高效液相色譜法測定蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留

郭愛華，李堃，李敏，王瑋，郭蒙京

（北京市西城區(qū)疾病預防控制中心，北京 100120）

高效液相色譜法測定蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留

郭愛華，李堃，李敏，王瑋，郭蒙京

（北京市西城區(qū)疾病預防控制中心，北京 100120）

建立高效液相色譜測定蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留的檢測方法。蔬菜樣品用乙腈提取，經(jīng)DisQuE分散固相萃取試劑盒凈化，C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分離，以乙腈-水（68∶32）溶液洗脫，二極管陣列（PDA）檢測器檢測，外標法定量。在0.02～1.0 mg/L范圍內(nèi)，除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲的質(zhì)量濃度與對應的色譜峰面積線性相關(guān)，除蟲脲和滅幼脲的檢出限為0.010 mg/kg，殺鈴脲的檢出限為0.015 mg/kg。除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲標準溶液的色譜峰面積的日內(nèi)相對標準偏差分別為1.03%，1.31%，0.82%（n=6），日間相對標準偏差分別為1.43%，1.56%，1.06%（n=6）。加標回收率為88.7%～108.0%。該方法簡單、快速、準確，適合蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留的測定。

蔬菜；除蟲脲；滅幼脲；殺鈴脲；高效液相色譜法

除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲屬于苯甲酰脲類殺蟲劑，是幾丁質(zhì)合成抑制劑，能干擾靶標昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)合成而導致其死亡，或直接降解昆蟲幾丁質(zhì)［1］。因該類殺蟲劑對人畜毒性相對較低，并能有效地防治對有機磷、有機氯有抗性的害蟲，因而被用于多種農(nóng)作物的害蟲防治。由于該類農(nóng)藥對人類存在潛在危險，2014年國家衛(wèi)生和計生委發(fā)布實施的食品安全國家標準《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763-2014）［2］規(guī)定了食品中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲的最大殘留量分別為20，3，0.1 mg/kg。目前測定果蔬中苯甲酰脲類農(nóng)藥的色譜方法主要有高效液相色譜法［3-5］、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［6-8］、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［9］和氣相色譜-質(zhì)譜法［10］。國家標準方法GB/T 5009［11-12］測定除蟲脲和滅幼脲亦采用液相色譜法，行業(yè)標準方法［13］測定除蟲脲和滅幼脲采用高效液相色譜法，測定蔬菜、水果中的苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留時，需經(jīng)過提取、凈化、濃縮等步驟，使用的二氯甲烷試劑毒性大，采用固相萃取柱凈化，過程繁瑣且耗時較長，不利于日常樣品的批量檢測。而質(zhì)譜法中無論是LC-MS/MS，UPLC-MS/MS，還是GC-MS，儀器均比較昂貴，很多實驗室沒有配備。筆者建立一種簡單、快速、準確、環(huán)保的分散固相萃取和高效液相色譜相結(jié)合的方法，方法的準確度和精密度好，適用于蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留的日常批量檢測。

1　實驗部分

1.1主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-20AD型，配SPD-M20A二極管陣列檢測器（PDA），日本島津公司；

高速組織粉碎機：AMR600E型，中山市安蜜爾電器實業(yè)有限公司；

離心機：Sigma 2-16KL型和1-14型，美國Sigma公司；

渦旋儀：IKA MS3BS25型，德國IKA公司；

甲醇、乙腈、丙酮、石油醚、乙酸乙酯：色譜純；

氯化鈉：優(yōu)級純；

滅幼脲標準品：純度不低于99.8%，標準物質(zhì)編號為GBW（E） 060895，中國計量科學研究院；

除蟲脲標準品：純度不低于99.8%，標準物質(zhì)編號為GBW（E） 060893，中國計量科學研究院；

殺鈴脲標準溶液：100 mg/L，標準物質(zhì)編號為GSB 05-1892-2008，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；

分散固相萃取試劑盒：DisQuETMExtraction Tube2型，（1）50 mL（6 g無水MgSO4+1.5 g NaAc）；（2）2 mL（150 mg無水MgSO4+50 mg PSA），美國Waters公司；

