楊志勇，趙 赫，郝建國(guó)，王穆峰

(天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381)

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口蹄疫二價(jià)苗對(duì)荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

楊志勇，趙 赫，郝建國(guó)，王穆峰

(天津市奶牛發(fā)展中心，天津 300381)

[目的]研究口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響。[方法]2～9歲荷斯坦種公牛肌肉注射口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗后，統(tǒng)計(jì)分析注射前半個(gè)月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、凍精精子畸形率和凍精產(chǎn)量的差異性。[結(jié)果](1)2～9歲種公牛各時(shí)間段的射精量、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量無(wú)顯著差異(P>0.05)；注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個(gè)月和注射后第二周(P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他時(shí)間段(P<0.05)，其他各時(shí)間段之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。(2)2歲種公牛，在各時(shí)間段之間無(wú)顯著差異(P>0.05)；(3)5～6歲種公牛，注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個(gè)月 (P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他各時(shí)間段(P<0.05)，其他各時(shí)間段差異不顯著(P>0.05)。(4)7～9歲種公牛，注射后第二周的鮮精密度顯著低于注射后第三周(P<0.05)，其他各時(shí)間段差異不顯著(P>0.05)。[結(jié)論]口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛射精量、凍精活力和凍精產(chǎn)量無(wú)顯著影響，對(duì)鮮精活力、鮮精密度和凍精精子畸形率有一定影響，并對(duì)不同年齡段種公牛的影響有差異性。

口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗；種公牛；精液

口蹄疫是由口蹄疫病毒感染引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要感染對(duì)象為牛、羊、豬等偶蹄類家畜及野生偶蹄動(dòng)物，發(fā)病率極高，傳播速度極快，往往會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，被國(guó)際獸疫局和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織列為A 類傳染病之首，我國(guó)將其列為一類傳染病第一位[1]。根據(jù)我國(guó)《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》的相關(guān)規(guī)定[2]，國(guó)家對(duì)口蹄疫實(shí)行強(qiáng)制免疫，免疫方法為口蹄疫疫苗注射。本文統(tǒng)計(jì)分析了口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗注射前后2～9歲荷斯坦種公牛射精量、精液品質(zhì)和凍精產(chǎn)量的變化，從而探究口蹄疫二價(jià)苗注射對(duì)種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

數(shù)顯水浴鍋(TL402～420B，江蘇姜堰市醫(yī)療器械公司)，彩色攝像機(jī)(TK～C1481BEC，JVC JAPAN)，鏡檢加熱器(NFV52，富士平工業(yè)株式會(huì)社)，相差顯微鏡(BX41，OLYMPUS JAPAN)，密度儀(ACCUCELL，IMV FRANCE)分析天平(ER～108A，AND JAPAN)，精液二次稀釋裝置(FA～435，F(xiàn)HK JAPAN)，全自動(dòng)細(xì)管精液冷凍儀(EUROTHERM 2704，IMV FRANCE)，超凈工作臺(tái)(DL～CJ～1ND～Ⅱ，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司)，高壓滅菌器(SS～325，TOMY JAPAN)，恒溫培養(yǎng)箱(MIR～260，三洋電機(jī)株式會(huì)社)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

15頭體格健壯、性欲旺盛、正常進(jìn)行冷凍精液生產(chǎn)的荷斯坦種公牛，年齡2～9歲，統(tǒng)一進(jìn)行飼養(yǎng)、采精，自由飲水和運(yùn)動(dòng)。飼養(yǎng)管理參照《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》(NY/T1446-2007)[3]進(jìn)行。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料及處置方法

秋季，口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗(以下稱口蹄疫二價(jià)苗)，種公牛頸部肌肉注射，成年牛2mL/頭。

1.4 精液采集、質(zhì)量檢測(cè)和冷凍精液制作

口蹄疫二價(jià)苗注射前后，嚴(yán)格按照《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》(NY/T1234-2006)[4]對(duì)種公牛進(jìn)行精液采集，并對(duì)采取的精液進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)、稀釋、冷凍和儲(chǔ)存。成年種公牛采精頻率為2次/周，青年種公牛1次/周。

由采精人員進(jìn)行精液采集，室內(nèi)技術(shù)人員利用相差顯微鏡及相應(yīng)的顯像系統(tǒng)進(jìn)行鮮精活力檢查，并通過(guò)密度儀來(lái)檢測(cè)鮮精密度，再利用分析天平稱量精液采集管和精液的重量來(lái)計(jì)算射精量。將鮮精活力達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的精液用我站配置的專用稀釋液進(jìn)行稀釋，放置4℃冷柜中平衡，并通過(guò)精液二次稀釋裝置對(duì)其進(jìn)行二次稀釋。然后，進(jìn)行分裝、打印、冷凍，并將凍精產(chǎn)品暫時(shí)儲(chǔ)存起來(lái)。待經(jīng)過(guò)型式檢驗(yàn)合格后，方可儲(chǔ)存于相應(yīng)的液氮罐中，并放置于冷凍精液儲(chǔ)存庫(kù)中長(zhǎng)期貯存。

