黔產(chǎn)白鬼筆不同部位提取物的成分分析

李文力，黎 璐，湯洪敏,2,*

（1.貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州民族大學(xué) 貴州民族醫(yī)藥研究院，貴州 貴陽 550025）

黔產(chǎn)白鬼筆不同部位提取物的成分分析

李文力1，黎 璐1，湯洪敏1,2,*

（1.貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州民族大學(xué) 貴州民族醫(yī)藥研究院，貴州 貴陽 550025）

目的：通過黔產(chǎn)白鬼筆子實體干品的菌蓋、菌柄、菌托3 個 部位石油醚和乙醇提取物的化學(xué)成分研究，尋找并拓展白鬼筆的利用價值。方法：在常溫條件下先后用石油醚和乙醇分別對白鬼筆的3 個部位進行超聲提取，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對提取物的化學(xué)成分進行研究，氣相色譜柱為HP-INNOWAX極性柱，程序升溫條件為：60 ℃保持2 min，以10 ℃/min升至16 0 ℃，保持6 min，以3 ℃/min升至220 ℃，保持17 min，用NIST 08譜庫進行成分比對。結(jié)果：2 種提取物共檢出67 種成分，其中66 種成分在白鬼筆的研究中尚未見報道。石油醚提取物共檢出35 種成分，菌蓋、菌柄、菌托3 個部分分別 檢測出24、1 8、18 種成分。乙醇提取物共檢出38 種成分，菌蓋、菌柄、菌托3 個部位分別檢測出26、28、12 種成分。結(jié)論：從白鬼筆中檢出的順,順-9,12-十八碳二烯酸、二丁基羥基甲苯、鄰苯二甲酸二異丁酯、異山梨醇、1,2-環(huán)戊二酮、α-吡咯烷酮、煙酰胺、9,12-十八碳二烯酸乙酯等具利用價值的成分可為白鬼筆3 個部位的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

白鬼筆；石油醚提取物；乙醇提取物；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀

藥食兼用真菌是指能治療疾病，具藥用價值的一類真菌，能產(chǎn)生氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素、多糖、苷類等多種物質(zhì)[1]。其化學(xué)研究起步較晚，不如高等植物化學(xué)研究深入，由于真菌代謝產(chǎn)物具有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)及生理活性，加上近年化學(xué)結(jié)構(gòu)測定方法的應(yīng)用，使真菌中的成分不斷被發(fā)掘，研究[1]顯示部分藥食兼用真菌的化學(xué)成分具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫力、抗放射與促進骨髓造血、保肝、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)等作用，因此對藥食兼用真菌的研究不僅能為尋找高效、低毒副作用的新藥做出一定貢獻，還能將藥食兼用真菌開發(fā)為具有一定營養(yǎng)價值及保健功效的食療產(chǎn)品，滿足日益旺盛的天然保健品市場的需求。

白鬼筆（Phallus impudicus L.）屬鬼筆目（Phallales ）、鬼筆科（Phallaceae）、鬼筆屬（Phallus）真菌，與竹蓀屬（Dictyophora Desv）同一個科，其中白鬼筆以及短裙竹蓀（Dictyophora duplicate (Bosc.) Fisch.）、長裙竹蓀（Dictyophora indusiata (Vent. Pers.) Fisch.）都是著名的藥食兼用真菌。在中國通常把白鬼筆菌蓋和菌托去掉后，取菌柄部位煎汁作為食品短期的防腐劑；菌柄部位入藥可治風(fēng)濕癥，有活血祛痛作用[2]，還具有抗癌活性[3-4]；中世紀(jì)時，白鬼筆用于治療痛風(fēng)，并作為激發(fā)性欲藥食用[5]。目前有關(guān)白鬼筆的研究有品種鑒定、親緣關(guān)系及生化特性[4-8]、培養(yǎng)[9-10]、揮發(fā)性成分研究[11-13]、抗凝血[14]、消 水腫[15]等方面；目前已檢出的白鬼筆成分如Borgkarlson等[12]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定白鬼筆菌柄鮮品的戊烷提取物，色譜柱為DB-WAX及DB-5，檢出成分為月桂烯、α-蒎烯、α-金合歡烯、甲苯、苯甲醛、苯甲醇、乙酸、二甲基二硫、芳樟醇、2-苯乙醇、二甲基三硫、反-羅勒烯、苯乙醛；菊地徹等[13]用硅膠柱對白鬼筆菌蓋的乙醚提取物進行分離，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行檢測，色譜柱為2% Thermon-3000，除檢出上述苯乙醛、苯甲醛、苯甲醇3 種成分外，還檢出了苯甲醚、紫蘇烯、乙酸、鄰苯二甲醚、鄰甲氧基苯酚、β-苯乙醇、苯酚7 種成分。