一次性濾膜：0.45 μm；

實驗用水為超純水。

1.2標準溶液的配制

1.2.1除蟲脲、滅幼脲標準儲備液

分別準確稱取50 mg除蟲脲、滅幼脲標準品，用甲醇溶解并定容至50 mL，此溶液除蟲脲、滅幼脲的質(zhì)量濃度均為1 000 mg/L。

1.2.2除蟲脲、滅幼脲、殺鈴脲混合標準系列溶液

準確吸取1.00 mL 1 000 mg/L的除蟲脲、滅幼脲標準儲備液及10.0 mL 100 mg/L的殺鈴脲標準溶液，用乙腈-水（68∶32）溶液定容至100 mL，除蟲脲、滅幼脲、殺鈴脲標準使用液的質(zhì)量濃度均為10.0 mg/L。分別吸取10.0 mg/L除蟲脲、滅幼脲、殺鈴脲標準使用液0.10，0.25，0.50，1.0，2.5，5.0 mL，用乙腈-水（68∶32）溶液定容至50 mL，配制成濃度分別為0.02，0.05，0.10，0.20，0.50，1.0 mg/L的混合標準系列溶液。

1.3色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（2）柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：40℃；檢測波長：除蟲脲、滅幼脲為256 nm，殺鈴脲為247 nm；流動相：乙腈-水（68∶32）溶液；流量：1.0 mL/min；進樣體積：20 μL。

1.4實驗方法

將蔬菜縮分后切碎，充分混勻，用高速組織粉碎機將樣品粉碎成勻漿，制成待測樣，備用。稱取10 g粉碎樣品（精確至0.01 g）于50 mL DisQuETMExtraction Tube2中，加入10 mL乙腈溶液及2 g NaCl，渦旋勻漿3 min，以10 000 r/min離心5 min。取上清液1.2 mL于2 mL DisQuETMExtraction Tube2中，渦旋勻漿1 min，以10 000 r/min離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后進樣測定。同時做空白試驗。

2　結(jié)果與討論

2.1提取溶劑的選擇

苯甲酰脲類農(nóng)藥不易溶于水，易溶于有機溶劑。實驗考察乙腈、丙酮、乙酸乙酯和石油醚4種有機溶劑對除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲的提取效率及效果，4種溶劑提取效率見表1。結(jié)果表明，乙酸乙酯能提取許多大分子的脂質(zhì)和蠟質(zhì)的物質(zhì)，使目標組分色譜峰變形，提取效率無法計算；石油醚的提取效率較低，不能滿足實驗要求；丙酮和乙腈的提取效率比較好，但丙酮能提取樣品中大量油脂和色素，在目標峰前雜質(zhì)峰響應值太大，當目標組分出峰時響應未回到基線水平；而乙腈除有較好的提取效率外，能沉淀蛋白質(zhì)、提取的脂肪少，有利于后續(xù)的凈化。故采用乙腈作為提取溶劑。

表1　4種溶劑的提取效率（添加水平0.5 mg/kg，n=3） %

2.2取樣量的選擇

分別考察10 g和20 g的蔬菜取樣量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DisQuE分散固相萃取試劑盒能滿足10 g和20 g樣品的凈化要求，但取樣量為20 g時，提取溶劑用量少時提取效率低，而提取溶劑用量大時，部分樣品（如韭菜、香菜、茴香等）與提取溶劑總體積會接近50 mL DisQuE分散固相萃取試劑盒的容量，渦旋勻漿的空間變小，這樣亦會影響提取效率，故本實驗選擇蔬菜取樣量為10 g。

2.3提取溶劑用量的選擇

對提取溶劑用量進行考察，準確稱取10.00 g樣品，分別用10，20，30 mL乙腈提取，經(jīng)DisQuE分散固相萃取試劑盒凈化后，取上清液進樣檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈用量10～30 mL時回收率相差不大，因此選擇提取溶劑乙腈的用量為10 mL，既能降低檢出限又可以節(jié)省溶劑。