1.5 凍精產(chǎn)品型式檢驗(yàn)

嚴(yán)格按照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《牛冷凍精液》(GB 4143-2008)[5]進(jìn)行，包括鮮精活力、凍精活力、凍精精子畸形率(簡(jiǎn)稱“畸形率”，下同)等。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0 One～Way ANOVA進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行Duncan檢驗(yàn)，各時(shí)間段數(shù)據(jù)均以“Mean±SD”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)2～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。從表1中我們可以看出，注射前半個(gè)月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量(簡(jiǎn)稱“產(chǎn)量”，下同)差異不顯著(P>0.05)。而注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個(gè)月和注射后第二周(P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他各時(shí)間段(P<0.05)，其他各時(shí)間段差異不顯著(P>0.05)。

表1 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)2～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ， 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)。

2.2 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。從表2中我們可以看出，注射前半個(gè)月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精活力、鮮精密度、凍精活力、產(chǎn)量和畸形率差異不顯著(P>0.05)。

表2 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)2歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ； 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)

2.3 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)5～6歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3中我們可以看出，注射前半個(gè)月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精密度、凍精活力和產(chǎn)量差異不顯著(P>0.05)。而注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個(gè)月 (P<0.05)，注射后第二周的畸形率顯著高于其他各時(shí)間段(P<0.05)，其他各時(shí)間段差異不顯著(P>0.05)。

表3 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)5～6歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ； 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)

2.4 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)7～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。從表4中我們可以看出，注射前半個(gè)月、注射后第一周、注射后第二周、注射后第三周和注射后第四周的射精量、鮮精活力、凍精活力、產(chǎn)量和畸形率差異不顯著(P>0.05)。而注射后第二周的鮮精密度顯著低于注射后第三周(P<0.05)，其他各時(shí)間段差異不顯著(P>0.05)。

表4 口蹄疫二價(jià)苗對(duì)7～9歲種公牛冷凍精液生產(chǎn)的影響

注：表中同行數(shù)據(jù)肩注字母相同差異不顯著 (P>0.05) ； 同行數(shù)據(jù)肩注字母不同差異顯著 (P<0.05)

3 討論

國(guó)家對(duì)口蹄疫實(shí)行強(qiáng)制免疫，主要措施是口蹄疫疫苗注射，而這也是種公牛站防疫工作的重中之重。種公牛24～36月齡達(dá)到體成熟，3～6歲時(shí)是利用的最佳年齡，隨著年齡的增長(zhǎng)，公牛的性欲與精液品質(zhì)開(kāi)始下降[6]。所以，本試驗(yàn)選取2～9歲荷斯坦種公牛來(lái)研究口蹄疫二價(jià)苗注射對(duì)其冷凍精液生產(chǎn)的影響，并分析了其對(duì)不同年齡段種公牛影響的差異性。

對(duì)所有試驗(yàn)公牛來(lái)說(shuō)，在射精量、鮮精密度、凍精活力、凍精產(chǎn)量方面差異不顯著，而注射后第一周的鮮精活力顯著降低，注射后第二周的畸形率顯著升高。這表明，口蹄疫二價(jià)苗注射后，首先導(dǎo)致鮮精活力下降，然后是畸形率升高，這種影響有先后順序，影響時(shí)間均為一周，而在其他方面無(wú)顯著影響。但對(duì)不同年齡段的試驗(yàn)公牛影響又不盡相同。相同之處是對(duì)射精量、凍精活力、凍精產(chǎn)量均無(wú)顯著影響。不同之處是，2歲種公牛的其他方面也無(wú)顯著影響；5～6歲種公牛注射后第一周的鮮精活力顯著低于注射前半個(gè)月，第二周的畸形率顯著高于其他時(shí)間段，鮮精密度無(wú)顯著差異； 而7～9歲種公牛注射后第二周的鮮精密度顯著低于第三周，鮮精活力、畸形率無(wú)顯著差異。這表明，口蹄疫二價(jià)苗免疫注射對(duì)2歲種公牛精液生產(chǎn)無(wú)顯著影響。而對(duì)于7～9歲種公牛，注射后第二周鮮精密度到第三周有一個(gè)上升；雖然注射后第一周與第二周之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，但試驗(yàn)數(shù)據(jù)平均值有下降的趨勢(shì)，也就是說(shuō)鮮精密度有下降再上升的趨勢(shì)。并且，對(duì)5～6歲種公牛影響最大，首先是鮮精活力下降，然后是畸形率升高，這種影響有先后順序，但影響時(shí)間均為一周，而在其他方面無(wú)顯著影響。