白鬼筆的折干率僅為5%左右，可食用部分不足30%[16]，近七成菌托和孢子體采摘后丟棄，同科的竹蓀屬部分真菌的菌托中含有豐富的氨基酸、維生素以及多糖等物質(zhì)，其多糖物質(zhì)有抗腫瘤作用[19-20]。目前竹蓀屬的研究較多且深入，鬼筆屬的成分研究較少，且因年代久遠，實驗條件有限，測出成分并不全面。加上大部分食用菌多在春、夏、秋三季生長，而白鬼筆則在生長食用菌產(chǎn)量較低的深秋，因此開發(fā)白鬼筆作為常用的食用菌可彌補常見食用菌在深秋產(chǎn)量較低的缺點。本實驗擬對未見諸報道的白鬼筆菌蓋、菌柄、菌托3 個部位的成分進行對比性研究，對3 個部位先后用石油醚及無水乙醇進行提取，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測其成分，通過更換色譜柱、調(diào)整升溫程序等優(yōu)化峰形，分析檢出物功效，研究結(jié)果擬為尋找白鬼筆菌蓋、菌托的利用價值、拓展白鬼筆的合理利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白鬼筆菌蛋鮮品采于貴州省都勻市斗篷山村，裝于無菌瓶中于4 ℃條件下保存。經(jīng)貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院湯洪敏教授鑒定為白鬼筆；石油醚（分析純，沸程60～90 ℃）、無水乙醇（分析純） 成都金山化學(xué)試劑有限公司；針筒式濾膜過濾器（有機系，直徑13 mm，孔徑0.45 μm） 上海興亞凈化材料廠。

1.2 儀器與設(shè)備

BM252C攪拌機 廣州美的精品電器制造有限公司；K Q-1000超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；6890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、HP-INNOWAX毛細管柱 美國安捷倫科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 化學(xué)成分的提取

將保存2 d的白鬼筆菌蛋鮮品置于室溫條件 下， 滴少量水，待菌蛋完全長開后將菌蓋、菌柄、菌托分離，并于40 ℃烘至恒質(zhì)量，攪拌器粉碎，各取6 g，分別用100 mL石油醚浸泡，于超聲波提取器中進行超聲提取，條件為：超聲波頻率40 kHz、處理時間30 min、處理溫度30 ℃；減壓濃縮得石油醚提取物，重復(fù)3 次，合并提取物；殘渣用無水乙醇分別進行提取，用量及操作同石油醚，得乙醇提取物。

1.3.2 化學(xué)成分的鑒定

用少量石油醚、無水乙醇分別溶解所得3 個部位石油醚提取物、乙醇提取物，用過濾器分別抽取1 mL，置于進樣瓶中進樣，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行測定。

1.3.3 氣相色譜條件

HP-INNOWAX極性柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；進樣口溫度260 ℃；柱箱溫度220 ℃；程序升溫：60 ℃保持2 min，以10 ℃/min升至160 ℃，保持6 min，以3 ℃/min升至220 ℃，保持17 min；載氣（He）流速1.3 mL/min；進樣量1.0 μL；分流比10∶1。

1.3.4 質(zhì)譜條件

電子電離源；電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；石油醚提取物溶劑延遲時間4 min；乙醇提取物溶劑延遲時間8 min；質(zhì)量掃描范圍m/z 50～500。

1.4 數(shù)據(jù)處理

通過NIST 08譜庫對各組分質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行檢索，篩選匹配度在80%以上成分，并經(jīng)人工解析，確定各組分，含量用氣相色譜峰面積歸一化法計算，用Microsoft Excel 2003軟件對數(shù)據(jù)進行編輯。

2 結(jié)果與分析

黔產(chǎn)白鬼筆3 個部位石油醚提取物及乙醇提取物的氣相色譜分別見圖1、2。黔產(chǎn)白鬼筆3 個部位石油醚提取物及乙醇提取物的化學(xué)成分檢測結(jié)果分別見表1、2。

圖1 白鬼筆3個部位石油醚提取物氣相色譜對比圖Fig.1 GC chromatograms of petroteum ether extracts from three parts of Phallus impudicus L.