2.4檢測波長的選擇

除蟲脲、滅幼脲的最大紫外吸收波長為256 nm，殺鈴脲的最大紫外吸收波長為247 nm，考慮到方法靈敏度，分別選擇256 nm和247 nm作為檢測波長。

2.5色譜條件的選擇

分別以甲醇-水和乙腈-水溶液為流動相，考察流動相組成對3種脲類農(nóng)藥的分離情況。結(jié)果表明：以甲醇-水和乙腈-水溶液作為流動相均可將3種脲類農(nóng)藥有效分離，考慮到本實驗采用乙腈為提取溶劑，故選擇乙腈-水溶液為流動相。進一步對乙腈-水的體積比例進行優(yōu)化，當乙腈-水體積比為68∶32時，樣品雜質(zhì)峰與3種脲類農(nóng)藥峰達到基線分離，且保留時間適中（20 min內(nèi)），除蟲脲、滅幼脲、殺鈴脲混合標準溶液色譜圖和黃瓜空白加標樣品色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1　除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲標準色譜圖（1.0 mg/L）

圖2　黃瓜空白加標（0.80 mg/kg）樣品色譜圖

2.6線性范圍與檢出限

以3種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線，結(jié)果表明在0.02～1.0 mg/L范圍內(nèi)，3種農(nóng)藥溶液的質(zhì)量濃度與對應的色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。以3倍信噪比（3S/N）計算檢出限，結(jié)果見表2。

表2　3種農(nóng)藥的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)與檢出限

2.7精密度試驗

2.7.1日內(nèi)精密度

取除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲3種脲類農(nóng)藥1.0 mg/L標準溶液，在1.3色譜條件下重復進樣6次，記錄各自的色譜峰面積，并計算6次測定結(jié)果的相對標準偏差作為日內(nèi)精密度考察指標，測定結(jié)果見表3。由表3可知，除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲3種農(nóng)藥色譜峰面積的相對標準偏差分別為1.03%，1.31%，0.82%。

表3　日內(nèi)精密度試驗結(jié)果

2.7.2日間精密度

配制除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲3種脲類農(nóng)藥1.0 mg/L標準溶液，連續(xù)6 d進行色譜測定，記錄各自的色譜峰面積，并計算6次測定結(jié)果的相對標準偏差作為日間精密度考察指標，測定結(jié)果見表4。由表4可知，3種農(nóng)藥色譜峰面積的相對標準偏差分別為1.43%，1.56%，1.06%。

表4　日間精密度試驗結(jié)果

2.8加標回收試驗

選取黃瓜、白菜、番茄、芹菜和扁豆5種蔬菜為樣品，分別添加0.10，0.80 mg/kg兩個濃度水平，每個濃度做3次平行測定，結(jié)果見表5。由表5可知，3種脲類農(nóng)藥的平均回收率為88.7%～108%，滿足技術(shù)要求。

表5　3種農(nóng)藥的加標回收率

3　結(jié)語

采用高效液相色譜測定蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留量。蔬菜樣品用乙腈直接提取，再用DisQuE分散固相萃取試劑盒凈化，提取和凈化同時進行，且樣品提取液經(jīng)二步凈化，凈化效果好；樣品的處理過程非常簡單，樣品溶液不需要濃縮直接過濾即可上機測定，節(jié)省了試劑與處理時間；凈化時使用已商品化的DisQuE分散固相萃取試劑盒，分散固相萃取劑不用稱量，提高了方法的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。實驗結(jié)果表明，該方法簡單、快速、準確，適合于蔬菜中除蟲脲、滅幼脲和殺鈴脲殘留量的批量測定。

［1］ 米娜，王喚，范志金，等.苯甲酰脲類殺蟲劑研究進展［J］.世界農(nóng)藥，2009，31（增刊Ⅱ）∶ 24-26.

［2］ GB 2763-2014 食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量［S］.

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［7］ 王連珠，周昱，陳泳，等.果蔬中8種苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定［J］.分析測試學報，2010，29（3）∶289-293.

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［13］ NY/T 1720-2009 水果、蔬菜中殺鈴脲等七種苯甲酰脲類農(nóng)藥殘留量的測定高效液相色譜法［S］.

