周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，郭宵飛，劉曉鋼，南曉潔，李艷婷，江山，張秋虎

(山西省農業(yè)科學院食用菌研究所，太原 030031)

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雙孢蘑菇菌種質量檢驗規(guī)程

周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，郭宵飛，劉曉鋼，南曉潔，李艷婷，江山，張秋虎

(山西省農業(yè)科學院食用菌研究所，太原 030031)

食用菌菌種是食用菌生產的基礎，起著非常重要的巨大的作用。雙孢蘑菇菌種作為食用菌生產資料進入商業(yè)活動中，具有商品的屬性。介紹了雙孢蘑菇菌種商品質量的檢驗內容和要求，分析了菌種質量檢驗中的重點操作規(guī)范，提出了雙孢蘑菇菌種商品質量檢驗規(guī)程，作為山西省地方標準推薦，供山西的廣大雙孢蘑菇生產者和菌種生產者以及關聯(lián)業(yè)務人員參考應用。

雙孢蘑菇；菌種商品；質量檢驗

隨著我國經(jīng)濟實力的大發(fā)展，工農業(yè)產量產值在世界中占有越來越重要的位置，我國的食用菌產業(yè)不斷擴大，生產總量達到3千萬噸左右，在世界食用菌生產量中占據(jù)第一位[1]。食用菌生產量的增長，菌種是至關重要的。作為生產資料的菌種進入商業(yè)活動中具有商品的屬性，就有商品的質量標準和相應的檢驗規(guī)則。

雙孢蘑菇(Aagaricusbisporus)是主要的食用菌產品之一，微生物分類屬于擔子菌亞門(Basidiomycotina)、傘菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇屬(Agaricus)的草腐菌，在全國乃至世界上都是占有重要地位的，對食用菌產業(yè)發(fā)展具有重大的影響。雙孢蘑菇的菌種作為生產資料是其雙孢蘑菇生產的重要環(huán)節(jié)，是生產量和產品質量的第一關鍵。菌種的生產技術要求和規(guī)范以及菌種的商品質量標準和檢驗，直接影響食用菌的生產和產品質量。為了實現(xiàn)雙孢蘑菇菌種生產的技術規(guī)范化，質量標準化，推進我國特別是山西食用菌產業(yè)走向現(xiàn)代化，維護菌種生產者、經(jīng)營者和使用者的合法權益，根據(jù)我國國家機關，質量管理部門的有關標準、規(guī)范，我們系統(tǒng)地，精準地將雙孢蘑菇的菌種生產技術與質量管理標準總結出來，供廣大雙孢蘑菇企業(yè)，栽培農戶者，菌種生產者以及管理者參考應用。本文系統(tǒng)地介紹雙孢蘑菇菌種的質量檢驗標準。

1 我國雙孢蘑菇及其菌種生產與質量標準介紹

我國各級政府以及食用菌管理部門都非常重視食用菌產業(yè)的發(fā)展和產品質量，制定了很多相關的法規(guī)標準，技術規(guī)范等，監(jiān)查管理有關食用菌產業(yè)的生產、流通、加工、銷售各個環(huán)節(jié)[2]。雙孢蘑菇也有很多相應的國家標準，行業(yè)標準以及各省的地方標準和企業(yè)標準[3]。我們在制定本技術規(guī)范時也參照了很多國家有關標準和雙孢蘑菇的有關技術標準，如《中華人民共和國種子法》；《食用菌菌種管理辦法》；《GB/T 12728-2006食用菌術語》；《GB/T 23190-2008雙孢蘑菇》；《NY/T 528-2010食用菌菌種生產技術規(guī)程》；《NY/T 1846-2010食用菌菌種檢驗規(guī)程》；《NY/T 1731-2009食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范》；《GB/T 19171 雙孢蘑菇菌種》；《GB/T 7096 食用菌衛(wèi)生標準》；《GB191-1990 包裝儲運圖示標準》；《GB4789.28食品微生物學檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質量要求》；《NY/T1097-2006食用菌菌種真實性鑒定 酯酶同工酶電泳法》；《GB9688 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標準》；《DB23 T8 58-2005 雙孢蘑菇菌種生產技術規(guī)程》；《DB31 T2 42-2000 食用菌菌種 雙孢蘑菇》等等。在本文中引用的有關上述標準中的條文，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤內容)或改訂版，均不適用本規(guī)程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本規(guī)程。