圖2 白鬼筆3個部位乙醇提取物氣相色譜對比圖Fig.2 GC chromatograms of ethyl alcohol extracts from three parts of Phallus impudicus L.

表1 白鬼筆3 個部位石油醚提取物化學(xué)成分鑒定Table 1 Chemical composition of petroleum ether extracts fromthree parts of Phallus impudicus L.

續(xù)表1

如表1所示，石油醚提取物共檢出35 種成分，菌蓋檢出24 種，菌柄檢出18 種，菌托檢出18 種，成分在有關(guān)白鬼筆的研究中未見諸報道。菌蓋、菌柄、菌托的石油醚提取物的檢出量分別占其總量的96.65%、96.86%、95.79%。脂肪酸所占比例最高，檢出量分別占3 個部位峰面積的90.91%、93.67%、82.73%，不飽和脂肪酸檢出量分別占3 個部位峰面積的81.14%、67.71%、41.10%。3 個部位中均檢出的二丁基羥基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT），BHT為脂溶性酚類抗氧化劑，作為食品添加劑能延遲食物的酸敗，食物中最大使用量為0.02%[19]，菌蓋、菌柄、菌托中的BHT檢出量呈遞增趨勢，說明菌托具有較強的抗氧化力；順,順-9,12-十八碳二烯酸檢出量分別占3 個部位提取物總峰面積的20.68%、49.24%、8.45%，該成分屬人體必需脂肪酸之一，存在于多種食用植物油中，可促進飽和脂肪酸及由其所衍生的脂類、膽甾醇等在血液中的運行，以減少沉積在血管壁上的可能性，達到防止動脈硬化的目的[20]；黎璐等[23]測定出長裙竹蓀中，菌蓋、菌柄、菌托3 個部位的石油醚提取物中順,順-9,12-十八碳二烯酸的分別占總峰面積的36.58%、21.40%、33.81%，由此可見白鬼筆富含不飽和脂肪酸，且并不比竹蓀中的含量低，白鬼筆具有較大的保健功效。

表2 白鬼筆3個部位乙醇提取物化學(xué)成分鑒定Table 2 Chemical composition of ethyl alcohol extracts fromthree parts of Phallus impudicus L.

如表2所示，乙醇提取物共檢出38 種成分，菌蓋檢出26 種，菌柄檢出28 種，菌托檢出12 種，除苯乙醛外，成分在白鬼筆的研究中未見諸報道。菌蓋、菌柄、菌托的乙醇提取物的檢出量分別占其總量的88.04%、89.67%、73.30%。酯類含量最高，檢出量分別占總峰面積的42.10%、38.03%、51.98%，其中又以鄰苯二甲酸二異丁酯（1,2-benzenedicarboxylic acid, bis (2-methylpropyl) ester，DIBP）以及鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）的含量最 高，二者在2 種提取物中均被檢出，乙醇提取物中2 種物質(zhì)的檢出量總和分別為23.15%、22.06%、50.06%，DIBP及DBP屬于鄰苯二甲酸酯類（phthalate esters，PAEs）物質(zhì)，是一種趨避劑[25]及雌性激素[26]；菌托的乙醇提取物中PAEs的相對峰面積占總峰面積的一半，這或許能解釋白鬼筆在生長過程中不被爬行類昆蟲蠶食。我國除部分地區(qū)使用白鬼筆菌蛋泡酒外，大部分地區(qū)在采摘白鬼筆菌柄后將菌托丟棄，可以考慮將白鬼筆菌托制成驅(qū)避劑加以利用。值得注意的是，在乙醇提取物中，異山梨醇在菌柄及菌托中被檢出，分別占檢出量的1.11%、11.02%，用于治療腦水腫及青光眼。異山梨醇是一種有效的滲透性口服脫水利尿藥，在國外已經(jīng)應(yīng)用于臨床[22]；另一物質(zhì)α-吡咯烷酮，檢出量分別占菌蓋、菌柄峰面積的4.71%、5.52%，為腦復(fù)康藥品的主要成分，為氨酪酸的同類物，具有激活、保護和修復(fù)腦細胞的作用，能改善腦缺氧、活化大腦細胞、提高大腦中ATP/ADP比值，提高學(xué)習(xí)記憶及思維活動的能力[23]。