綜上所述，口蹄疫O型、亞洲Ⅰ型二價(jià)滅活疫苗注射對(duì)荷斯坦種公牛射精量、凍精活力和凍精產(chǎn)量無(wú)顯著影響，對(duì)鮮精活力、鮮精密度和凍精精子畸形率有一定影響，并對(duì)不同年齡段種公牛的影響有差異性。而這種影響可能與疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對(duì)動(dòng)物細(xì)胞具有毒性作用有關(guān)[7]，也可能與口蹄疫疫苗免疫應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。對(duì)不同年齡段種公牛產(chǎn)生不同的影響，這可能與不同生理階段的生殖機(jī)能特點(diǎn)有關(guān)，其影響機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

荷斯坦牛是世界上主要的奶用牛品種，荷斯坦種公牛的后裔女兒具有優(yōu)良的產(chǎn)奶性能。由于人工授精和冷凍精液技術(shù)的普及，一頭種公牛一年可以在全國(guó)各地產(chǎn)生上萬(wàn)的后代。而口蹄疫傳播速度快、發(fā)病率高，對(duì)奶牛生產(chǎn)性能危害嚴(yán)重；并且，口蹄疫病毒感染動(dòng)物呼出物、唾液、糞便、尿液、乳、精液及肉和副產(chǎn)品均可帶毒，康復(fù)期動(dòng)物可帶毒[2]，這導(dǎo)致種公?？谔阋咭卟〉挠绊懛秶鷮⒏鼜V、危害更加嚴(yán)重。所以，種公牛口蹄疫疫苗注射等口蹄疫防疫工作也更加重要！

[1] 朱二勇，口蹄疫的研究進(jìn)展[J].中國(guó)奶牛,2009,25(10)：40-41.

[2] 《口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范》農(nóng)醫(yī)發(fā)[2007]12號(hào)

[3] 《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》(NY/T1446-2007)[4] 《牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范》(NY/T1234-2006)

[5] 《牛冷凍精液》(GB 4143-2008)

[6] 翁春玲,佟國(guó)軍,隋明. 影響種公牛精液品質(zhì)的因素[J].黑龍江動(dòng)物繁殖,2009,17(2)：42-44.

[7] 蔣文俊,李華春,李樂(lè)等.口蹄疫疫苗研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī),2004,36 (5)：42-43.

The Effect of Foot-and-Mouth Disease Bivalent Vaccine on the Production of Frozen Semen of Holstein Bull

Yang Zhi-yong,Zhao He,Hao Jian-guo,Wang Mu-feng

(TheDiaryCattleDevelopmentCenterinTianjin,Tianjin, 300381,China)

【Objective】 The aims of this paper was to study the effect of injection of Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine on the production of frozen semen of Holstein bull.【Method】 After intramuscular injecting Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine into Holstein bull of 2～9 years old, the data were collected at two weeks before the injection, the first week, the second week, the third week and the fourth week after the injection, then it was analyzed about the difference of the volume per ejaculate, the sperm motility, the concentration of fresh semen, the frozon sperm motility, the abnormal frozon sperm percentage and the production of frozen semen.【Result】In Holstein bull of 2～9 years old, it had no significant difference for the volume per ejaculate, the concentration, the sperm motility and the production of frozen semen (P>0.05); the sperm motility of fresh semen of the first week after the injection was significantly lower than that of the second week and two weeks before the injection (P<0.05), and the abnormal sperm percentage was higher than that of other periods (P<0.05), but it had no significant difference in the other periods (P>0.05). In bull of 2 years old, it had no significant difference in each period (P>0.05). In bull of 5～6 years old, the sperm motility of fresh semen of the first week after the injection was significantly lower than that of two weeks before the injection (P<0.05), and the abnormal sperm percentage was higher than that of other periods (P<0.05), but it had no significant difference in the other periods (P>0.05). In bull of 7～9 years old, the concentration of fresh semen of the second week after injection was significantly lower than that of the third week (P<0.05), and it had no significant difference in the other periods (P>0.05).【Conclusion】 It had no significantly differences in the volume per ejaculate, the sperm motility and the production of frozen semen of Holstein bull when injecting the Inactivated Foot-and-Mouth Disease (type O and Asia 1) Bivalent Vaccine, but it had significantly differences in the abnormal sperm percentage of frozen semen, the sperm motility and the concentration of fresh semen in different ages.

Foot-and-Mouth Disease (type O); Inactivated Bivalent Vaccine (Asia 1); bull; semen

2016-02-10

2016-03-09

楊志勇(1980-)，男，碩士畢業(yè)，獸醫(yī)師，主要從事種公牛凍精生產(chǎn)和牛疫病防控工作

S852.5

A

1001-9111(2016)03-0030-04