2 菌種商品生產的工藝流程

菌種生產所包含的內容一般是菌種生產制作涉及到的，生產條件，設備，人員，技術，操作，質量檢驗，入庫，運輸，儲藏等全過程。

菌種商品生產的工藝流程包括，生產場地選擇——環(huán)境水源整備——廠區(qū)布局與廠房設置——設備與設施——生產原料儲備——衛(wèi)生檢驗與消毒——培養(yǎng)基制成——分裝——滅菌——冷卻——接種——培養(yǎng)(檢驗)——成品——檢驗合格——入庫管理

3 菌種生產場(機關，企業(yè))的責任與義務

菌種場生產食用菌菌種，并作為商品，食用菌的生產資料銷售販賣，必須經(jīng)過國家有關管理部門審批合格，持有生產，銷售食用菌菌種的資質證明[4]。

生產或出售菌種的企業(yè)或科研單位，對所生產的菌種以及出售的菌種商品的質量負有責任，并有義務將所生產的菌種商品的使用方法和注意事項向菌種使用者說明。

4 菌種產品質量檢驗要求

4.1 菌種質量檢驗(包括母種，原種，栽培種)要符合GB/T19171[5]， NY/T 528-2010[6]， NY/T 1846-2010[7]。

4.2 菌種生產單位要配有專職的質量管理人員和質量檢測人員，這些人員應該經(jīng)過特殊的專業(yè)訓練，具有一定的專業(yè)資質、專業(yè)經(jīng)歷和檢測技能[4]。

4.3 菌種質量檢驗采取生產單位常規(guī)自檢和國家質量管理部門監(jiān)查檢測相結合的方式。生產單位制定質量管理規(guī)則，設立專職檢驗人員，按期進行質量檢驗，并對全部生產中的質量管理工作統(tǒng)一行使管理職責。菌種生產單位應與國家專管農產品質量和食用菌產品質量的有關單位積極配合，主動接受質量管理和檢測。

4.4 菌種質量檢驗的抽樣

4.4.1 質量檢驗的抽樣應具有代表性，按產品的批次進行。母種批次是指同一品種，接種時間，培養(yǎng)方法，培養(yǎng)條件的產品；原種，栽培種批次是指同一種源，制作方法，培養(yǎng)方法，培養(yǎng)條件的產品。

4.4.2 抽樣方法采取隨機抽取法，按批隨機抽取被檢樣品。母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時間分批編號，原種、栽培種按菌種來源、制種方法和接種時間分批編號。

4.4.3 母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%，5%，1%。但每批抽樣數(shù)量不得少于10支、瓶(袋)；超過100支、瓶(袋)的，可進行兩級抽樣(參照GB/T19171[5])。

4.5 菌種質量檢驗項目和檢驗方法(如表1所示)

表1 菌種質量檢驗項目和檢驗方法

表1續(xù)

4.5.1 微生物學實驗。表1中的菌絲培養(yǎng)過程中的雜菌檢驗采用培養(yǎng)物鏡檢，用放大倍數(shù)不低于10×40的光學顯微鏡對培養(yǎng)物的水封片進行觀察(參照NY/T1846-2010[7])，每一檢樣應觀察不少于30個視野。

4.5.2 細菌檢驗。取少量疑有細菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接入GB4789.28[8]中4.8規(guī)定的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25～28℃振蕩培養(yǎng)1～2天，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細菌污染；培養(yǎng)液澄清，為無細菌污染。

