劉軍河 魏湘瓔 李娜

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淄博地區(qū)雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌的耐藥特點(diǎn)

劉軍河 魏湘瓔 李娜

（山東省淄博市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 255000）

為了解淄博地區(qū)雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌的耐藥特點(diǎn)及其耐藥基因攜帶特點(diǎn)。本研究于2016年5月對(duì)淄博地區(qū)兩個(gè)雞場(chǎng)糞便棉拭子采集，分離耐頭孢噻肟大腸桿菌，并對(duì)15種抗生素進(jìn)行藥敏檢測(cè)。PCR檢測(cè)qnrA、qnrB、qnrS、aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因。共收集34份糞便棉拭子，分離14株耐喹諾酮大腸桿菌，分離率47%。所有耐喹諾酮大腸桿菌呈現(xiàn)多重耐藥，但都對(duì)碳青霉烯類藥物敏感。12株菌攜帶qnrS基因，攜帶率最高為85.7%。雞源耐喹諾酮大腸桿菌分離率高耐藥譜廣，給臨床中應(yīng)用抗生素的治療帶來困難。

雞源 大腸桿菌 氟喹諾酮 耐藥性

氟喹諾酮類藥物的殺菌機(jī)制是通過抑制細(xì)菌DNA回旋酶，從而干擾DNA復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡[1]。其抗菌譜廣，且與其他抗菌藥物無交叉耐藥性，故常作為臨床治療腸道致病菌感染的首選藥物。由于其在畜牧生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致目前其臨床耐藥菌株日益增多。

大腸桿菌對(duì)氟喹諾酮類藥物產(chǎn)生耐藥機(jī)制主要是質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥(PMQR)機(jī)制，由qnrA，qnrB，qnrS，aac-(6’)-Ib-cr和qepA等參與[2]。本研究以淄博地區(qū)雞源大腸桿菌為研究對(duì)象，旨在檢測(cè)臨床分離耐藥大腸桿菌耐氟喹諾酮類抗生素基因的檢測(cè)，為耐藥機(jī)制研究提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品采集 2015年5月淄博地區(qū)兩個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)采集34份肛門棉拭子。

1.1.2 主要試劑 伊紅美藍(lán)瓊脂、麥康凱瓊脂、Mueller-Hintion瓊脂 (MH)，細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒均購(gòu)自天根生物科技有限公司。

1.2.3 藥敏紙片 氨芐西林(10μg/片)，阿莫西林(20μg/片)、頭孢噻吩(30μg/片)、氨曲南(30μg/片)、頭孢噻肟(30μg/片)、復(fù)方新諾明(25μg/片)、氯霉素(30μg/片)、鏈霉素(10μg/片)、卡那霉素(30μg/片)、慶大霉素(10μg/片)、諾氟沙星(10μg/片)、環(huán)丙沙星(5μg/片)、四環(huán)素(30μg/片)、亞胺培南(10μg/片)、美羅培南(10μg/片)均購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品分離鑒定 向雞糞便棉拭子離心管中加入500μl的生理鹽水，混勻后，劃線接種于含環(huán)丙沙星的伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18h。典型菌落接種于麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18h。每個(gè)平板只挑取一個(gè)菌落。PCR擴(kuò)增大腸桿菌16SrRNA保守區(qū)域，產(chǎn)物進(jìn)行克隆測(cè)序鑒定大腸桿菌。

1.2.2 耐藥基因的檢測(cè) 4對(duì)特異性引物序列與反應(yīng)程序參考文獻(xiàn)[3]，PCR檢測(cè)qnrA、qnrB、qnrS、aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因的攜帶情況。

2 結(jié)果

2.1 雞耐氟喹諾酮大腸桿菌的分離 從34份豬糞便棉拭子中共分離到14株耐氟喹諾酮大腸桿菌，分離率為47%。

2.2 耐氟喹諾酮大腸桿菌耐藥性 14株耐氟喹諾酮大腸桿菌均呈現(xiàn)多重耐藥性，對(duì)環(huán)丙沙星與諾氟沙星的耐藥率高達(dá)100%。對(duì)氨芐西林和阿莫西林的耐藥率高達(dá)100%，85.7%。對(duì)頭孢菌素類抗生素如頭孢噻吩頭孢噻肟為71.4%和57.1%。但對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物均表現(xiàn)敏感。見附表。

附表 耐藥率分析表

抗生素耐藥(n)百分比抗生素耐藥(n)百分比 氨芐西林14100慶大霉素1071.4 阿莫西林1285.7環(huán)丙沙星14100 頭孢噻吩1071.4諾氟沙星14100 頭孢噻肟857.1四環(huán)素857.4 復(fù)方新諾明1178.6氨曲南1178.6 氯霉素535.7亞胺培南00.0 鏈霉素750.0美羅培南00.0 卡那霉素857.1

2.3 PCR檢測(cè)結(jié)果 qnrS和qnrB基因PCR檢測(cè)得到與目的片段大小一致的條帶。其中12株菌攜帶qnrS基因，攜帶率最高為85.7%；2株菌攜帶qnrB基因，攜帶率為14.3%。沒有菌株攜帶qnrA，aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因(圖1、圖2)。

圖1 部分qnrS基因PCR擴(kuò)增凝膠電泳結(jié)果(目的條帶為417bp)

圖2 2株qnrB基因PCR擴(kuò)增凝膠電泳結(jié)果(目的條帶為617bp)

3 討論

（1）近年來發(fā)現(xiàn)細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥性出現(xiàn)一些新的耐藥機(jī)制，即質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥機(jī)制。質(zhì)粒將攜帶的耐藥基因轉(zhuǎn)移到其他菌屬，從而促進(jìn)了耐藥基因的水平傳播。（2）1998年Martinez[4]首次證實(shí)了質(zhì)粒在喹諾酮類耐藥性方面的作用，經(jīng)過分析其中１個(gè)命名為qnrA的基因貢獻(xiàn)了質(zhì)粒介導(dǎo)的FQs耐藥性。隨后，qnrS、qnrB、qnrC和qnrD等也被相繼報(bào)道。本研究中所調(diào)查的淄博雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌主要攜帶qnrS基因，攜帶率最高為85.7%；2株菌攜帶qnrB基因，攜帶率為14.3%。沒有菌株攜帶qnrA、aac-(6’)-Ib-cr耐藥基因。提示質(zhì)?；騫nrS可能在介導(dǎo)大腸桿菌耐氟喹諾酮類藥物的機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用。

總之，淄博雞源耐氟喹諾酮大腸桿菌耐藥譜廣，質(zhì)?；騫nrS在介導(dǎo)大腸桿菌耐氟喹諾酮類藥物的主要機(jī)制，并且在氟喹諾酮耐藥性的散播中發(fā)揮重要作用。

[1] 陳杖榴. 獸醫(yī)藥理學(xué)2版[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2001: 234-238．

[2] 潘渭涓, 陳祥, 王曉泉. 1993-2008年禽源大腸桿菌和沙門菌對(duì)喹諾酮類藥物耐藥性分析[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào), 2009, 25(7): 630-635.

[3] 王宏棟, 徐國(guó)鋒, 矯薇薇等. 豬源氟喹諾酮耐藥大腸桿菌通過接合水平傳遞耐藥性的研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2016, 47(4): 805-811.

[4] Matinez ML, Pascual A, Jacoby GA. Quinolone resistance from a transferable plasmid[J]. Lancet, 1998, 351: 797-799.

（2016–07–15）

S859.79+7

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1007-1733(2016)09-0021-02