(fā)現(xiàn)，經(jīng)鑒定主要針對(duì)Sa抗原，當(dāng)時(shí)被認(rèn)作抗Sa抗體。Sa抗原是一種存在于人脾、胎盤和RA患者血管滑膜翳的非核抗原，波形蛋白在凋亡的巨噬細(xì)胞內(nèi)經(jīng)過肽酰精氨酸亞氨酶（PAD）的瓜氨酸化后，其蛋白結(jié)構(gòu)會(huì)產(chǎn)生變化，會(huì)增加其潛在的抗原決定簇 （瓜氨酸），波形蛋白因不能得到及時(shí)的清除而持續(xù)存在，從而促進(jìn)了抗MCV抗體的生成［4］。

該研究中，抗MCV抗體診斷RA的敏感性為73.5%，相比于抗CCP抗體，其具有更高的敏感性。而三種指標(biāo)的特異性依次為抗CCP抗體＞抗MCV抗體＞RF。如果抗MCV抗體與抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)，能得到較高的敏感度（77.3%）、特異度（93.3%）和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（94.4%），抗MCV抗體和抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)是早期診斷RA的有效方法，其對(duì)RA診斷的特異性也大大提高。

研究顯示，38例RF陰性的RA組中，有7例抗MCV抗體陽(yáng)性。52例抗CCP抗體陰性的RA組中，有22例抗MCV抗體陽(yáng)性。在很大程度上補(bǔ)充了RA診斷的不足，大大減少了漏診率。說明抗MCV抗體與抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)，可以相互彌補(bǔ)之不足。特別是在臨床高度懷疑RA，而RF抗CCP抗體均陰性時(shí)，更能體現(xiàn)檢測(cè)抗MCV抗體的重要性。

筆者不僅評(píng)估了抗MCV抗體在早期RA中的臨床應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)還研究了每種項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)的效果，聯(lián)合檢測(cè)是有助于提高疾病早期診斷率的方法。結(jié)果表明，最具臨床價(jià)值的組合為抗MCV陽(yáng)性/抗CCP抗體陽(yáng)性，不僅可以得到較高的敏感性（77.3%），還能達(dá)到較高的特異性（93.3%）。建議抗MCV抗體和抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)，可提高對(duì)RA診斷的特異性和提高早期診斷率，有助于減少漏診，促進(jìn)患者的早期診斷和治療。

有研究表明，抗MCV抗體水平與RA患者的疾病嚴(yán)重程度和發(fā)展有關(guān)，而抗CCP抗體水平與RF無(wú)此相關(guān)性［7］，提示抗MCV抗體對(duì)RA早期診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)都有重要意義。由于本研究樣本例數(shù)有限，此相關(guān)性有待擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究。

綜上所述，該研究評(píng)估了檢測(cè)這兩種抗體的臨床應(yīng)用價(jià)值，探討如何選擇正確的檢測(cè)項(xiàng)目，提高檢測(cè)的敏感度和特異度?？筂CV抗體檢測(cè)對(duì)早期RA的診斷有較好的臨床應(yīng)用和研究?jī)r(jià)值，其檢測(cè)采用ELISA法，操作簡(jiǎn)便快捷，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室，抗MCV抗體和抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)有助于提高早期RA的診斷率。

［1］Goldbach-Mansky R，LeeJ，McCoy A，et al.Rheumatoid arthritis associated autoantibodies in patients with synovitis of recent onset［J］.Arthritis Res，2000，2（3）：236-243.

［2］李茹，栗占國(guó).類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗原的研究進(jìn)展［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2004，8（2）：108-110.

［3］Nicaise Roland P，Mignot GS，Bruns A，et al.Antibodies to mutated citrullinated vimentin for diagnosing rheumatoid arthritis in anti-CCP-negative patients and for monitoring infliximab therapy［J］.Arthritis Res Ther，2008，10（2）：142.

［4］Bang H，Egerer K，Gauliard A，et al.Mutation and citrullination modifies vimentin to a novel autoantigen for rheumatoid arthritis［J］.Arthritis Rheum，2007，56（12）：2503-2511.

［5］Clarke EJ，Allan V.Intermediate filaments：vimentin moves in［J］. Curr Biol，2002，12（6）：596-598.

［6］Vossenaar ER，Despres N，Lapointe E，et al.Rheumatoid arthritis specific anti-Sa antibodies target citrullinated vimentin［J］.Arthritis Res Ther，2004，6（2）：142-150.

［7］Boire G，Cossette P，de Brum-Fernandes AJ，et al.Anti-Sa sntibodies and antibodies against cyclic citrullinated peptide are not equivalent as predictors of severe outcomes in patients with recent-onset polyarthritis［J］.Arthritis Res Ther，2005，7（6）：592-603.

［2016-04-10收稿，2016-05-11修回］［本文編輯：董冰媛］

The clinical application of detecting the anti-mutated citrullinated vimentin antibody in the diagnosis of rheumatoid arthritis

WEI Ping①，WANG Yan-xia，WANG Min，et al.①Nephrosis Laboratory Center，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveTo investigate the prevalence and clinical significance of anti-mutated citrullinated vimentin antibodies（anti-MCV）in rheumatoid arthritis through comparing it with anti-cyclic citrullinated peptide antibodies and rheumatoid factors.MethodsAnti-MCV antibody was tested by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）in 220 serum samples including 132 patients with RA，42 sujects with out non-RA rheumatic diseases and 48 healthy controls.ResultsAnti-MCV was found 97 in RA.The sensitivity and specificity of anti-MCV in RA were 73.5%and 94.4%.The positive and negative predictive value were 95.1%and 70.8%. ConclusionAnti-MCV antibody may be an valuable parameter for the diagnosis of RA.The anti-MCV and anti-CCP antibody are advised to co-test to improve specificity and the early diagnosis rate of RA.

R392.3:R593.22

A

250031山東濟(jì)南，濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院腎內(nèi)科腎病實(shí)驗(yàn)中心（魏萍，王艷俠，石書梅）；250100山東濟(jì)南，濟(jì)南市歷城區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)站（王敏）

王艷俠，Email：wyx200100@sohu.com