4.5.3 霉菌檢驗。取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無菌操作接入PDA中，25～28℃培養(yǎng)3～4天，觀察到雙孢菇以外的菌落，檢查是否有綠色，黑，紅，黃，灰等顏色的異常，或有異味出現(xiàn)，可認為有霉菌污染。必要時可以做水封片檢驗(參照NY/T1846-2010[7])。

4.5.4 菌絲生長速度測定(參照NY/T1846-2010[7]4.5執(zhí)行)。

母種：用直徑90mm的培養(yǎng)皿滅菌后，在無菌條件下倒入使用的(如PDA等)培養(yǎng)基20mL，制成平板，接種平板5個，25℃±1℃下培養(yǎng)，48h后觀察是否有污染發(fā)生，之后再培養(yǎng)7～10天，觀察并記錄菌絲每日生長量以及長滿平板天數(shù)。

原種和栽培種：使用培養(yǎng)基(培養(yǎng)基參照NY/T528-2010[6])如下任選1種。

腐熟麥桿或稻桿(干)77%，腐熟牛糞粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量62%±1%,pH7.5。

腐熟棉籽殼(干)97%，石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量55%±1%, pH7.5。

谷粒(小麥，谷子，玉米，高粱)98%，石膏粉2%,含水量50%±1%, pH7.5。

滅菌后接種，在25℃左右下培養(yǎng)，3日后進行首次觀察，以后每周觀察1次，菌絲長滿之前1周要每日觀察，記錄菌絲生長速度和長滿瓶或袋的天數(shù)。

4.5.5 菌種遺傳性鑒定(參照酯酶同工酶(Est)鑒定 NY/T1097-2006[9])。

取菌齡為15～20天的試管母種,刮取菌絲,按1∶3∶0.5的比例混合菌絲(g)、0.1mol/L磷酸緩沖液(mL)和石英砂(g),研磨成勻漿,臺式離心機10000r/min離心5min,取上清液,按5∶1∶1的比例混合上清液、40%蔗糖和0.01%溴酚藍溶液作為電泳樣品, 4℃下冷藏備用。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳。用pH8.9Tris-HCl緩沖液配制9%分離膠,用pH8.3Tris-甘氨酸作電極緩沖液。點樣75μL, 3℃下120V電泳20min后穩(wěn)壓200V,4h。用固藍RR鹽60mg, 0.1mol/L磷酸緩沖液(pH6.0) 80mLα-萘乙酯38mg和β-萘乙酯38mg溶于3mL丙酮配制的染色液染色,顯現(xiàn)酶譜,再根據(jù)特征帶分型。

4.5.6 品種栽培特性試驗。將被檢母種制成原種。栽培試驗要根據(jù)供試種類選擇適當培養(yǎng)基，接種后分3組(每組3m2)進行常規(guī)管理，同時將該母種的出發(fā)菌株設為對照，亦做同樣處理。根據(jù)表2所列項目，做好栽培記錄，統(tǒng)計檢驗結果。對比二者的檢驗結果，以時間計的檢驗項目中，被檢母種的任何一項時間較對照菌株推遲5天以上(含5天)者，為不合格；產量性狀差異顯著低于對照菌株者，為不合格；菇體外觀形態(tài)與對照明顯不同或畸形者，為不合格。

表2 母種栽培特性檢驗項目

4.5.7 各種菌種產品經(jīng)過上述質量檢驗，確認其遺傳類型與對照相同，再經(jīng)出菇試驗確定產量及品質等栽培農藝性狀合格，方可用于擴大繁殖或出售。