3 結(jié) 論

本實驗對黔產(chǎn)白鬼筆的菌蓋、菌柄、菌托3 個部位的石油醚提取物及乙醇提取物共檢出67 種化學(xué)成分。除苯乙醛外，其余66 種成分在有關(guān)白鬼筆的研究中未見報道。其中檢測出的BHT、順,順-9,12-十八碳二烯酸、異山梨醇、α-吡咯烷酮、煙酰胺、DIBP及DBP等成分具有一定的功效，根據(jù)這些成分在3 個部位中含量的高低，將菌蓋及菌柄作為食用，具有一定保健作用；菌托可以考慮制作為爬行類昆蟲的趨避劑，白鬼筆在采摘后被丟棄的菌托部位可以據(jù)此進行回收利用。

檢測出的風(fēng)味物質(zhì)共有9 種，分別是己酸、苯乙醛、5-甲基糠醛[27]、1-己醇、1-庚醇、1-辛醇、1-壬醇、2-呋喃甲醇、十六酸乙酯[28]，這些成分有可能構(gòu)成了白鬼筆獨特的白蘿卜清香的風(fēng)味。

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Chemical Composition Analysis of Extracts from Different Parts of Phallus impudicus L. Growing in Guizhou Province

LI Wenli1, LI Lu1, TANG Hongmin1,2,*
(1. College of Chemistry and Environmental Science, Guizhou Minzu University, Guiyang 550025, China; 2. Guizhou Institute of Ethnic Medicine, Guizhou Minzu University, Guiyang 5 50025, China)

Objective: To find out and expand the utilization potential of Phallus impudicus L. by analyzing the chemical composi tion of petroleum ether and ethanol extracts from its pileus, stipe and volva. Methods: The volatile components of the pileus, stipe and volva of Phallus impudicus L. were obtained by successive extraction with petroleum ether and ethanol under room temperature (25–30 ℃). The chemical composition of each extract was identified by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) using a polar column HP-INNOWAX. Temperature programming was as follows: initial temperature was set to 60 ℃hold for 2 min, followed by an increase of 10 ℃/min to 160 ℃ held for 6 min, and another increase of 3 ℃/min to 220 ℃ held for 17 min. The spectra were compared with those published in the mass spectral library NIST 08. Results: A total of 67 volatile components were identified from the two different solvent extracts of Phallus impudicus L., 66 compounds of which were first reported in this study. A total of 35 compounds were extracted with petroleum ether from Phallus impudicus L., 24, 18 and 18 of which were identified from the extracts of pileus, stipe and volva, respectively. A total of 38 components were extracted from Phallus impudicus L. including 26, 28 and 12 compounds identified from the extracts of pileus, stipe and vo lva, respectively. Conclusions: The presence of 9,12-octadecadienoic acid (Z,Z)-, butylated hydroxytoluene, 1,2-benzenedicarboxylic acid, bis (2-methylpropyl) ester, isosorbide, 1,2-cyclopentanedione, 2-pyrrolidinone, niacinamide, 9,12-octadecadienoic acid, and ethyl ester can provide the scientific basis for reasonable utilization of Phallus impudicus L..

Phallus impudicus L.; petroleum ether extract; ethanol extract; gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS)

10.7506/spkx1002-6630-201602012

Q501

A

1002-6630（2016）02-0072-05

李文力, 黎璐, 湯洪敏. 黔產(chǎn)白鬼筆不同部位提取物的成分分析[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(2): 72-76. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201602012. http://www.spkx.net.cn

LI Wenli, LI Lu, TANG Hongmin. Chemical composition analysis of extracts from different parts of Phallus impudicus L. growing in Guizhou pr ovince[J]. Food Science, 2016, 37(2): 72-76. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201602012. http://www.spkx.net.cn

2015-03-30

國家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項目（31160013）；貴州省科技廳項目（黔科合J字LKM[2013]01號）

李文力（1970—），男，講師，學(xué)士，研究方向為分析化學(xué)。E-mail：xzkyc@mail.gznc.edu.cn

*通信作者：湯洪敏（1969—），女，教授，博士，研究方向為生物化學(xué)與分子生物學(xué)。E-mail：tanghm@gzmu.edu.cn