我國首個水下觀測網(wǎng)水質(zhì)在線監(jiān)測系統(tǒng)問世

此時此刻某個水源的水質(zhì)情況如何？可以不需要原來的取樣、化驗、分析滯后的書面報告了，有關(guān)部門和關(guān)注水質(zhì)情況的人們只要登錄電腦，或打開手機APP就能實時得到有效數(shù)據(jù)。國內(nèi)第一個水下觀測網(wǎng)水質(zhì)在線監(jiān)測系統(tǒng)不久前通過鑒定。據(jù)悉，這項新技術(shù)打破了國際壟斷，填補了國內(nèi)空白。

據(jù)介紹，提供這項高新技術(shù)的是中天科技海纜有限公司四名博士組成的專家團隊，他們聯(lián)合浙江大學的專家教授經(jīng)過較長時間的攻關(guān)，終于成功地應用于長江流域的水下觀測水質(zhì)在線監(jiān)測。據(jù)郭朝陽博士介紹，這項系統(tǒng)技術(shù)應用起來十分方便，提供的監(jiān)測數(shù)據(jù)具有實時、穩(wěn)定、連續(xù)、可靠的優(yōu)越。

由于世界性水危機，地表水和地下水都遭到了不同程度的污染，水質(zhì)日益惡化，于是人們對水質(zhì)監(jiān)測的神經(jīng)特別敏感。一項水質(zhì)報告顯示，中國29個重點城市中，只有15個城市中的20項飲用水指標全部合格，約占抽檢城市的52%；而14個城市存在一項或多項指標不合格。

據(jù)了解，長期以來，我國對水質(zhì)監(jiān)測方式停留在傳統(tǒng)取樣和浮標監(jiān)測，實時性和可靠性低，而且不能夠真正達到原位監(jiān)測的目的，較為先進的監(jiān)測系統(tǒng)基本都依賴進口。而中天科技海纜研發(fā)的水下觀測網(wǎng)集成多種聲學、圖像、物理、化學、生物等傳感觀測設(shè)備，布設(shè)在重要水源底部，進行長期連續(xù)、實時、原位觀測，并能將原始數(shù)據(jù)和解算后的參數(shù)信息發(fā)送至各種信息終端，對飲用水安全和水環(huán)境保護有重要的民生價值。

中天科技海纜總經(jīng)理薛建凌表示，開發(fā)具有民生和經(jīng)濟價值的水下觀測網(wǎng)水質(zhì)在線監(jiān)測系統(tǒng)，對飲用水安全進行全方位的檢測和預警，不僅具有重要的社會意義，也為公司提供了新的利潤增長點，并能夠帶動海光纜，海工器件等配套產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售，具有良好的市場前景。

該項目組織者楊華勇博士表示，這一系統(tǒng)的研制成功，有效提高監(jiān)測參數(shù)的原位性、實時性和可靠性，同時也為其它應用場合，包括海洋觀測、水質(zhì)水文研究等提供了基礎(chǔ)研制條件，將為我國飲用水源監(jiān)測在內(nèi)的環(huán)保領(lǐng)域的發(fā)展提供有力的保障。

（儀器信息網(wǎng)）

Determination of Diflubenzuron， Chlorbenzuron and Triflumuron Residue in Vegetables by HPLC

Guo Aihua， Li Kun， Li Min， Wang Wei， Guo Mengjing
（Xicheng District Center for Disease Control and Prevention， Beijing 100120， China）

HPLC method was established for determination of diflubenzuron， chlorbenzuron and triflumuron residue in vegetables. The samples were extracted with acetonitrile and purified by DisQuE dispersive solid-phase extraction kit，and then， it was separated on a C18column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） with mobile phase of acetonitrile-water（68∶32） solution， diode array was used as a detector to collect signals， the quantification was determined by external standard method. There was a linear relationship between chromatographic peak area and concentration for diflubenzuron， chlorbenzuron and triflumuron at the range of 0.02-1.0 mg/L， the detection limit of diflubenzuron and chlorbenzuron was 0.010 mg/kg，the detection limit of triflumuron was 0.015 mg/kg. The inner-day RSD of peak area for the standard solution of diflubenzuron， chlorbenzuron and triflumuron were 1.03%， 1.31%， 0.82%（n=6）， respectively. The intra-day RSD of peak area for the standard solution of diflubenzuron， chlorbenzuron and triflumuron were 1.43%， 1.56%， 1.06%（n=6）， respectively. The range of recovery rate were 88.7%-108.0%. The method was simple， rapid， accurate and suitable for determination of diflubenzuron， chlorbenzuron and triflumuron residue in vegetables.

vegetables； diflubenzuron； chlorbenzuron； triflumuron； HPLC

O657.7

A

1008-6145（2016）03-0061-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.03.016

聯(lián)系人：郭愛華；E-mail∶ gah_yjx@163.com

2016-03-22