5 菌種商品的標簽，標志，包裝檢驗

5.1 菌種商品標簽、標志、包裝

作為商品的菌種產品，要逐一檢查后，貼上商品標簽。每支、瓶(袋)菌種都要貼有清晰的標簽、標志，進行良好的包裝。

5.2 菌種商品的標簽，標志，包裝檢驗

按照國家標準. GB191-1990 包裝儲運圖示標準》中的規(guī)定進行檢驗。

6 菌種檢驗合格的判定與檢驗檔案

6.1 根據(jù)按以上檢驗方法檢驗的結果判斷菌種商品是否合格。凡是全部符合質量檢驗標準的，判定為合格菌種商品，其中任何一項不符合質量檢驗標準的，判定為不合格菌種商品，不合格菌種商品不得出售。

6.2 菌種商品質量檢驗記錄建立檔案，并保存至少2年以上。

7 菌種商品質量保證書及使用說明書

7.1 凡是菌種商品，包括商業(yè)銷售、研究試驗轉讓、生產示范推廣等使用的菌種，其生產單位都要具有菌種產品質量保證書，以示菌種質量合格，并對產品承擔義務和責任，做到對使用者負責，對社會負責。

7.2 菌種商品應具備菌種使用說明書，以幫助使用者更好地生產，獲得更好的效益。

[1]張俊飚，李波. 對我國食用菌產業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀與政策思考[J]. 華中農業(yè)大學學報(社會科學版)，2012(5)：13-21.

[2]李賀，許修宏，王相剛. 我國食用菌技術標準的現(xiàn)狀、問題及對策研究[J]. 中國食用菌， 2015(3)：1-6.

[3]鄭素月，黃晨陽，張金霞. 我國食用菌質量標準化體系建設及實施概況[J].浙江食用菌，2009,17(3)：6-9.

[4]中國農業(yè)部. 食用菌菌種管理辦法(農業(yè)部令2015年第1號修訂) http://www.moa.gov.cn，20150506_4581023.htm，2015-05-06 11:07

[5]中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會. GB/T 19171-2003 雙孢蘑菇菌種[S].北京:中國標準出版社, 2003.

[6]中國農業(yè)部. NY/T 528-2010 食用菌菌種生產技術規(guī)程[S]. 北京:中國標準出版社， 2010.

[7]中國農業(yè)部. NY/T 1846-2010 食用菌菌種檢驗規(guī)程[S]. 2010.

[8]中國標準化委員會. GB4789.28 食品微生物學檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質量要求[S].北京:中國質檢出版社，2014.

[9]中國農業(yè)部. NY/T 1097-2006 食用菌菌種真實性鑒定 酯酶同工酶電泳法[S].2006.

[10]中國標準化委員會. GB/191-2008 包裝儲運圖示標志[S].北京:中國標準出版社， 2008.

Commodity Quality Inspection Items and Methods ofAgaricusbisporusSpawn

Zhou Lin, Guo Shang, Xiao Jinchuan, Zhao ZhaoLin,Guo Xiaofei, Liu Xiaogang，Nan Xiaojie, Li Yanting, Jiang Shan, Zhang Qiuhu

(Shanxi Provincial Academy of Agricultural Sciences,Institute of Edible Fungi, Taiyuan 030031)

The spawn is very important for development of edible fungus industry.Agaricusbisporusspawn as edible fungus production data to enter the commercial activity, has the attribute of commodity. This paper introduces the inspection contents and requirements ofAgaricusbisporusspawn quality. The rules for the inspection of product quality ofAgaricusbisporusspawn were put forward，and offers reference for the large number ofAgaricusbisporusproducer and the related service personnel.

Agaricusbisporus; Spawn commodity；Quality standard

房春果(1969-)，男，工程師，從事林業(yè)生產與林業(yè)科研工作，E-mail：346857294@qq.com。

2016-07-06

山西省煤基重點科技攻關項目(FT2014-03);山西省農科院博士基金 (YBSJJ1616)資助

S646.1+1

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作者簡介：周林(1958-)，男，博士，主要從事食用菌資源及菌根食用菌共生機理研究，食用菌生產技術與產品質量保證體系研究，E-mail：nkysyj301@126.com。

DOI.:11.13268/j.cnki.fbsic.2016.06.015